氯化銨對(duì)日本沼蝦存活、耗氧率及抗氧化酶活力的影響【畢業(yè)論文】

1、<p>　　本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))</p><p>　題 目：氯化銨對(duì)日本沼蝦存活、耗氧率及抗氧化酶活力的影響</p><p>　學(xué) 院：</p><p>　學(xué)生姓名：</p><p>　專 業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖</p><p>　班 級(jí)：</p><p>　指導(dǎo)教師：&

2、lt;/p><p>　起止日期：</p><p><b>　　目錄</b></p><p><b>　　中文摘要1</b></p><p><b>　　英文摘要1</b></p><p><b>　　1. 前言1</b></

3、p><p><b>　　2. 實(shí)驗(yàn)材料2</b></p><p><b>　　2.1日本沼蝦2</b></p><p>　　2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器2</p><p>　　2.3 抗氧化酶活力測(cè)定試劑盒3</p><p>　　2.4 實(shí)驗(yàn)用水3</p><

4、;p><b>　　3. 實(shí)驗(yàn)方法3</b></p><p>　　3.1 氯化銨對(duì)日本沼蝦急性毒性實(shí)驗(yàn)3</p><p>　　3.2 氯化銨對(duì)日本沼蝦呼吸耗氧率的影響實(shí)驗(yàn)3</p><p>　　3.3 氯化銨對(duì)日本沼蝦鰓組織抗氧化酶（CAT、GSH）活力的影響實(shí)驗(yàn)3</p><p><b>　

5、　4．?dāng)?shù)據(jù)處理3</b></p><p><b>　　5．實(shí)驗(yàn)結(jié)果4</b></p><p>　　5.1 氯化銨對(duì)日本沼蝦急性毒性4</p><p>　　5.2 氯化銨對(duì)日本沼蝦呼吸耗氧率的影響5</p><p>　　5.3 氯化銨對(duì)日本沼蝦鰓組織抗氧化酶（CAT、GSH）活力的影響5</p&

6、gt;<p><b>　　6.討論7</b></p><p>　　6.1日本沼蝦對(duì)氯化銨的耐受響應(yīng)特征7</p><p>　　6.2日本沼蝦的氯化銨安全濃度的確定8</p><p><b>　　小結(jié)8</b></p><p><b>　　致謝9</b>&

7、lt;/p><p><b>　　參考文獻(xiàn)10</b></p><p>　　氯化銨對(duì)日本沼蝦存活、耗氧率及抗氧化酶活力的影響</p><p>　　[摘要]本實(shí)驗(yàn)主要進(jìn)行的是氯化銨對(duì)日本沼蝦耐受程度和響應(yīng)特征的研究，經(jīng)過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)眼界結(jié)果的處理分析，主要得到以下幾點(diǎn)：（1）NH4Cl對(duì)日本沼蝦在實(shí)驗(yàn)周期（24h、48h、72h、96h）內(nèi)的的半致死濃度分

8、別為37.014±0.361mg·L-1、13.209±0.361 mg·L-1，7.038±0.360 mg·L-1、4.712±0.340 mg·L-1；（2）NH4Cl脅迫會(huì)明顯影響到日本沼蝦的呼吸耗氧率，實(shí)驗(yàn)設(shè)定內(nèi)的NH4Cl質(zhì)量濃度為0.157 mg·L-1～0.785 mg·L-1，這些組中，日本沼蝦的日均呼吸耗氧率和夜均呼吸

9、耗氧率均顯著高于空白組；NH4Cl質(zhì)量濃度為2.000 mg·L-1的實(shí)驗(yàn)組中，日本沼蝦的日均呼吸耗氧率和夜均呼吸耗氧率都明顯比空白組的低；（3）當(dāng)NH4Cl質(zhì)量濃度小于等于0.471 mg·L-1時(shí)，日本沼蝦抗氧化酶（CAT、GSH）活力在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)都高于對(duì)照組，而NH4Cl質(zhì)量濃度高于0.471 mg.L-1的實(shí)驗(yàn)組，當(dāng)實(shí)驗(yàn)周期進(jìn)行至96h時(shí)，日本沼蝦的抗氧化酶（CAT、GSH）活力均低于對(duì)照組。</p&g

10、t;<p>　　[關(guān)鍵詞] 日本沼蝦 氯化銨 耗氧率 半致死濃度 耐受特征</p><p>　　Ammonium chloride the nipponense survival, oxygen consumption rate and antioxidant enzyme activity in</p><p>　　[ABSTRACT] Tolerance and

