杭州灣濕地一種原生動(dòng)物的采集與描述【畢業(yè)設(shè)計(jì)】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)</b></p><p><b>　?。?0_ _屆）</b></p><p>　　杭州灣濕地一種原生動(dòng)物的采集與描述</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 生

2、物技術(shù) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目　錄</b>

3、;</p><p><b>　　1.引言</b></p><p>　　1.1 濕地的定義5</p><p>　　1.2杭州灣濕地的情況5</p><p>　　1.3杭州灣濕地的現(xiàn)狀及存在的問題6</p><p>　　2纖毛原生蟲動(dòng)物的概述</p><p>　　2.1纖

4、毛蟲的概述及特點(diǎn) 6</p><p>　　2.2 纖毛蟲在濕地環(huán)境保護(hù)中的作用和重要性7</p><p>　　3.歷史研究現(xiàn)狀與進(jìn)展7</p><p>　　4.纖毛蟲的采集分離與培養(yǎng)</p><p><b>　　4.1采集8</b></p><p><b>　　4.2 分離8&

5、lt;/b></p><p><b>　　4.3 培養(yǎng)8</b></p><p>　　5．活體觀察方法9</p><p><b>　　6.染色法</b></p><p><b>　　6.1蛋白銀法9</b></p><p>　　6.2銀氨染色

6、法10</p><p><b>　　7．實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論</b></p><p>　　7.1 耳狀偏喇叭蟲的的形態(tài)描述11 </p><p>　　7.2與一些相似種的比較11</p><p><b>　　結(jié)論21</b></p><p><b>　　參考文

7、獻(xiàn)22</b></p><p><b>　　致謝23</b></p><p><b>　　附錄24</b></p><p>　　摘要：杭州灣濕地為華東重要的濕地之一，位于錢塘江口杭州灣南岸慈溪市北郊，是典型的濱海河口濕地.近年來隨著產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，各類沿海開發(fā)區(qū)的建立，使得海岸濕地面積大

8、幅度減少。濕地生態(tài)平衡遭到嚴(yán)重破壞，水生、底棲動(dòng)物和水鳥的棲息面積顯著減少。對(duì)杭州灣濕地的保護(hù)迫在眉睫，主要體現(xiàn)在生態(tài)環(huán)境及生物多樣性保護(hù)與治理等。纖毛蟲原生動(dòng)物作為優(yōu)良的指示生物，在環(huán)境監(jiān)測(cè)中扮演重要角色。而對(duì)該類生物的形態(tài)學(xué)研究是各類相關(guān)研究開展的基礎(chǔ)。鑒于此，對(duì)杭州灣濕地內(nèi)纖毛蟲的生物多樣性做了詳細(xì)的調(diào)查研究。該文采用現(xiàn)代銀染等方法，對(duì)耳狀偏喇叭蟲（Condylostentor auriculatus） 的形態(tài)學(xué)及纖毛圖示做了詳細(xì)

9、的研究和描述。</p><p>　　關(guān)鍵詞：杭州灣濕地；纖毛蟲原生動(dòng)物；形態(tài)描述</p><p>　　ABSTRACT: Hangzhou Bay wetland is one of the important wetlands in East China. It is a typical river-costal wetland which is located in the sout

10、h bank of Hangzhou Bay.In the recent years,With the adjustment of industrial structure, the delelopment of aquaculture industry, the construction of various types of economic coastal zone,which reduces the area of wetlan

11、d and destroys the ecology of wetland. The protection of Hangzhou Bay wetland is in the face ,especially the ecological environment and</p><p>　　KEYWORDS: Hangzhou Bay wetlands;ciliate protozoa; morphology.&

12、lt;/p><p><b>　　1 引言</b></p><p>　　濕地為陸生生態(tài)系統(tǒng)和水生生態(tài)系統(tǒng)之間的過渡性地帶,在維持區(qū)域生態(tài)平衡、保持生物多樣性和珍惜物種資源，尤其在調(diào)節(jié)氣候、水質(zhì)凈化、均化洪水等方面有不可替代的作用。杭州灣濕地為華東重要的濕地之一，被列入《中國(guó)重要濕地名錄》，位于錢塘江口杭州灣南岸慈溪市北郊，是典型的濱海河口濕地。是整個(gè)杭州灣以及東海海岸帶中，

13、面積最大、保存濕地生態(tài)系統(tǒng)較為完整和濕地生態(tài)環(huán)境質(zhì)量最好的濕地區(qū)域，是我國(guó)14個(gè)全球遷徙候鳥棲息濕地區(qū)域之一。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、圍墾造田以及工業(yè)化程度的加快，濕地面臨著面積減少和嚴(yán)重的水污染問題。纖毛蟲是水生生態(tài)系統(tǒng)的重要生物類群,對(duì)物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)起著調(diào)控作用;由于纖毛蟲對(duì)環(huán)境變化反應(yīng)敏感,因此可作為指示生物在濕地保護(hù)中扮演重要角色。而對(duì)纖毛蟲的生物形態(tài)學(xué)研究是各類相關(guān)研究開展的基礎(chǔ)，鑒于此，對(duì)杭州灣濕地內(nèi)若干種異毛類纖毛蟲的形態(tài)學(xué)做

