克拉瑪依滲油與采油污染區(qū)細(xì)菌多樣性研究.pdf

1、土壤中存在著大量微生物，與土壤環(huán)境相互作用形成了穩(wěn)定的生態(tài)系統(tǒng)，并在物質(zhì)循環(huán)、土壤凈化等方面起著重要作用。當(dāng)土壤微生物所依賴生長(zhǎng)的環(huán)境受到污染時(shí)，一方面利用環(huán)境中的有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另一方面同時(shí)與生態(tài)環(huán)境中的有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及其他的生物物質(zhì)相互作用形成一個(gè)較為穩(wěn)定的微生態(tài)系統(tǒng)。本文以準(zhǔn)噶爾盆地西北緣的克拉瑪依采油滲油污染區(qū)的石油污染土壤為研究對(duì)象，周邊的非污染樣地為對(duì)照，將傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法與DNA指紋圖譜技術(shù)相結(jié)合，闡述了新疆克拉瑪依采油滲油污

2、染區(qū)的石油污染土壤細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)及動(dòng)態(tài)變化。
　　在非培養(yǎng)方法中，對(duì)污染樣地的土壤微生物總DNA提取之前先對(duì)土樣進(jìn)行一定的預(yù)處理，再進(jìn)行三種提取方法的比較優(yōu)化，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)法DNA產(chǎn)率最高，純化后可以有效的去除土壤里的石油烴類污染。①本實(shí)驗(yàn)采用嵌套式PCR，該方法能夠有效的提高擴(kuò)增的靈敏度，通過(guò)PCR-DGGE技術(shù)分別對(duì)污染樣地和對(duì)照樣地的不同季節(jié)和不同深度土壤樣品16SrDNA的V3區(qū)進(jìn)行電泳分離，DGGE圖譜使用Quant

3、ityone軟件對(duì)其做聚類分析，并對(duì)圖譜中的主要條帶回收做克隆測(cè)序。②DGGE圖譜各泳道相似性矩陣結(jié)果表明，同一季節(jié)的土樣在垂直分布上細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)相似性較高，而不同季節(jié)樣品細(xì)菌組成差異性顯著。③石油污染樣地中各泳道之間的相似性大部分上在50％以上，只有個(gè)別泳道間的相似性在45%左右，說(shuō)明隨著季節(jié)的變化細(xì)菌種群的更替現(xiàn)象不明顯，同時(shí)也說(shuō)明石油烴類物質(zhì)對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)有一定的抑制作用，使微生物的種群趨于單一化。而對(duì)照樣地（非石油污染樣地）各泳道

4、的相似性系數(shù)較低，差異相對(duì)顯著，細(xì)菌群落隨季節(jié)變化明顯；說(shuō)明石油烴類物質(zhì)是影響克拉瑪依采油滲油區(qū)的重要因素。
　　石油污染土壤的可培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)16SrDNA的V3區(qū)的分子與傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定，初步篩選了14株細(xì)菌。對(duì)這14株細(xì)菌進(jìn)行生物學(xué)特性的研究，經(jīng)牛肉膏液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)，測(cè)其OD值，依次獲得了各菌株的最適pH、最適生長(zhǎng)溫度、耐鹽度及生長(zhǎng)曲線。在此基礎(chǔ)上對(duì)各個(gè)菌株的生理生化特征進(jìn)行分析，研究結(jié)果表明石油污染土壤可培養(yǎng)細(xì)菌結(jié)構(gòu)