11、 response of Macrobrachium nipponense to NH4Cl concentration were studied. Acute semistatic toxicity tests were carried out for 96h with Macrobrachium nipponense. SC（safe concentration）and LC50（half lethal concentration

12、）indiced for NH4Cl were determined. The result indicated that：（1）The LC50-24h，LC50-48h，LC50-72h，and LC50-96h values in this study were 37.014±0.361mg·L-1、13.209±0.361mg·L-1、7.038±0.360mg·L-1

13、、4.712±0.340mg·L-1，respectively. The SC-96h value were 0.4712±0.03</p><p>　　[KEYWORDS]: Macrobrachium nipponense pH NH4Cl Tolerance Response</p><p>　　氯化銨對(duì)日本沼蝦存活、耗氧率及抗氧化酶活力的影

14、響</p><p><b>　　1. 前言</b></p><p>　　蝦類隸屬于節(jié)肢動(dòng)物門，它分布廣泛，有近2000種，是一種世界性的養(yǎng)殖品種。蝦類養(yǎng)殖雖然產(chǎn)量不能和魚類、貝類相比，但產(chǎn)值較高，屬于名、特、優(yōu)產(chǎn)品，因此在我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖中占有重要地位。蝦類在整個(gè)生活史過(guò)程中都受到其所生活的水環(huán)境中生物因子和非生物因子的影響，而對(duì)于此有機(jī)體往往采取從個(gè)體、組織到分子水平的

15、一系列適應(yīng)性調(diào)整，以適應(yīng)或提高其在變化了的環(huán)境條件下的存活和生長(zhǎng)的需要[5]。在自然和養(yǎng)殖條件下，由于環(huán)境的時(shí)刻變化（周期性、季節(jié)性和人為的波動(dòng)），蝦類通過(guò)自身一系列機(jī)制調(diào)整其生理和生態(tài)的適應(yīng)性[6]以適應(yīng)環(huán)境脅迫帶來(lái)的影響，對(duì)于魚類、貝類的逆境生態(tài)學(xué)研究已有大量報(bào)道，相對(duì)于魚類和貝類，蝦類的生活史特殊（蛻皮現(xiàn)象），從而更加引起了研究者們的興趣。</p><p>　　蝦類逆境生態(tài)學(xué)的研究作為其生理生態(tài)學(xué)的重要研究

16、內(nèi)容，已為揭示蝦類在逆境脅迫下機(jī)體自身一系列的生理和生態(tài)適應(yīng)特性提供了重要依據(jù)，無(wú)疑為蝦類的養(yǎng)殖生產(chǎn)作出了重要貢獻(xiàn)。本文就逆境生態(tài)因子脅迫下蝦類的耐受與響應(yīng)特征的研究做一綜述。</p><p>　　日本沼蝦在世界上的地理分布較狹窄，僅限于日本和我國(guó)。在我國(guó)，日本沼蝦廣泛分布于南北各地的江河湖泊中，也常出現(xiàn)在低鹽度的河口地帶。特別是在江蘇太湖、河北白洋淀、山東微山湖等處的日本沼蝦最為著名。日本沼蝦是我國(guó)淡水蝦類中個(gè)

17、體較大的一種，其適應(yīng)性較強(qiáng)、分布比較廣泛，但自然水域中的資源量較為有限，因其具有食性雜、養(yǎng)殖周期短、繁殖能力強(qiáng)、肉質(zhì)細(xì)嫩等特點(diǎn)，是目前我國(guó)淡水養(yǎng)殖業(yè)中重要的養(yǎng)殖對(duì)象和最有發(fā)展前途的品種之一。此外，日本沼蝦作為其生存環(huán)境的食物鏈中魚類的餌料生物也有重要意義，可見(jiàn)日本沼蝦具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和生態(tài)學(xué)地位，有著廣闊的增養(yǎng)殖開(kāi)發(fā)和研究前景。我國(guó)的淡水蝦類養(yǎng)殖品種主要有日本沼蝦和羅氏沼蝦（Macrobrachium rose--nbergii）。日

18、本沼蝦肉的蛋白質(zhì)含量介于對(duì)蝦與羅氏沼蝦之間，除色氨酸外人體其余的7種必需氨基酸含量，均高于對(duì)蝦和羅氏沼蝦[2]，因此日本沼蝦養(yǎng)殖在我國(guó)淡水蝦類養(yǎng)殖業(yè)中占有重要位置。為此，有必要首先通過(guò)了解日本沼蝦生物學(xué)特性和養(yǎng)殖現(xiàn)狀，進(jìn)而對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)的研究，以達(dá)到科學(xué)養(yǎng)殖的目的。由于水生生物生活史和生存環(huán)境的差異，如蝦蟹類在生活史中出現(xiàn)蛻皮現(xiàn)象，使得水生生</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)主要的主要任務(wù)是研究日本沼蝦對(duì)氯化銨的耐受程度