14、詳細(xì)研究。 </p><p>　　1.1 濕地的定義和功能</p><p>　　濕地為天然或人工、常久或暫時(shí)性的沼澤地、濕原、泥炭地或水域地帶，帶有或靜止或流動(dòng)、或?yàn)榈?、半咸水或咸水水體，包括低潮時(shí)水深不超過六米的水域。濕地是世界上生產(chǎn)力最高的生態(tài)環(huán)境之一[1]，</p><p>　　被稱為“地球之腎”，與森林，為生物多樣性的搖籃。海洋并稱地球上的三大生態(tài)系統(tǒng)，是

15、處于陸地生態(tài)系統(tǒng)與水生生態(tài)系統(tǒng)之間，為陸地與水域之間的過度地帶。濕地不僅為人類提供大量食物、原料和水資源。且在維持區(qū)域生態(tài)平衡、保持生物多樣性和珍惜物種資源，尤其在調(diào)節(jié)氣候、水質(zhì)凈化、均化洪水等方面有不可替代的多樣性[2]。主要包括三角洲濕地、濱岸沼澤、淤泥質(zhì)海岸、紅樹林沼澤、海岸潟湖、砂質(zhì)海岸濕地等幾種主要濕地類型[3]，從水質(zhì)上可分為海岸濕地，淡水濕地，也可從存在時(shí)間的長(zhǎng)短上分為長(zhǎng)久性濕地和海潮，洪水形成的季節(jié)性濕地等。 </

16、p><p>　　1.2 杭州灣濕地的情況</p><p>　　杭州灣濕地為華東重要的濕地之一,為錢塘江口延伸的河口灣，是喇叭形的河口灣，處在亞熱帶季風(fēng)區(qū)，被列入《中國(guó)重要濕地名錄》，位于錢塘江口杭州灣南岸慈溪市北郊，是典型的濱海河口濕地[4]。杭州灣海濕地的形成和發(fā)育受東海錢塘江口潮汐泥沙沉積、臺(tái)風(fēng)沖蝕、灘涂擴(kuò)展和人類長(zhǎng)期圍墾的雙重影響。慈溪素有“唐灘宋地”之說，自公元11世紀(jì)以來，歷代筑堤趕

17、海、圍涂造地，寸土斗汗，先鹽后墾，百里滄海終成沃野。因此杭州灣濱海濕地是在錢塘江河口灘涂本身不斷的自然增長(zhǎng)與人類持續(xù)圍墾的矛盾運(yùn)動(dòng)中，形成并保留下來的具有東亞太平洋西岸北亞熱帶濱海潮汐河口濕地特征意義的濕地。杭州灣濕地在溫和濕潤(rùn)、雨量豐沛、四季分明的北亞熱帶南緣濱海季風(fēng)氣候和潮汐的水文條件下，發(fā)育了大面積的半咸水河口沼澤濕地植被，并成為從多野生動(dòng)物的天然棲息地，是整個(gè)杭州灣以及東海海岸帶中，面積最大、保存濕地生態(tài)系統(tǒng)較為完整和濕地生態(tài)環(huán)

18、境質(zhì)量最好的濕地區(qū)域，是我國(guó)14個(gè)全球遷徙候鳥棲息濕地區(qū)域之一[5]。由于濕地處在河口即陸域河川淡水與大洋咸水交匯過渡地帶的自然地理和環(huán)境特征、濕地類型等方面的代表意義，杭州灣濱海濕地區(qū)域成為我國(guó)八大濕地區(qū)域之一，而位于該濕地</p><p>　　1.3 杭州灣濕地的現(xiàn)狀以及存在問題</p><p>　　近年來隨著產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，各類開發(fā)區(qū)林立，使得海岸濕地面積大幅度減少

19、。濕地聲討平衡破壞，濕地水生、底棲動(dòng)物和濕地水鳥的棲息面積減少</p><p>　　人口數(shù)量的大幅度增加和工業(yè)化程度的加快，給濕地水域環(huán)境帶來了嚴(yán)重的污染。污染源主要來自錢塘江。據(jù)報(bào)道僅滬、杭、甬三市每年向海域的排污就達(dá)到了30X108t。它們直接影響了杭州灣的。此外，工業(yè)企業(yè)、港口船舶、捕撈作業(yè)所帶來的油污然也十分嚴(yán)重[7]。濕地污染不僅使水質(zhì)惡化，也對(duì)濕地生物多樣性造成了嚴(yán)重危害。沿海海域日趨嚴(yán)重的海水富營(yíng)養(yǎng)

