寡養(yǎng)單胞菌G1對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥降解的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)分離篩選出一株可降解毒死蜱但不能進(jìn)一步降解代謝產(chǎn)物三氯苯酚的微嗜酸寡養(yǎng)單胞菌（Stenotrophomonas acidaminiphila）G1，并從中克隆出一段長(zhǎng)4018堿基的DNA片段，其中包含一段編碼有機(jī)磷水解酶基因mpd，長(zhǎng)度為996pb。現(xiàn)發(fā)現(xiàn)該菌能高效降解甲基對(duì)硫磷(MP)，本論文研究了該菌對(duì)MP的降解特性、降解酶的定位并測(cè)定了降解譜。
　　結(jié)果顯示在24h內(nèi)，G1對(duì)200mg·L-1的MP的降解率達(dá)95

2、％以上。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)對(duì)硝基苯酚(PNP)的含量先逐漸升高然后保持不變。通過OD600值的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌濃度在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中幾乎無(wú)變化。結(jié)果表明，G1能夠高效降解MP，但是不能進(jìn)一步降解代謝產(chǎn)物對(duì)PNP。同樣，G1也僅能降解轉(zhuǎn)化甲基對(duì)氧磷和丙溴磷為PNP和4，Br-2，Cl苯酚，并不能完全降解甲基對(duì)氧磷和丙溴磷，也不能利用甲基對(duì)氧磷和丙溴磷為唯一碳源生長(zhǎng)。
　　將活化后的菌接種于富集培養(yǎng)基中，37℃，120 r·min-1下培養(yǎng)2

3、4h[1]后，5000r·min-1離心15min，棄去上清液，收集菌體。菌體用生理鹽水洗滌兩次。重懸于無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，于600nm處調(diào)節(jié)光密度(OD600)至1.0，制成菌懸液母液。利用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)軟件，設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)表。按實(shí)驗(yàn)表分別向9組實(shí)驗(yàn)組添加一定體積的MP母液（丙酮配制），待溶劑揮發(fā)干后，加入一定體積的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液使體系中MP濃度分別為50mg·L-1、100mg·L-1和200mg·L-1;并分別接入10％、20％和30％(v

4、/v)的菌懸液母液，最終溶液總體積為5mL?？瞻讓?duì)照組以等體積的磷酸緩沖溶液代替菌懸液母液。結(jié)果經(jīng)過SPSS軟件進(jìn)行方差分析和多重比較，得出MP降解半衰期最短的條件為50mg·L-1底物濃度、20％接菌量、40℃溫度。在此條件下，MP的半衰期為1.60h。
　　本文確定了由甲基對(duì)硫磷水解酶基因mpd編碼的甲基對(duì)硫磷水解酶(MPH)在細(xì)胞中的定位。由于G1為革蘭氏陰性菌，可采用滲透休克法提取細(xì)胞周質(zhì)，超聲破碎去壁細(xì)胞提取胞內(nèi)粗酶。分