19、及特征的響應(yīng)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)的相關(guān)測(cè)定和分析，順利完成了實(shí)驗(yàn)，并取得了一些結(jié)果。氨化作用是養(yǎng)殖水域中微生物作用的重要途徑，而氨氮?jiǎng)t是評(píng)價(jià)水質(zhì)優(yōu)劣的重要指標(biāo)及引發(fā)養(yǎng)殖生物疾病的重要因子。所以，確保生物的正常生長(zhǎng)、發(fā)育和繁殖的關(guān)鍵則在于有效控制養(yǎng)殖水體的氨氮水平。而且，控制好養(yǎng)殖水體氨氮平衡是促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展的基礎(chǔ)和前提。</p><p>　　氨氮對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖生物的危害已引起了全球水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)界的普遍廣泛關(guān)注和高度

20、重視。同時(shí)，國(guó)內(nèi)外已針對(duì)氨氮對(duì)中華絨螯蟹幼體、羅氏沼蝦幼、中國(guó)對(duì)蝦、斑節(jié)對(duì)蝦、、文蛤、黃顙魚等許多水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物進(jìn)行了生態(tài)毒理學(xué)的相關(guān)探討和深入研究，相比之下，卻很少有較為獨(dú)到和新穎的關(guān)于氨氮對(duì)日本沼蝦的急性毒性等病理學(xué)的的研究報(bào)道。因此，進(jìn)行這樣一項(xiàng)研究實(shí)驗(yàn)對(duì)于認(rèn)識(shí)和了解氯化銨對(duì)日本沼蝦的影響具有科學(xué)價(jià)值和研究意義。該實(shí)驗(yàn)主要分五階段進(jìn)行開(kāi)展：第一，是相關(guān)文獻(xiàn)的收集和整理；第二，是預(yù)備實(shí)驗(yàn)的探索；第三，是正式實(shí)驗(yàn)的展開(kāi)；第四，是實(shí)驗(yàn)結(jié)果

21、的處理；第五，是總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)論。其中，主要包括對(duì)日本沼蝦氯化銨對(duì)日本沼蝦的急性毒性實(shí)驗(yàn)、耗氧率的影響以及對(duì)抗氧化酶活力的測(cè)定。通過(guò)該實(shí)驗(yàn)的研究和分析總結(jié)，主要是想為日本沼蝦的安全高效生產(chǎn)和生態(tài)科學(xué)養(yǎng)殖提供更穩(wěn)定更安全更可靠的水產(chǎn)養(yǎng)殖的生態(tài)環(huán)境。</p><p><b>　　2. 實(shí)驗(yàn)材料</b></p><p><b>　　2.1日本沼蝦</b>&

22、lt;/p><p>　　所用日本沼蝦購(gòu)于余姚市青港野生苗種廠，運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后，暫養(yǎng)于規(guī)格為70cm×48cm×37cm的水箱中，連續(xù)充氣，不投食，及時(shí)撈出死亡個(gè)體，每24h換水一次。待其排空糞便后隨即選取規(guī)格相近，肢體完好、健壯有活力且體色接近的非抱卵日本沼蝦作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，規(guī)格為：體長(zhǎng)（4.29±0.32）cm、體重（1.80±0.12)g。</p><p&g

23、t;　　2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器</p><p>　　規(guī)格為55cm×40cm×30cm和80cm×50cm×42cm的塑料箱；JPSJ-605臺(tái)式溶解氧測(cè)定儀； pH計(jì)； Sartorius BP211D 電子天平；722S可見(jiàn)分光光度計(jì)；Anke TDL-40B臺(tái)式離心機(jī)；ATINAN加熱棒；UPWS純水機(jī)。</p><p>　　如圖1所示，仿照黃

24、玉瑤等（1975）的流水密封裝置設(shè)計(jì)日本沼蝦呼吸耗氧率的測(cè)定系統(tǒng)，其中A為水塔，G為虹吸管，L為流量控制開(kāi)關(guān)，C為呼吸室（規(guī)格30cm×30cm×12cm），D為恒溫水槽，I為已耗氧水暫存瓶，E為出水槽，F(xiàn)為玻璃管。</p><p>　　圖1 日本沼蝦呼吸耗氧率測(cè)定裝置</p><p>　　Figure 1 Macrobrachium respiration rate

