小麥小孢子離體培養(yǎng)技術體系的研究.pdf

1、小麥小孢子培養(yǎng)是一套高效再生體系，可以獲得大量單倍體和加倍單倍體(DH群體)，在單倍體育種中具有重要意義，同時為遺傳學和細胞牛物學等基礎研究提供了遺傳背景豐富且穩(wěn)定的材料。小麥小孢子培養(yǎng)對培養(yǎng)技術及環(huán)境等因素具有嚴格要求。本試驗采用濟麥20、Pavon等14個國內(nèi)外小麥品種，分別對材料的供應，材料預處理，小孢子的分離純化，培養(yǎng)基、密度及品種等影響因素展開研究，為小麥小孢子的培養(yǎng)技術提供理論依據(jù)。研究結果如下：
　　 1.研究建立

2、了小孢子培養(yǎng)的材料供應體系。在2月份以前通過分期播種小麥能夠抽穗。3月份以后需要進行人工春化，弱冬性品種需要春化20 d，冬性品種需春化20-40d，強冬性品種需春化40 d以上。在大田條件下，能夠?qū)⑿←湹墓獣r期由4月延長至7月。解決了小孢子培養(yǎng)中材料供應集中、時期短暫的問題。
　　 2.比較了穗子預處理和小孢子預處理兩種方法，經(jīng)小孢子預處理后，小孢子啟動數(shù)和胚狀體大小顯著高于穗子預處理。
　　 3.優(yōu)化了小孢子準備程

3、序。小麥穗子先用2.0％次氯酸鈉溶液處理20 min，用清水漂洗后，用75％酒精再處理1 h，能有效控制污染。15000 rpm條件下?lián)v碎30 s，小孢子的完整率較高，且分離出的小孢子數(shù)較多。采用30％麥芽糖離心純化小孢子效果較好。
　　 4.小孢子培養(yǎng)密度為為1×104個/ml-2×104個/ml時，更有利于小孢子培養(yǎng)。
　　 5.不同品種在一致的條件下進行培養(yǎng)，小孢子啟動數(shù)與胚狀體大小存在差異，均表現(xiàn)為：煙農(nóng)19<山

4、農(nóng)664<濟麥20　　 6.小孢子分離方式是決定小孢子培養(yǎng)成功與否的重要因素。組織搗碎法分離的小孢子數(shù)量雖多，但會產(chǎn)生組織碎片與死亡小孢子，不利于小孢子培養(yǎng)；同時，搗碎法分離的小孢子會直接暴露于培養(yǎng)基中，因此對于培養(yǎng)基的濃度要求十分苛刻。這些不利