干出脅迫對孔石莼生理影響及LHCSR基因的克隆.pdf

1、孔石莼生長在潮間帶的特殊環(huán)境中，所以經(jīng)常性的遭受干出脅迫。研究干出脅迫下孔石莼的生長發(fā)育及體內(nèi)的生理生化變化，以及脅迫條件下分子水平的調(diào)控機制，將有助于了解孔石莼對干出脅迫的適應(yīng)機制。在眾多的脅迫相關(guān)蛋白中，光捕獲復合體(LHCSR)蛋白是存在于藻類中類囊體膜上的跨膜蛋白，可以結(jié)合不同的輔助色素，吸收光能并傳遞能量到光反應(yīng)中心，且在光保護機制中起著重要作用。當藻體受到強光、低溫、干出等環(huán)境脅迫后該基因的表達量升高，進而遣散藻體內(nèi)吸收的過

2、多光能，保證藻體光合作用的正常進行。
　　 本實驗通過人工模擬干出條件研究孔石莼在不同干出條件下的生理生化反應(yīng)。以采自大連潮間帶的孔石莼為材料，測定在不同的干出時間(0 h、0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h)下其葉綠素a(Chla)含量、可溶性糖含量、脯氨酸(proline，Pro)含量、丙二醛(MDA)含量和過氧化物酶(POD)活性的變化。結(jié)果表明：干出脅迫會對孔石莼的生理生化過程產(chǎn)生明顯的影響。隨著干出時間的延長，

3、孔石莼中葉綠素a含量呈現(xiàn)下降的趨勢；丙二醛和可溶性糖的含量呈現(xiàn)緩慢的升高趨勢；過氧化物酶活性和脯氨酸含量呈現(xiàn)明顯的上升趨勢。
　　 采用RT-PCR和RACE技術(shù)成功克隆到孔石莼的光捕獲復合物(LHCSR)蛋白基因。該基因全長1094 bp，ORF為636 bp，編碼211個氨基酸，5’端的非翻譯區(qū)UTR為77 bp，3’端的非翻譯區(qū)UTR為380 bp。采用實時熒光定量PCR，檢測在不同干出脅迫時LHCSR基因mRNA相對表達