黃瓜GST基因?qū)M南芥的轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因植株抗高溫能力的增強(qiáng).pdf

1、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶是所有植物體內(nèi)都存在的一類功能酶,大多數(shù)GST以可溶性二聚體酶的形式存在于植物體的各個組織。植物體內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)的醇基部位可與某些內(nèi)源或外源有害物質(zhì)的脂溶性分子的親電子中心相偶聯(lián),將其催化為高水溶性、低毒的產(chǎn)物。
　　 本試驗分析了高溫脅迫下黃瓜GST基因的表達(dá)和酶活力變化,克隆了谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)基因的開放閱讀框序列,以其為目的基因,構(gòu)建植物表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化擬南芥,獲得了轉(zhuǎn)基因擬南芥植

2、株。對高溫脅迫下的轉(zhuǎn)基因擬南芥中GST基因表達(dá)、最大PSⅡ光合量子產(chǎn)量、酶活力進(jìn)行分析,主要結(jié)果如下:
　　 1、通過實時熒光定量PCR,和酶活測定,證明高溫脅迫下黃瓜GST基因表達(dá)及酶活力顯著上調(diào)。
　　 2、用PCR技術(shù)從克隆載體黃瓜中擴(kuò)增出648kb的GST基因編碼區(qū),通過酶切、連接,轉(zhuǎn)入改良的Super-1300載體獲得新的表達(dá)載體改良的Super-1300-GST,并通過熱激法導(dǎo)入大腸桿菌DH5α,得到了GST

3、-1300-DH5α。
　　 3、將新的表達(dá)載體通過凍融法導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens EHA105,獲得工程菌GST-1300-EHA105。
　　 4、采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將GST基因轉(zhuǎn)入擬南芥,篩選獲得轉(zhuǎn)基因擬南芥。PCR檢測獲得陽性植株；
　　 5、轉(zhuǎn)基因擬南芥及其對照組經(jīng)過72h40℃高溫處理后,qRT-PCR檢測表明,GST基因的表達(dá)量有區(qū)別,進(jìn)一步測定最大PSⅡ光合