25、measurement device</p><p>　　2.3 抗氧化酶活力測(cè)定試劑盒</p><p>　　CAT活力測(cè)定試劑盒（可見(jiàn)光法）、GSH酶活力測(cè)定用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，測(cè)定日本沼蝦抗氧化酶（CAT、GSH）活力。</p><p><b>　　2.4 實(shí)驗(yàn)用水</b></p><p>　　實(shí)驗(yàn)

26、基礎(chǔ)水為經(jīng)48h曝氣的自來(lái)水，水溫24±0.2℃，OD值7.24±0.14mg·L-1，pH7.11±0.07，水質(zhì)符合NY5051-2001無(wú)公害食品淡水養(yǎng)殖用水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部，2001)，適量的1g·L-的NH4Cl（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)）母液調(diào)配成不同NH4Cl濃度的實(shí)驗(yàn)水。</p><p><b>　　3. 實(shí)驗(yàn)方法<

27、;/b></p><p>　　3.1 NH4Cl對(duì)日本沼蝦急性毒性實(shí)驗(yàn)</p><p>　　經(jīng)預(yù)備實(shí)驗(yàn)，確定NH4Cl對(duì)日本沼蝦急性毒性的實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍（96h全活濃度下限和全死濃度上限），按等對(duì)數(shù)間距法設(shè)置0.000mg·L-1、4.000mg·L-1、7.000mg·L-1、11.000mg·L-1、17.000mg·L-1、2

28、8.000mg·L-1等6個(gè)NH4Cl質(zhì)量濃度梯度組，以規(guī)格為55cm× 40cm×30cm的塑料箱為實(shí)驗(yàn)單元，每單元盛實(shí)驗(yàn)水20L，實(shí)驗(yàn)時(shí)隨機(jī)挑選10尾日本沼蝦放入實(shí)驗(yàn)容器單元中，每個(gè)梯度3個(gè)重復(fù)，采用靜水停食法開(kāi)展NH4Cl對(duì)日本沼蝦的96h急性毒性效應(yīng)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)周期為96h，每24h換一次水；連續(xù)觀察蝦的活動(dòng)狀況，以用玻璃棒觸碰蝦體無(wú)反應(yīng)作為死亡的標(biāo)準(zhǔn)，隨時(shí)撈出死蝦并記錄死亡現(xiàn)象和死亡數(shù)量。</

29、p><p>　　3.2 NH4Cl對(duì)日本沼蝦呼吸耗氧率的影響實(shí)驗(yàn)</p><p>　　據(jù)NH4Cl對(duì)日本沼蝦的急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以自然狀態(tài)為對(duì)照組，按等差間距法設(shè)置0.157mg·L-1、0.314mg·L-1、0.471mg·L-1、0.628mg·L-1、0.785mg·L-1、0.942mg·L-1、2.000mg·L

30、-1（96全活濃度下限）等8個(gè)質(zhì)量濃度梯度，每梯度重復(fù)3次，采用流水呼吸室法（單位時(shí)間水流量為4.32±0.67L·h-1)開(kāi)展對(duì)日本沼蝦晝夜耗氧率的影響實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前同時(shí)隨機(jī)選取4尾實(shí)驗(yàn)蝦放入對(duì)應(yīng)的呼吸室內(nèi)，穩(wěn)定1h后，于翌日0:00起每隔1次測(cè)定呼吸室流入水與流出水的水溫和DO值，連續(xù)測(cè)定24h。實(shí)驗(yàn)期間保持pH值恒定。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用濾紙吸凈對(duì)應(yīng)的呼吸室內(nèi)實(shí)驗(yàn)蝦體表水分并稱其體重。</p><p

31、>　　3.3 NH4Cl對(duì)日本沼蝦鰓組織抗氧化酶（CAT、GSH）活力的影響實(shí)驗(yàn)</p><p>　　以自然狀態(tài)為對(duì)照組，按等差間距法設(shè)置0.157mg·L-1、0.314mg·L-1、0.471mg·L-1、0.628mg·L-1、0.785mg·L-1、0.942mg·L-1、2.000mg·L-1等8個(gè)質(zhì)量濃度梯度，每梯度重復(fù)3次

32、，測(cè)定日本沼蝦鰓組織的CAT活力和GSH活力。</p><p>　　于實(shí)驗(yàn)第24h、48h、72h、96h分別取樣一次，每次每實(shí)驗(yàn)單元各隨機(jī)取實(shí)驗(yàn)蝦3尾，于并盤上解剖取其鰓組織并準(zhǔn)確稱重，用玻璃勻漿器充分研磨后，用0.86%的生理鹽水制成10%的組織勻漿液，4℃保存?zhèn)錅y(cè)。按照CAT、GSH測(cè)試盒的測(cè)定方法將組織勻漿液稀釋至相應(yīng)濃度后進(jìn)行測(cè)定。</p><p><b>　　4．?dāng)?shù)據(jù)

