基因Ⅶ型新城疫病毒單克隆抗體的研制、鑒定與初步應用.pdf

1、1997年以來中國華南和華東部分地區(qū)發(fā)生了由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)導致的鵝的臨診疾病,而且發(fā)現(xiàn)鵝源NDV在體外具有比雞源和鴿源毒株更強的致細胞融合的能力,這表明NDV的抗原可能發(fā)生了變異.為了對該病毒的抗原變異進行初步的研究探索進而建立新的NDV檢測方法,我們研制了針對基因Ⅶ型NDV的單克隆抗體(簡稱單抗).以基因Ⅶ型NDV鵝源毒株ZJ1作為免疫原,三次免疫8周齡BALB/c小鼠后,取小鼠脾

2、細胞和骨髓瘤細胞SP2/0-Ag-14進行融合,通過間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和血凝抑制試驗(hemagglutinin inhibition,HI)對雜交瘤進行雙重篩選,經亞克隆后,共獲得6株針對NDV的特異性單抗,分別命名為:1H6、2G5、3A4、3B5、6B1和8C5.其中2G5、3A4、3B5、6B1和8C5單抗具有血凝抑制特性,腹水的HI效價分別為:

3、2<'14>、2<'12>、2<'9>、2<'15>和2<'8>,分別屬于IgG<,1>、IgG<,1>、IgG<,2b>、IgG<,1>和IgG<,1>亞類,間接ELISA效價均大于1×10<'5>,間接免疫熒光試驗(indirect immunofluorescent assay,ⅡFA)效價均大于1×10<'4>.無HI特性的單抗1H6為IgG<,1>亞類,其腹水的ELISA效價也大于1×10<'5>,ⅡFA效價為1×10<'3>

4、.上述六株單抗所針對的抗原表位均位于血凝素-神經氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)蛋白上,除1H6沒有中和特性外,其余5株單抗均具有中和NDV的能力.用單抗6B1作為一抗,建立了ⅡFA方法,可以有效地進行NDV強毒株的檢測,而且特異性好.以不同的單抗包被酶標板,再與辣根過氧化物酶標記的不同單抗進行交叉ELISA試驗,篩選出了兩個新的夾心ELISA系統(tǒng),即M22-8C5和2G5-8C5系統(tǒng),然后與本室原