瀕危物種四眼斑水龜(Sacalia quadriocellata)的人工繁殖研究.pdf

1、四眼斑水龜（Sacalia quadriocellata Siebenzock，1903）為瀕危等級，其野生種群數(shù)量主要因非法貿(mào)易等因素正在急劇下降，有效而徹底的保育措施迫在眉睫。人工繁殖是該物種保護的有效措施之一。前人對四眼斑水龜?shù)娜斯わ曫B(yǎng)均以只能飼養(yǎng)而不能繁育告終。本課題組從1998年始對其進行人工飼養(yǎng)繁殖實驗，在2004年前，未發(fā)現(xiàn)任何繁殖現(xiàn)象。作者從2004年開始，從生理學(xué)、生態(tài)學(xué)和行為學(xué)等角度進行了一系列誘導(dǎo)繁殖實驗和生態(tài)養(yǎng)殖

2、實驗，首次在人工環(huán)境中成功繁殖出子一代四眼斑水龜。分述如下：
　　 激素誘導(dǎo)性行為。對雄性個體進行了促性腺激素釋放激素類似物（LHRH-A）和人絨毛膜促性腺激素（hCG）注射實驗，注射后使用多媒體數(shù)字監(jiān)控系統(tǒng)對雄性進行行為觀察。實驗動物分為4組：分別注射LHRH-A（1μg/100 g BW），hCG（200IU），LHRH-A（1μg/100 g BW）+hCG（200IU）和對照組注射生理鹽水。實驗結(jié)果表明：LHRH-A可以

3、有效地誘導(dǎo)四眼斑水龜表現(xiàn)性行為，注射LHRH-A+hCG的個體發(fā)情強度高于LHRH-A單獨誘導(dǎo)，單獨注射hCG和生理鹽水均不能誘導(dǎo)發(fā)情行為；不同濃度（0.5μg/100 g BW、1μg/100 g BW、2μg/100 g BW）的LHRH-A配合hCG（200IU）同時注射，發(fā)情效果無顯著差異。本次實驗報道了外源注射LHRH-A誘導(dǎo)龜鱉類性行為，盡管LHRH-A誘導(dǎo)發(fā)情行為的作用機制尚未證實，本實驗?zāi)艽_定LHRH-A能在四眼斑水龜性

4、腺未完全發(fā)育的條件下誘導(dǎo)發(fā)情。
　　 激素影響活動節(jié)律。為檢驗LHRH-A和hCG誘導(dǎo)對四眼斑水龜活動節(jié)律的影響，將39只四眼斑水龜分成4組：低濃度組（6♀，4♂）、中濃度組（6♀，4♂）、高濃度組（6♀，4♂）和對照組（6♀，3♂），采用不同濃度LHRH-A（0.5μg/100 g BW、1μg/100 g BW、2μg/100 g BW）和hCG（200IU）對動物進行了誘導(dǎo)實驗，實驗按照10天為一周期，并在注射后對其行為進

5、行24小時的連續(xù)跟蹤觀察，結(jié)果如下：激素誘導(dǎo)的個體相對對照組個體日活動節(jié)律無顯著差異，年活動節(jié)律在季節(jié)差異顯著，差異主要體現(xiàn)在實驗組的雌雄個體均出現(xiàn)非常明顯的求偶交配行為，對照組未發(fā)現(xiàn)發(fā)情行為；雄性活動、靜息、攝食、其他等行為在四組間沒有顯著差異，雌性活動、靜息、攝食等行為差異極顯著，實驗組活動量和攝食時間分配顯著多于對照組。低濃度誘導(dǎo)的龜發(fā)情強度最大，濃度過高LHRH-A的作用受到抑制。
　　 卵泡發(fā)育周期。為評估飼養(yǎng)條件下四

6、眼斑水龜卵巢發(fā)育周期，于2007年1月～2008年5月，利用超聲波檢測（使用韓國產(chǎn)Medison SSA 8800型彩色多普勒超聲診斷儀配合陰道探頭）每月檢測8只雌性四眼斑水龜?shù)母构蓽蠀^(qū)域，檢測卵黃卵泡（包括生長卵泡和排卵前卵泡）、閉鎖卵泡和輸卵管卵的大小和數(shù)量。結(jié)果表明：四眼斑水龜卵巢卵黃卵泡數(shù)目和大小呈明顯的周期性變化，檢測到的卵黃卵泡長徑范圍為4～24mm（n=186）。8月份環(huán)境溫度開始下降，此時卵泡數(shù)目開始增多，卵泡長徑逐漸增