33、處理</b></p><p>　　呼吸耗氧率（mg·g-1·h-1）=（DO1－DO2）×V/W</p><p>　　式中：DO1、DO2分別指進(jìn)水口、出水口溶氧量（mg·L-1），V指單位時(shí)間流量（L·h-1），W指同一呼吸室中所有實(shí)驗(yàn)對(duì)象體重之和（g）。</p><p>　　CAT活力、GSH活力的計(jì)

34、算方法按照南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的酶活力測(cè)試試劑盒的方法進(jìn)行測(cè)定。</p><p>　　根據(jù)NH4Cl對(duì)日本沼蝦急性毒性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，建立不同觀察時(shí)段死亡概率單位—質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)直線回歸方程。NH4Cl對(duì)日本沼蝦的安全濃度計(jì)算公式如下：</p><p>　　SC=0.1×96hLC50 </p><p>　　所得數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS17.0經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并利用

35、LSD法進(jìn)行差異性比較，顯著水平為P<0.05。</p><p><b>　　5．實(shí)驗(yàn)結(jié)果</b></p><p>　　5.1 NH4Cl對(duì)日本沼蝦急性毒性</p><p>　　由表1可見(jiàn)，同一時(shí)段內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的死亡率隨NH4Cl質(zhì)量濃度的增高而增高，同一實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度梯度內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的死亡率隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增高，表現(xiàn)出明顯的計(jì)量效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)。

36、對(duì)表1結(jié)果作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理得表2。由表2可見(jiàn)，NH4Cl對(duì)日本沼蝦24h、48h、72h、96h的半致死濃度分別為37.014±0.361mg·L-1、13.209±0.361mg·L-1、7.038±0.360mg·L-1、4.712±0.340mg·L-1。觀察發(fā)現(xiàn)，死亡個(gè)體肌肉和鰓組織發(fā)白，內(nèi)臟松散呈流質(zhì)狀。</p><p>　　表

37、1 NH4Cl對(duì)日本沼蝦急性毒性</p><p>　　Table 1 of NH4Cl on the acute toxicity of nipponense</p><p>　　表2 不同觀察時(shí)段NH4Cl對(duì)日本沼蝦的急性毒性特征的分析</p><p>　　Table 2 Analysis of the different observation periods

38、 NH4Cl on the acute toxicity characteristics of the Japanese marsh shrimp</p><p>　　5.2 NH4Cl對(duì)日本沼蝦呼吸耗氧率的影響</p><p>　　如表3所示，各NH4Cl質(zhì)量濃度梯度組中，日本沼蝦的日呼吸耗氧率都顯著低于夜呼吸耗氧率（P<0.05）。同時(shí)可見(jiàn)，NH4Cl的質(zhì)量濃度為0.157mg&

39、#183;L-1、0.314mg·L-1、0.471mg·L-1、0.628mg·L-1、0.785mg·L-1五個(gè)實(shí)驗(yàn)組的日呼吸耗氧率和夜呼吸耗氧率也明顯比對(duì)照組（P<0.05）高；0.942mg·L-1這一實(shí)驗(yàn)組中，日呼吸耗氧率與對(duì)照組沒(méi)有顯著的差異，但夜呼吸耗氧率卻顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；2.000mg·L-1實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組（P<0.05），

40、其日呼吸耗氧率和夜呼吸耗氧率都偏低。</p><p>　　表3 NH4Cl對(duì)日本沼蝦呼吸耗氧率的影響</p><p>　　Table 3 of NH4Cl on the respiration rate of nipponense</p><p>　　注：x、y代表同一行間的差異；w、v表示同一列間的差異；不同字母表差異性（P<0.05）</p>

41、<p>　　5.3 NH4Cl對(duì)日本沼蝦鰓組織抗氧化酶（CAT、GSH）活力的影響</p><p>　　如圖2可知，在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)，當(dāng)NH4Cl質(zhì)量濃度小于等于0.471mg·L-1時(shí)，日本沼蝦鰓組織Cat的活力均比對(duì)照組高；NH4Cl質(zhì)量濃度為0.628mg·L-1、0.785mg·L-1的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)會(huì)呈現(xiàn)不同的變化階段：在24h、48hCAT的活力高于對(duì)照組

