多浪羊成纖維細胞庫的構建及川陳皮素對其細胞凋亡的影響.pdf

1、為了進一步的探索體細胞保存在物種遺傳資源保存中的應用，本試驗以我國地方品種多浪羊為研究對象，采用組織塊貼壁培養(yǎng)方法建立了多浪羊成纖維細胞系，并根據(jù)美國ATCC的建系標準對所建的細胞系進行了生物學檢測，并繼續(xù)研究了川陳皮素對其多浪羊成纖維細胞凋亡的影響。研究結果如下： 1.多浪羊的樣本含量為40，細胞傳代次數(shù)為3代，凍存管數(shù)為103支，每支凍存管中的細胞數(shù)量為3.88×106個細胞/ml。 2.所培養(yǎng)的多浪羊細胞具有典型的

2、成纖維形態(tài)，絕大部分呈梭形或者不規(guī)則三角形。細胞生長時呈火焰狀、旋渦狀或者放射狀走勢，在鏡想下觀察，細胞生長健康且形態(tài)良好。 3.多浪羊成纖維細胞復蘇后，其生長曲線均呈“S”型，細胞經(jīng)歷了潛伏期、對數(shù)生長期及停滯期，符合細胞在體外生長繁殖的一般規(guī)律。凍存前存活率為96.8％；復蘇后存活率為94.4％。 4.對所建多浪羊細胞系進行細菌、真菌及支原體等微生物檢測，結果均呈為陰性。 5.核型分析表明，多浪羊的二倍體染色

3、體數(shù)目2n=54，未見異常，染色體畸變率均低于3％，染色體結構未有變異，表明所建多浪羊細胞系的細胞均為穩(wěn)定的二倍體細胞，在體外遺傳性能穩(wěn)定。 6.多浪羊細胞的LDH和MDH同工酶酶譜分析表明，呈現(xiàn)其獨特的條帶，LDH同工酶為5條：MDH同工酶為2條，具有著種屬特異性，可作為品種和物種分類的主要依據(jù)之一。細胞遺傳性能穩(wěn)定，表明未發(fā)生惡性轉化及與其它物種細胞的交叉污染。 7.通過凋亡細胞形態(tài)觀察，細胞周期、細胞膜電位、細胞凋

4、亡率的檢測，結果表明：50mg/L、60 mg/L、70 mg/L、80 mg/L、90 mg/L的川陳皮素作用48h后，AO/EB染色并在光鏡下觀察，50mg/L、60 mg/L組細胞形態(tài)無明顯改變，70 mg/L、80 mg/L、90 mg/L組細胞出現(xiàn)明顯形態(tài)的改變、胞體變小、撕裂、皺縮等。大部分細胞很快的崩解、壞死，出現(xiàn)典型的凋亡特征。Annexin V/PI雙染法檢測到隨著川陳皮素濃度的增大而凋亡率明顯增高。羅丹明123結合流