傘滑刃屬線蟲分子系統(tǒng)學(xué)研究及八個新種記述.pdf

1、傘滑刃屬線蟲(Bursaphelenchus Fuchs，1937)是一類由昆蟲攜播的食菌或植物寄生線蟲，目前已報道近100種，其中松材線蟲(B.xylophilus)和椰子紅環(huán)腐線蟲(B.cocophilus)是國際重要檢疫對象。松材線蟲主要通過木質(zhì)包裝或木材的遠(yuǎn)距離運(yùn)輸傳播，在我國口岸對進(jìn)境木質(zhì)包裝檢疫時，傘滑刃屬線蟲種類較多，十分常見。各種傘滑刃線蟲——尤其松材線蟲及其近似種形態(tài)特征十分相似，鑒定難度很大。本研究對近年來寧波口岸從

2、進(jìn)境木質(zhì)包裝中截獲的多種傘滑刃屬線蟲。主要是部分新種進(jìn)行了研究，開展了M型松材線蟲的形態(tài)和分子鑒定特征研究，并對該屬線蟲的ITSPCR-RFLP圖譜、分子系統(tǒng)發(fā)育分析及分組等進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.對寧波口岸進(jìn)境木質(zhì)包裝中的截獲的8個傘滑刃屬線蟲新種進(jìn)行了較詳細(xì)的記述，分別是非洲傘滑刃線蟲(B.africanus sp.n.)(包括2個亞種)、伯氏傘滑刃線蟲(B.burgermeisteri sp.n.

3、)、歐斐切傘滑刃線蟲(B.obeche sp.n.)、大尖尾傘滑刃線蟲(B.macromucronatus sp.n.)、布拉希傘滑刃線蟲(B.braaschae sp.n.)、擬小刺傘滑刃線蟲(B.paraparvispicularis sp.n.)以及2個未發(fā)表種。此外，還對俄羅斯木質(zhì)包裝中新記錄種楊傘滑刃線蟲(B.populi)進(jìn)行了描述。
　　 2.開展了M型松材線蟲(mucronate form of B.xyloph

4、ilus)形態(tài)和分子鑒定特征研究。將來自美國、加拿大以及從進(jìn)境木質(zhì)包裝中截獲的5個M型松材線蟲株系和多個R型松材線蟲(round-tailedform of B.xylophilus)及東亞型和歐洲型擬松材線蟲株系進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子鑒定特征比較。發(fā)現(xiàn)這些種類的交合刺形態(tài)相似，M型松材線蟲與R型松材線蟲的區(qū)別是前者均有明顯的尾尖突，平均長約2.2-3.0μm，而后者盡管有些個體有不到2μm的尾尖突(有時更長)，但群體內(nèi)總有些無尾尖突的個體。

5、M型松材線蟲與歐洲型擬松材線蟲的區(qū)別是尾尖突長度(平均長約2.2-3.0μm vs4-5μm)及排泄孔位置(多在中食道球后，有時在中食道球附近，但從不在中食道球前vs多數(shù)在中食道球附近或更前，偶爾在中食道球后)；與東亞型擬松材線蟲的區(qū)別主要是雌蟲尾形(尾亞圓柱形尾，尾尖突與尾端縊縮vs尾亞圓錐形，尾尖突與尾幾乎連續(xù)，縊縮不明顯)。通用的5種限制性內(nèi)切酶(RsaⅠ，HaeⅢ，MspⅠ，HinfⅠ和AluⅠ)獲得的M型和R型松材線蟲的ITS

6、 PCR-RFLP圖譜完全一致，但用Hpy188Ⅰ和HhaⅠ可以將兩者區(qū)分開來?；贗TS、28S和COI基因序列的系統(tǒng)發(fā)育分析能把R型和M型松材線蟲區(qū)分開來，但其遺傳距離很接近。
　　 3.以寧波口岸截獲和培養(yǎng)保存的傘滑刃屬線蟲為基礎(chǔ)，綜合Wolfgang等的研究成果，共整理獲得48種傘滑刃屬線蟲(包括A，B兩個未發(fā)表種，B.africanus、B.leoni、B.mucronatus和B.sexdentati各有2種生物型或

7、地理型)的ITS-RFLP圖譜，并對相應(yīng)的序列進(jìn)行分析，給出了準(zhǔn)確的酶切片段長度。盡管由于存在ITS區(qū)序列的微不均一性或異質(zhì)性(Microheterogeneity)現(xiàn)象，偶爾會造成同種線蟲ITS-RFLP圖譜的細(xì)微差異，但由于這一現(xiàn)象較罕見(至今僅發(fā)現(xiàn)5種傘滑刃線蟲有該現(xiàn)象)，并且都只是其中一種酶切結(jié)果略有差異，因此這對依據(jù)ITS-RFLP圖譜進(jìn)行種類鑒定影響甚微。研究表明ITS-RFLP圖譜分析不但可以進(jìn)行準(zhǔn)確的種類鑒定，還能對種內(nèi)

8、的亞種或地理型進(jìn)行進(jìn)一步區(qū)分。
　　 4.通過對截獲和保存的傘滑刃屬線蟲的測序以及從GenBank序列下載，進(jìn)行了51種(亞種)的18S、53種(亞種)的ITS和57種(亞種)的28S基因序列的系統(tǒng)發(fā)育研究。發(fā)現(xiàn)B.abruptus位于其他傘滑刃屬群體之外，4條側(cè)線線蟲聚類關(guān)系比較清晰，可明顯分為xylophilus組、fungivorus組、africanus組、cocophilus組、kevini組、tokyoensis組和

9、okinawaensis組，但4條側(cè)線的sexdentati組則與2條和3條側(cè)線的種類聚在一起，形成一個復(fù)雜的大分枝，而sexdentati組和其他多種2條和3條側(cè)線的種類都是由小蠹傳播的。2條側(cè)線與3條側(cè)線的群體親緣關(guān)系較近，分組關(guān)系不清晰，可能是由4條側(cè)線的類群進(jìn)化而來。本研究以系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系為基礎(chǔ)，依據(jù)傘滑刃屬線蟲側(cè)線數(shù)、雄蟲尾乳突數(shù)量與排列方式及交合刺形狀。以及雌蟲有無陰門蓋、后陰子宮囊長度、雌蟲尾部形態(tài)及測計值(a，c，c’)等