42、，到72h時(shí)與對(duì)照組相均衡，而在96h時(shí)開(kāi)始低于對(duì)照組；0.942mg·L-1、2.000mg·L-1兩實(shí)驗(yàn)組別的鰓組織CAT活力也出現(xiàn)周期時(shí)段變化：24h時(shí)高于對(duì)照組，48h同對(duì)照組持平，72h、96h都比對(duì)照組低。</p><p>　　如圖2所示，GSH活力則在24h達(dá)到最大值，各個(gè)實(shí)驗(yàn)組均有這一特點(diǎn)；到48h都開(kāi)始出現(xiàn)不同幅度的下降趨勢(shì)，除0.785mg·L-1的實(shí)驗(yàn)組之外；在

43、48h時(shí)，質(zhì)量濃度在0.942mg·L-1、2.000mg·L-1兩實(shí)驗(yàn)組別中GSH的活力下降程度大于0.785mg·L-1的實(shí)驗(yàn)組；當(dāng)實(shí)驗(yàn)周期達(dá)到72h時(shí)，0.785mg·L-1的實(shí)驗(yàn)組的GSH活力才開(kāi)始大幅度的下降，并最終保持穩(wěn)定狀態(tài)。</p><p>　　圖2 NH4Cl對(duì)日本沼蝦鰓組織GSH活力的影響</p><p>　　Figure 2 o

44、f NH4Cl vitality of the Japanese marsh shrimp gill tissue GSH</p><p>　　圖3 NH4Cl對(duì)日本沼蝦鰓組織CAT活力的影響</p><p>　　Figure 3 of NH4Cl on the Japanese marsh shrimp gill tissue CAT activity</p><p&

45、gt;　　圖4 NH4Cl對(duì)日本沼蝦鰓組織GSH活力的影響</p><p>　　Figure 4 of NH4Cl vitality of the Japanese marsh shrimp gill tissue GSH</p><p><b>　　6.討論</b></p><p>　　6.1日本沼蝦對(duì)NH4Cl的耐受響應(yīng)特征</p&

46、gt;<p>　　根據(jù)對(duì)本實(shí)驗(yàn)的研究及相關(guān)文獻(xiàn)的查閱，將氨氮對(duì)不同蝦類各觀測(cè)時(shí)刻的半致死濃度列于表4。從表4可知，日本沼蝦在第72h或第96h的氨氮LC50均低于克氏原鰲蝦 、澳大利亞紅螯螯蝦 、脊尾白蝦幼體 ，中國(guó)對(duì)蝦 、羅氏沼蝦Z5幼體等，說(shuō)明了日本沼蝦對(duì)氨氮的耐受范圍比上述的其他蝦類的要狹窄。但是，氨氮可導(dǎo)致中國(guó)對(duì)蝦蝦幼體,生長(zhǎng)減緩, 耗氧量增加、蛻皮次數(shù)增多；使羅氏沼蝦幼體變態(tài)時(shí)間延長(zhǎng)、存活率降低；抑制脊尾白蝦糠蝦

47、幼體生長(zhǎng)代謝等，所以，在日本沼蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)中應(yīng)密切關(guān)注養(yǎng)殖水體中氨氮的變化，并要及時(shí)調(diào)整水質(zhì)。</p><p>　　表4 不同蝦類的氨氮半致死質(zhì)量濃度</p><p>　　Table 4 shrimp ammonia semi-lethal concentrations</p><p>　　6.2日本沼蝦的NH4Cl安全濃度的確定</p><p&g

48、t;　　由表2可知， NH4Cl對(duì)日本沼蝦的96h LC50為4.712±0.340 mg.L-1，通過(guò)公式SC=0.1×96hLC50，算得其安全濃度的估計(jì)值為0.471 mg.L-1。由表3可知，當(dāng)NH4Cl質(zhì)量濃度小于等于0.785 mg.L-1時(shí)，日本沼蝦的日均呼吸耗氧率和夜均呼吸耗氧率均顯著高于對(duì)照組，而當(dāng)NH4Cl質(zhì)量濃度為0.942 mg.L-1時(shí)，其日均呼吸耗氧率與對(duì)照組無(wú)顯著差異，而夜均呼吸耗氧率卻

49、明顯低于對(duì)照組；說(shuō)明0.785 mg.L-1為日本沼蝦呼吸耗氧的安全質(zhì)量濃度的臨界點(diǎn)。由圖2，當(dāng)NH4Cl質(zhì)量濃度小于等于0.471 mg.L-1時(shí)其鰓組織CAT活力均穩(wěn)定地高于對(duì)照組，而當(dāng)質(zhì)量濃度為0.628 mg.L-1、0.785 mg.L-1時(shí)雖48h內(nèi)的CAT活力高于對(duì)照組，并在72h時(shí)與對(duì)照組持平，但96h時(shí)低于對(duì)照組，表明0.471 mg.L-1為日本沼蝦鰓組織CAT酶的安全質(zhì)量濃度臨界點(diǎn)；同理圖3中，0.628mg.L-