7、大，至12月份排卵前期卵泡數(shù)量達最大值，卵巢發(fā)育成熟。排卵前期卵泡長徑范圍為19～24mm（n=56），最大排卵前期卵泡出現(xiàn)于12月。排卵時間是1月至3月。閉鎖卵泡長徑范圍在10～20mm（n=14）之間，僅在10月至次年3月能檢測到少數(shù)的閉鎖卵泡。
　　 激素誘導(dǎo)卵泡發(fā)育。在四眼斑水龜卵泡發(fā)育期（8-10月），將12只雌性四眼斑水龜采用LHRH-A、HCG對動物進行卵泡發(fā)育誘導(dǎo)試驗，采用B超和X光檢測技術(shù)檢查龜卵的發(fā)育情況。發(fā)

8、現(xiàn)實驗組的雌性個體出現(xiàn)懷卵現(xiàn)象，并成功產(chǎn)下受精卵，而對照組也未出現(xiàn)懷卵現(xiàn)象。在前一次實驗的基礎(chǔ)上，使用18只雌性個體，分成3個組，每組6只個體：低濃度組（LHRH-A 0.5ug/100g BW，hCG 200IU），高濃度組（LHRH-A 8ug/100g BW，hCG 200IU）和對照組（生理鹽水）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低濃度可以有效地誘導(dǎo)雌性四眼斑水龜卵泡發(fā)育（χ2=11.645，df=2，P=0.003）；使用在非繁殖期進行LHRH-A

9、和hCG誘導(dǎo)，沒有顯著地卵泡發(fā)育（Mann-Whitney U=1777.5，P=0.856）。實驗結(jié)果證明LHRH-A對四眼斑水龜卵泡發(fā)育有雙重作用，其影響方式受到激素濃度的影響，較低濃度可以有效地誘導(dǎo)卵泡發(fā)育。
　　 產(chǎn)卵與孵化。室內(nèi)養(yǎng)殖條件下，四眼斑水龜產(chǎn)卵行為出現(xiàn)在1月至6月間，四月份是產(chǎn)卵高峰。年產(chǎn)一窩，平均窩卵數(shù)為2.47枚（n=34，range=1-4），大部分個體產(chǎn)2-3枚（76.5％）。平均蛋重12.8±1.7

10、 g （n=71，range=8.9-16.9 g），平均長徑42.9±3.0 mm （n=71，range=35.4-49.4 mm）；平均短徑22.1±1.0 mm（n=71，range=20.2-24.1 mm）；受精率22.6％ （19/84）。稚龜平均背甲長39.10 mm（n=4，range 37.32-41.48 mm），平均體重8.46 g（n=4，range 7.40-9.63 g）。有雨天氣和無雨天氣的四眼斑水龜產(chǎn)卵

11、行為出現(xiàn)有極顯著差異（χ2>30，df=1，P<0.01），即雨天可能是誘導(dǎo)四眼斑水龜產(chǎn)卵的一個重要因素；窩卵數(shù)與體重，背甲長有關(guān)；在環(huán)境溫度為24-27°C條件下，孵化期105.9 d（n=9，89-122 d），共孵出9只個體。
　　 生態(tài)養(yǎng)殖。以上實驗結(jié)果證實了飼養(yǎng)環(huán)境不適導(dǎo)致四眼斑水龜性腺發(fā)育不良和激素分泌量下降，最終導(dǎo)致繁殖障礙。為探究出一套適用性較強并易于付諸大規(guī)模養(yǎng)殖推廣的技術(shù)，滿足人們對該物種的大量需求及減輕野生

12、種群的壓力，實現(xiàn)成功繁殖且保證成功繁殖出的個體無外源激素污染的負(fù)面影響，作者自2007年1月至2009年12月，開展了一系列生態(tài)養(yǎng)殖法的研究，在飼養(yǎng)條件下通過改變飼養(yǎng)環(huán)境、光周期、食物組成等。結(jié)果表明：飼養(yǎng)于生態(tài)池中的雌性個體產(chǎn)卵數(shù)量顯著多于室內(nèi)養(yǎng)殖個體；使用改良后混合飼料投喂產(chǎn)卵數(shù)量增加；短日照組卵泡發(fā)育情況好于長日照；延長雌雄混放時間有利于提高受精率。通過生態(tài)養(yǎng)殖法，成功突破了四眼斑水龜在人工養(yǎng)殖條件下的繁育問題，為其他瀕危龜類的人