轉Bt基因玉米葉面微生物多樣性變化.pdf

1、近年來,隨著轉Bt基因植物的大量環(huán)境釋放,轉基因作物的生態(tài)安全問題越來越受人們的關注與重視.尤其是外源性基因(包括目的基因,標記基因和啟動子等)的插入打亂了原有的基因網(wǎng)絡,可能對轉基因作物的生理生化過程或物理化學結構產(chǎn)生影響.本研究針對當前轉Bt基因植物農(nóng)田生態(tài)安全風險評價中關注的主要問題,在2年大田栽培條件下以轉Bt基因玉米MON810和親本玉米DK647為試材,利用玉米苗期、拔節(jié)期、喇叭口期、抽雄期、抽絲期、乳熟期和完熟期的葉面樣品

2、分析大田自然狀態(tài)下葉面微生物群落變化.研究方法為磷脂脂肪酸標記法和變性梯度凝膠電泳技術,具體結果如下:
　　1、利用磷脂脂肪酸圖譜技術對2011年樣品葉面微生物群落結構多樣性進行分析,共檢測到23種 PLFAs,以直鏈飽和脂肪酸和支鏈脂肪酸為主,不飽和脂肪酸和環(huán)丙烷脂肪酸種類含量較少;葉面細菌PLFA含量大于真菌和放線菌占總PLFA含量的70％.不同時期間PLFA的種類差別不大,Bt玉米葉面微生物總PLFA、細菌PLFA、真菌PL

3、FA的含量均小于非Bt玉米,玉米葉面環(huán)境中革蘭氏陰性菌的含量小于革蘭氏陰性菌.主成分分析結果表明苗期、乳熟期、完熟期在非Bt玉米和Bt玉米之間存在顯著差異(P＞0.05),其它時期Bt玉米和非Bt玉米間相似性較高,沒有顯著性差異.因此,轉Bt基因對玉米葉面微生物群落結構多樣性的影響除個別時期,大部分時期都沒有表現(xiàn)出顯著性差異.
　　2、從目前已報道的文獻中選取4種不同的環(huán)境微生物DNA提取方法和不同細菌、真菌保守區(qū)序列擴增引物進行

4、研究,得出能夠獲得高質(zhì)量、大片段 DNA的土壤試劑盒提取方法以及細菌16S rRNA V3區(qū)擴增引物F357/R518,真菌ITS序列擴增引物ITS1-F/ITS4、ITS1-F/ITS2.這為后續(xù)DGGE的順利進行提供了保障.
　　3、利用變性梯度凝膠電泳技術分析了Bt玉米和非Bt玉米的葉面微生物群落遺傳多樣性是否有差別,隨后的克隆和測序進一步確定了葉面微生物群落中主要微生物種類及特異性微生物種類.DGGE圖譜條帶測序結果顯示葉

5、面環(huán)境中不可培養(yǎng)的微生物占很大部分;2010年和2011年葉面細菌主要為4個菌門,其中變形桿菌門(Proteobacteria)所占比例最大,然后是擬桿菌門(Bacteroidetes)、厚壁菌門(Firmicutes)和放線菌門(Actinobacteria);真菌主要為2大菌門子囊菌門(Ascomycota)和擔子菌門(Basidiomycota).玉米葉面微生物在2010年和2011年中的變化趨勢相似,2010年樣品中玉米葉面細菌