50、1為日本沼蝦鰓組織GSH酶的安全質(zhì)量濃度臨界點(diǎn)。綜上所述，0.471 mg.L-1為日本沼蝦的安全質(zhì)量濃度。</p><p><b>　　小結(jié)</b></p><p>　　該實(shí)驗(yàn)主要是利用日本沼蝦在逆境脅迫下的耐受能力與響應(yīng)特征而展開(kāi)的生物學(xué)研究。結(jié)合了蝦類生活史的特殊性（出現(xiàn)多次蛻皮現(xiàn)象）以及其在不同條件下對(duì)同一生態(tài)因子也不盡相同這一情況而進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)研究，經(jīng)預(yù)備試驗(yàn)

51、，通過(guò)NH4Cl對(duì)日本沼蝦的急性毒性實(shí)驗(yàn)，并以此為基礎(chǔ)測(cè)定呼吸耗氧率、鰓組織抗氧化酶（CAT、GSH）的活力，然后經(jīng)過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)的記錄、處理、分析，從而確定NH4Cl對(duì)日本沼蝦的安全濃度，以期為日本沼蝦的生態(tài)安全養(yǎng)殖和相關(guān)漁損污染事故處理提供科學(xué)依據(jù)，進(jìn)而提高在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域的安全性、科學(xué)性和可靠性。</p><p>　　通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的具體整理和綜合分析可知，氯化銨對(duì)日本沼蝦的存活、呼吸耗氧率以及抗氧化酶（CA

52、T、GSH）的活力都有顯著影響；同時(shí)，根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的計(jì)算分析，得到了氯化銨對(duì)日本沼蝦的安全養(yǎng)殖范圍濃度為0.471 mg.L-1。</p><p><b>　　致謝</b></p><p>　　本論文是在我的導(dǎo)師的悉心指導(dǎo)和耐心幫助下順利完成的，感謝王老師；同時(shí)，在這里也得感謝我的同學(xué)任、楊和何的參與和幫助，他們?cè)谖业恼撐膶?shí)驗(yàn)工作和論文設(shè)計(jì)寫作過(guò)程中給予了許多指導(dǎo)

53、！另外，也感謝在我的論文實(shí)驗(yàn)和寫作過(guò)程中給我提供熱忱幫助的各位老師和同學(xué)！</p><p><b>　　[參考文獻(xiàn)]</b></p><p>　　[1] 孫振中,劉淑梅,戚雋淵等. 非離子氨氮對(duì)羅氏沼蝦幼體的毒性研究[J]. 水產(chǎn)科技情報(bào),1999,(4)：7.</p><p>　　[2] 洪美玲. 水中亞硝酸鹽和氨氮對(duì)中華絨螯蟹幼體的毒性效應(yīng)

54、及維生素E的營(yíng)養(yǎng)調(diào)節(jié)[D]. 華東師范大學(xué): 華東師范大學(xué),2007.</p><p>　　[3] 何玉英,李健,劉萍,黃付友,王清印. 中國(guó)對(duì)蝦家系幼體對(duì)氨氮和pH值的耐受性比較[J]. 中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2008,(5)：761～765.</p><p>　　[4] 吳進(jìn)鋒,陳素文,陳利雄等. 硫化物和氨對(duì)西施舌幼貝的毒性影響研究[J]. 熱帶海洋學(xué)報(bào),2006,(1).

55、42-46.</p><p>　　[5] 陳金鳳. 氨氮對(duì)文蛤能量收支的影響及其毒理效應(yīng)的研究[D]. 蘇州大學(xué): 蘇州大學(xué),2010.</p><p>　　[6] 李波. 氨氮和亞硝酸鹽對(duì)黃顙魚的毒性研究[D]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué): 華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.</p><p>　　[7]黃付友. “黃海1號(hào)”中國(guó)對(duì)蝦生長(zhǎng)性狀和對(duì)高pH、高氨氮抗性遺傳力的估計(jì)[D]. 中

56、國(guó)海洋大學(xué): 中國(guó)海洋大學(xué),2007.</p><p>　　[8]孫苗苗,黃建華,楊其彬,周發(fā)林,溫為庚,陳旭,江世貴. 13個(gè)斑節(jié)對(duì)蝦家系的生長(zhǎng)及抗氨氮特性比較[J]. 上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2011,(4):510～16.</p><p>　　[9] 周永欣，章宗涉.水生生物毒性實(shí)驗(yàn)方法[J].農(nóng)業(yè)出版社，北京，1989:1～157.</p><p>　　[10]

