基因Ⅶ型新城疫病毒單克隆抗體的研制、鑒定與初步應(yīng)用.pdf

1、1997年以來中國華南和華東部分地區(qū)發(fā)生了由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)導(dǎo)致的鵝的臨診疾病,而且發(fā)現(xiàn)鵝源NDV在體外具有比雞源和鴿源毒株更強(qiáng)的致細(xì)胞融合的能力,這表明NDV的抗原可能發(fā)生了變異.為了對(duì)該病毒的抗原變異進(jìn)行初步的研究探索進(jìn)而建立新的NDV檢測方法,我們研制了針對(duì)基因Ⅶ型NDV的單克隆抗體(簡稱單抗).以基因Ⅶ型NDV鵝源毒株ZJ1作為免疫原,三次免疫8周齡BALB/c小鼠后,取小鼠脾

2、細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞SP2/0-Ag-14進(jìn)行融合,通過間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和血凝抑制試驗(yàn)(hemagglutinin inhibition,HI)對(duì)雜交瘤進(jìn)行雙重篩選,經(jīng)亞克隆后,共獲得6株針對(duì)NDV的特異性單抗,分別命名為:1H6、2G5、3A4、3B5、6B1和8C5.其中2G5、3A4、3B5、6B1和8C5單抗具有血凝抑制特性,腹水的HI效價(jià)分別為:

3、2<'14>、2<'12>、2<'9>、2<'15>和2<'8>,分別屬于IgG<,1>、IgG<,1>、IgG<,2b>、IgG<,1>和IgG<,1>亞類,間接ELISA效價(jià)均大于1×10<'5>,間接免疫熒光試驗(yàn)(indirect immunofluorescent assay,ⅡFA)效價(jià)均大于1×10<'4>.無HI特性的單抗1H6為IgG<,1>亞類,其腹水的ELISA效價(jià)也大于1×10<'5>,ⅡFA效價(jià)為1×10<'3>

4、.上述六株單抗所針對(duì)的抗原表位均位于血凝素-神經(jīng)氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)蛋白上,除1H6沒有中和特性外,其余5株單抗均具有中和NDV的能力.用單抗6B1作為一抗,建立了ⅡFA方法,可以有效地進(jìn)行NDV強(qiáng)毒株的檢測,而且特異性好.以不同的單抗包被酶標(biāo)板,再與辣根過氧化物酶標(biāo)記的不同單抗進(jìn)行交叉ELISA試驗(yàn),篩選出了兩個(gè)新的夾心ELISA系統(tǒng),即M22-8C5和2G5-8C5系統(tǒng),然后與本室原