對蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)編碼的WSSV-miR66和WSSV-miR68在病毒感染中的作用.pdf

1、miRNA是在轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)的小非編碼RNA，能夠參與很多細(xì)胞過程的調(diào)控。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多病毒能夠編碼miRNA，執(zhí)行與病毒感染相關(guān)的功能，比如使病毒逃避宿主的防御系統(tǒng)、維持病毒的潛伏感染狀態(tài)，從而在病毒的生活史中起著重要作用。對蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)是一種能夠感染大多數(shù)甲殼類動物的致死性病原，我們實驗室研究發(fā)現(xiàn)WSSV能夠編碼40條不同的miRNA，這些miRNA（例如WSSV-miR211和WSSV-miR212）

2、已經(jīng)被證實能夠參與病毒的感染過程。本文在實驗室前期研究的基礎(chǔ)上，對WSSV編碼的WSSV-miR66和WSSV-miR68在WSSV感染中的作用進(jìn)行分析。
　　 采用NorthernBlot檢測，結(jié)果顯示W(wǎng)SSV-miR68在感染了WSSV的日本對蝦血細(xì)胞中表達(dá)。從病毒感染后的6h開始，一直到72h，都能檢測到WSSV-miR68的表達(dá)。我們通過使用反義寡核苷酸(AMO)抑制WSSV-miR68表達(dá)的方法，研究其在病毒感染中的作

3、用。結(jié)果表明，用WSSV-miR68特異的AMO注射對蝦后，WSSV-miR68的表達(dá)受到抑制，抑制效果持續(xù)到36h;此時，日本對蝦血細(xì)胞中的WSSV復(fù)制在36h之前受到抑制。在三次注射AMO的條件下，對WSSV復(fù)制的抑制仍然只能持續(xù)到病毒感染后的36h，抑制時間并沒有延長。死亡率分析顯示，注射一次AMO和注射兩次AMO對WSSV誘導(dǎo)的日本對蝦死亡的抑制效果是相似的，在病毒感染后的12h和24h，對蝦的死亡率顯著降低。通過預(yù)測，結(jié)果顯示

4、WSSV-miR68可與宿主和病毒的靶基因互作。
　　 研究表明，WSSV-miR66在病毒感染后的6h至72h都會在日本對蝦血細(xì)胞中表達(dá)。采用WSSV-miR66特異的AMO注射對蝦后，WSSV-miR66的表達(dá)受到抑制，對WSSV-miR66的抑制可持續(xù)到36h;與此同時，日本對蝦血細(xì)胞中的WSSV復(fù)制受到抑制。在病毒感染后24h，抑制WSSV-miR66的表達(dá)導(dǎo)致對蝦因感染W(wǎng)SSV的死亡率顯著降低。預(yù)測結(jié)果顯示，WSSV-