轉(zhuǎn)Bt基因玉米葉面微生物多樣性變化.pdf

1、近年來(lái),隨著轉(zhuǎn)Bt基因植物的大量環(huán)境釋放,轉(zhuǎn)基因作物的生態(tài)安全問(wèn)題越來(lái)越受人們的關(guān)注與重視.尤其是外源性基因(包括目的基因,標(biāo)記基因和啟動(dòng)子等)的插入打亂了原有的基因網(wǎng)絡(luò),可能對(duì)轉(zhuǎn)基因作物的生理生化過(guò)程或物理化學(xué)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響.本研究針對(duì)當(dāng)前轉(zhuǎn)Bt基因植物農(nóng)田生態(tài)安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)中關(guān)注的主要問(wèn)題,在2年大田栽培條件下以轉(zhuǎn)Bt基因玉米MON810和親本玉米DK647為試材,利用玉米苗期、拔節(jié)期、喇叭口期、抽雄期、抽絲期、乳熟期和完熟期的葉面樣品

2、分析大田自然狀態(tài)下葉面微生物群落變化.研究方法為磷脂脂肪酸標(biāo)記法和變性梯度凝膠電泳技術(shù),具體結(jié)果如下:
　　1、利用磷脂脂肪酸圖譜技術(shù)對(duì)2011年樣品葉面微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性進(jìn)行分析,共檢測(cè)到23種 PLFAs,以直鏈飽和脂肪酸和支鏈脂肪酸為主,不飽和脂肪酸和環(huán)丙烷脂肪酸種類(lèi)含量較少;葉面細(xì)菌PLFA含量大于真菌和放線菌占總PLFA含量的70％.不同時(shí)期間PLFA的種類(lèi)差別不大,Bt玉米葉面微生物總PLFA、細(xì)菌PLFA、真菌PL

3、FA的含量均小于非Bt玉米,玉米葉面環(huán)境中革蘭氏陰性菌的含量小于革蘭氏陰性菌.主成分分析結(jié)果表明苗期、乳熟期、完熟期在非Bt玉米和Bt玉米之間存在顯著差異(P＞0.05),其它時(shí)期Bt玉米和非Bt玉米間相似性較高,沒(méi)有顯著性差異.因此,轉(zhuǎn)Bt基因?qū)τ衩兹~面微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性的影響除個(gè)別時(shí)期,大部分時(shí)期都沒(méi)有表現(xiàn)出顯著性差異.
　　2、從目前已報(bào)道的文獻(xiàn)中選取4種不同的環(huán)境微生物DNA提取方法和不同細(xì)菌、真菌保守區(qū)序列擴(kuò)增引物進(jìn)行

4、研究,得出能夠獲得高質(zhì)量、大片段 DNA的土壤試劑盒提取方法以及細(xì)菌16S rRNA V3區(qū)擴(kuò)增引物F357/R518,真菌ITS序列擴(kuò)增引物ITS1-F/ITS4、ITS1-F/ITS2.這為后續(xù)DGGE的順利進(jìn)行提供了保障.
　　3、利用變性梯度凝膠電泳技術(shù)分析了Bt玉米和非Bt玉米的葉面微生物群落遺傳多樣性是否有差別,隨后的克隆和測(cè)序進(jìn)一步確定了葉面微生物群落中主要微生物種類(lèi)及特異性微生物種類(lèi).DGGE圖譜條帶測(cè)序結(jié)果顯示葉

5、面環(huán)境中不可培養(yǎng)的微生物占很大部分;2010年和2011年葉面細(xì)菌主要為4個(gè)菌門(mén),其中變形桿菌門(mén)(Proteobacteria)所占比例最大,然后是擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)、厚壁菌門(mén)(Firmicutes)和放線菌門(mén)(Actinobacteria);真菌主要為2大菌門(mén)子囊菌門(mén)(Ascomycota)和擔(dān)子菌門(mén)(Basidiomycota).玉米葉面微生物在2010年和2011年中的變化趨勢(shì)相似,2010年樣品中玉米葉面細(xì)菌