培養(yǎng)方法對土壤可培養(yǎng)細菌多樣性的影響及兩株新菌的初步鑒定.pdf

1、提高土壤微生物的可培養(yǎng)性，獲得純培養(yǎng)微生物菌株，是微生物生態(tài)學(xué)研究的基礎(chǔ)。目前由于技術(shù)手段的限制，以及人類認識水平的不足，使得自然界中微生物總數(shù)的99％還難以用純培養(yǎng)技術(shù)獲得分離和培養(yǎng)。因此研究和開發(fā)這99％的未培養(yǎng)微生物已成為國內(nèi)外的一個熱點。本論文采用三種營養(yǎng)物質(zhì)濃度不同的培養(yǎng)基對土壤細菌進行分時段計數(shù)，以細菌通用引物擴增細菌16S rDNA片段，用限制性內(nèi)切酶HhaⅠ酶切PCR產(chǎn)物，對酶切圖譜進行分型，研究了不同培養(yǎng)方法對土壤細菌

2、多樣性和可培養(yǎng)的影響；本論文還對從土壤中分離得到的兩株與其相鄰菌種具有較大差別的新菌株（標記為 TR6-7和TR6-11）進行了初步鑒定。
　　 結(jié)果表明，LB、CSEA、WSA培養(yǎng)基192 h后每 g干土獲得的細菌數(shù)量分別為14.84×107、10.27×107和6.91×107 CFU，但微生物多樣性指數(shù)以WSA為最高，LB多樣性指數(shù)最低；三種培養(yǎng)基培養(yǎng)的細菌菌群有一定的相似性，LB和CSEA培養(yǎng)基間的Jaccard指數(shù)為5

3、7.69％，LB和WSA培養(yǎng)基之間為53.13％，而CSEA和WSA培養(yǎng)基的相似性指數(shù)達66.67％；96～192 h細菌的豐富度最高，0～48 h細菌豐富度最低，并且三種培養(yǎng)基中單一OTUs類型的43.9％均是在96 h后才出現(xiàn)的。16S rDNA測序結(jié)果表明，所獲得的土壤細菌優(yōu)勢種群在分類方面主要屬于γ-和β-變形桿菌以及放線菌亞門，其中某些OTUs中的16S rDNA序列與 Burkholderiaceae bacterium、R

4、hodococcus和Mycobacterium屬具有較高的同源性，推測其細胞能夠分泌復(fù)蘇促進因子，有效地提高土壤細菌的可培養(yǎng)性。
　　 TR6-7革蘭氏染色反應(yīng)呈陽性，細胞形態(tài)呈橢圓狀，無鞭毛和菌毛；最適生長溫度為30℃，最適pH值為6.08，最適的鹽濃度為2％，無Nacl等鹽離子依賴性。TR6-7菌株不能使明膠液化，不能使淀粉水解，V.P.實驗為陰性，不能使甲基紅變紅，不產(chǎn)生氨氣，不產(chǎn)生吲哚，但能產(chǎn)生H2S，能使過氧化氫溶液

5、產(chǎn)生小氣泡，能使硝酸鹽還原。TR6-7能利用蔗糖、半乳糖、果糖、麥牙糖、山梨醇、阿拉伯糖、蜜三糖、核糖、乳糖、甘露糖、肌醇、葡萄糖、木糖為唯一碳源生長，但不利用甘露醇和甜醇。TR6-7的主要脂肪酸為C22:1 w7c/22:3 w3c。TR6-7的16S rDNA序列與其最相鄰Phycicoccusdokdonensis KCTC19248T的同源性為97.2％?；谝陨蠑?shù)據(jù)我們初步鑒定菌株TR6-7屬于Phycicoccus屬的一個新

6、種，并命名為Phycicoccus sp.TR6-7。
　　 TR6-11革蘭氏染色反應(yīng)呈陽性，細胞形態(tài)呈長桿狀，無鞭毛和菌毛，無運動能力，好氧；在GPM、NA培養(yǎng)基上長勢良好，最適生長溫度為30℃，最適的鹽濃度為0.5％，無Nacl等鹽離子依賴性，最適pH值為6.8.V.P.實驗為陰性，不能使甲基紅變紅，不產(chǎn)生氨氣，不產(chǎn)生吲哚，不能水解Tweens40，80，但能水解Tweens20.TR6-11能產(chǎn)生H2S，能使明膠液化，能

7、使淀粉水解，能使過氧化氫溶液產(chǎn)生小氣泡，能使硝酸鹽還原。能利用蔗糖、半乳糖、果糖、麥牙糖、山梨醇、阿拉伯糖、蜜三糖、核糖、乳糖、甘露糖、肌醇、葡萄糖、木糖、甘露醇、甜醇、鼠李糖為唯一碳源生長。TR6-11的主要脂肪酸為C22:1 w7c/22:3 w3c，C24:2 w6c。TR6-11的16S rDNA序列與最其相鄰的Humihabitans NRRL B-24470T同源性為97.1％.基于以上數(shù)據(jù)我們初步鑒定菌株TR6-11屬于H