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文檔簡介
1、簍美大學碩士學位論文壇紫菜孢子體世代及配子體世代間microRNA差異表達譜的初步研究PreliminarystudyofthemicroRNAtranscriptomesintwogenerationsofPorphyrahaitanensis論文答辯日期:至Q曼2生量昱蘭羔旦壇紫菜孢子體世代及配子體世代間microRNA差異表達譜的初步研究摘要壇紫菜是我國南方沿海傳統(tǒng)大宗的海水養(yǎng)殖種類,是我國特有的暖溫帶性品種,其生活史中包括宏觀的
2、葉狀體和微觀的絲狀體兩個發(fā)育階段。目前,已對壇紫菜兩個不同發(fā)育階段的基因差異表達開展了大量研究,但對壇紫菜不同世代基因差異表達調控途徑的研究卻涉及很少。MicroRNA(miRNA)是一類在轉錄后水平對基因進行調控表達的功能性非編碼小RNA分子,在植物的生長發(fā)育、新陳代謝和應答外界環(huán)境刺激等過程中發(fā)揮著重要的調控作用。對miRNA在植物中不同發(fā)育階段的差異表達研究,可有助于探明miRNA在植物發(fā)育過程中的調控途徑,為從根本上闡明植物發(fā)育
3、調控的分子機理奠定基礎。本研究以壇紫菜Z61純系絲狀體和葉狀體為實驗材料,通過高通量測序和生物信息學分析相結合的方法,鑒別了壇紫菜細胞中的miRNA,分析了各miRNA在壇紫菜不同發(fā)育世代的差異表達狀況,并通過實時熒光定量PCR技術(qRTPCR)進行了表達水平的驗證,為miRNA在壇紫菜不同發(fā)育世代中的調控途徑研究提供了基礎資料。本研究獲得主要結果如下:(1)比較了5種RNA提取方法對富含多糖、多酚的壇紫菜葉狀體總RNA的提取效果,結
4、果表明改良CTAB法和離心柱試劑盒法提取的總RNA質量可靠,完整性好,純度高,并且成功去除了可能抑制逆轉錄酶活性的物質,可以進一步應用于后續(xù)實驗。(2)通過Solexa測序在壇紫菜葉狀體和絲狀體細胞中分別檢測到了1927,426和1903,844條UniquesRNA序列,其中只有968%的序列是兩個世代共有的,其余序列均為兩個發(fā)育世代所特有。(3)通過數(shù)據(jù)庫比對和生物信息學分析,從UniquesRNA序列中鑒別出了588條已知的miR
5、NA序列和40條新miRNA序列。并對已知miRNA進行了家族保守性分析,結果有197個己知的miRNA可歸屬于175個保守miRNA家族,其中與擬南芥共有的miRNA家族數(shù)最多,有63個,而與萊茵衣藻和長囊水云共有的miRNA家族數(shù)卻分別只有3個和1個。(4)對高通量測序中獲得的各miRNA的讀段次數(shù)進行歸一化處理后,構建了壇紫菜不同發(fā)育世代miRNA的差異表達譜(包含350個miRNA,其余238個miRNA由于在葉狀體和絲狀體世代
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