57、羅靜波， 曹志華， 蔡太銳等.氨氮對(duì)克氏原螯蝦幼蝦的急性毒性研究[J].長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版)農(nóng)學(xué)卷，2006，3（4）：183～186.</p><p>　　[11]陳孝煊，吳志新，熊波. 澳大利亞紅螯螯蝦對(duì)水中氨氮濃度耐受性的研究[J]. 水產(chǎn)科技情報(bào),1995,(1).</p><p>　　[12] 蔣玫，沈新強(qiáng)， 李磊等.氨氮對(duì)脊尾白蝦幼體存活生長(zhǎng)及體內(nèi)RNA/DNA比值的影響[J

58、].動(dòng)物學(xué)雜志，2011，46（4）：102～108.</p><p>　　[13] Antonio Ostrensky , Wilson Wasielesky Jr. Acute toxicity of ammonia to various life stages of the São Paulo shrimp, Penaeus paulensis Pérez-Farfante，E

59、lsevier B.V. Volume 132, Issues 3～4</p><p>　　[14] Chen J C, Kou Y Z. Effects of ammonia on growth and molting of Penaeus japonicus juveniles [J]. Aquaculture, 1992, 104: 249～260.</p><p>　　[15]Ch

60、en. J. C., Lin, C. Y. (1992). Oxygen consumption and ammonia-N excretion of Penaeus chinensis juveniles exposed to ambient ammonia at different salinity levels.Comp. Biochem. Physiol. 102C: 287-291</p><p>　　

61、[16] 畢英佐,李桂峰,李海燕,成應(yīng)機(jī),林祿成. 羅氏沼蝦育苗水體氨氮、亞硝酸鹽氮的變化規(guī)律及對(duì)幼體的影響[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2002,(3): 67～70.</p><p>　　[17] 李義.溫度、pH對(duì)日本沼蝦血清酚氧化酶活力及穩(wěn)定性的影響[J]. 海洋科學(xué)，2002，(10)：1～3.</p><p>　　[18] 李彥芹，鮑娜，闞振榮等.溫度對(duì)日本沼蝦腸道菌群的影響[A

62、]. .[C].: ,2002.</p><p>　　[19] 安徽農(nóng)網(wǎng)農(nóng)業(yè)科技網(wǎng)</p><p>　　http://www.ahnw.gov.cn/2006nykj/Show.asp?ContentID={CA9EB853-9202-4BF0-84E3-EE52422CC95D}</p><p>　　[20] 湖州農(nóng)村經(jīng)濟(jì)信息網(wǎng)</p><p&

63、gt;　　http://www.hzag.gov.cn/html/main/syjsView/10780.html</p><p>　　[21] 郭秀云，王勝，吳必文等.環(huán)境溫度對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖定量化影響的研究[A]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，(24) ，7498～7499.</p><p>　　[22] 徐東，張繼紅，王文琪等.蝦夷扇貝對(duì)溫度變化的耐受性及其生理反應(yīng)[A]. .[C].: ,2

64、009.</p><p>　　[23] 徐東，張繼紅，王文琪等.溫度變化對(duì)蝦夷扇貝耗氧率和排氨率的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2010，(5):1101-1106.</p><p>　　[24] 田甜，王京樹，楊元金等.溫度驟變對(duì)史氏鱘幼魚活動(dòng)狀況及成活率的影響[J].畜牧與飼料科學(xué),2011,(5)： 3-4.</p><p>　　[25]廖永巖，許振煜，吳邦臣.鹽

65、度和溫度對(duì)紅星梭子蟹存活和攝餌的影響[J].生態(tài)學(xué)報(bào)，2010，(13)： 3396-3405.</p><p>　　[26]楊淞，韋其鋒，嚴(yán)太明等.孔雀魚、月光魚耐溫限度的初步研究[J].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，(1)：106-110.</p><p>　　[27]廖永巖，吳蕾，蔡凱等.鹽度和溫度對(duì)中華虎頭蟹(Orithyia sinica)存活和攝餌的影響[J].生態(tài)學(xué)報(bào)，2007

66、，(2)：627-639.</p><p>　　[28]黃良敏，謝仰杰，吳漳德等.條紋斑竹鯊對(duì)溫度和鹽度的耐受實(shí)驗(yàn)[J].集美大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2005，(1)：12-17.</p><p>　　[29] 楊萬(wàn)喜，賴偉，堵南山.日本沼蝦行為研究[J].動(dòng)物學(xué)雜志，1997，(3): 14.</p><p>　　[30] 邢克智，劉茂春.不同溫度下青蝦幼體耗氧率