20、化使得漁業(yè)生物原來的棲息地受到影響，給漁業(yè)生產(chǎn)以及沿海養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。</p><p>　　2 纖毛原生蟲動(dòng)物的概述</p><p>　　2.1纖毛蟲的概述及特點(diǎn) </p><p>　　纖毛蟲屬于原生動(dòng)物界中的纖毛門，他們特化程度最高，最為復(fù)雜的一大類群。它們的整個(gè)細(xì)胞或者部分表面具有纖毛。目前已知的 有近萬種。按生活方式，可分為固著型和游泳型2種[8]

21、。它們的主要特征為：大多數(shù)纖毛蟲在生活史的某一個(gè)階段有纖毛，以纖毛作為運(yùn)動(dòng)細(xì)胞器和捕食器；無性生殖為橫二分裂；有性生殖為特殊的接合生殖；具有大核和小核，前者為多倍體司營(yíng)養(yǎng)，后者為二倍體，司生殖和遺傳；生活方式有自由生、共生、共棲以及寄生等[9]。纖毛在蟲體表面有節(jié)律地順序擺動(dòng)，形成波狀運(yùn)動(dòng)，加之纖毛在排列上稍有傾斜,因而推動(dòng)蟲體以螺旋形旋轉(zhuǎn)的方式向前運(yùn)動(dòng)。蟲體也可依靠纖毛逆向擺動(dòng)而改變運(yùn)動(dòng)方向，向后移動(dòng)等。在蟲體的近前端有一明顯的胞口，

22、下接胞咽，后端有一個(gè)較小的胞肛。多數(shù)纖毛蟲營(yíng)自生生活，少數(shù)可寄生于無脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物的消化道內(nèi)。.纖毛蟲，特別是寡毛類，是海洋微生物食物鏈中重要的一員，微生物食物環(huán)的一個(gè)組成部分,他們對(duì)營(yíng)養(yǎng)和養(yǎng)分循環(huán)通量作出巨大貢獻(xiàn)[10]。</p><p>　　2.2 纖毛蟲在濕地環(huán)境保護(hù)中的作用和重要性</p><p>　　根據(jù)水體受到污染的程度不同，污化系統(tǒng)中的污化帶分為多污帶中污帶、α-中污帶

23、、β-中污帶和寡污帶[11]。而在不同的污染帶中生活著不同類型的纖毛蟲。</p><p>　　各種生物對(duì)環(huán)境要求不一。指示生物又叫生物指標(biāo)物，就是指那些在一定地區(qū)范圍內(nèi)，能通過其特性、數(shù)量、種類和種群等變化，指示環(huán)境或某一環(huán)境因子特征的生物。在 一定程度下，某些纖毛蟲可作為指示生物判斷水體的污染程度[12]。纖毛蟲是水生生態(tài)系統(tǒng)的重要生物類群,對(duì)系統(tǒng)中物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)起著重要的調(diào)控作用。纖毛蟲屬于單細(xì)胞動(dòng)物,具

24、有比表面積大、對(duì)外環(huán)境的變化反應(yīng)敏感等特點(diǎn),因此,常作為監(jiān)測(cè)、評(píng)價(jià)和預(yù)報(bào)生態(tài)環(huán)境質(zhì)量的指示生物。在多種污染物并存時(shí),能通過反映生物群落特征的各級(jí)指標(biāo)連續(xù)監(jiān)測(cè)來綜合表征環(huán)境質(zhì)量狀況,且具有直觀性強(qiáng)、快速、靈敏度高和廉價(jià)等特點(diǎn),可實(shí)現(xiàn)早期預(yù)報(bào)[13]。</p><p>　　原生動(dòng)物在污水中有凈化作用。纖毛蟲在原生動(dòng)物中是最高級(jí)的，它攝食細(xì)菌的能力更為復(fù)雜，其中有一些專門吃細(xì)菌的種類。如波豆蟲屬、屋滴蟲屬等。實(shí)驗(yàn)室條件

25、下，活性污泥中沒有纖毛蟲出水中游離的細(xì)菌數(shù)量超過100百萬個(gè)/毫升，接種了纖毛蟲，水中游離細(xì)菌數(shù)量只有1百萬個(gè)/毫升[14]。</p><p>　　在污水處理中起重要作用的是細(xì)菌和原生動(dòng)物，在原生動(dòng)物中纖毛蟲占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，它們直接利用廢水中的有機(jī)物質(zhì)，研究表明原生動(dòng)物的過氧化酶遠(yuǎn)高于細(xì)菌，利用細(xì)菌分解產(chǎn)生的氨基酸為氮源，參與氧化作用，使有機(jī)物、氨基酸、水溶性磷濃度下降[15]。</p><p&g

26、t;　　除了人工加以利用，纖毛蟲本身對(duì)水體也有凈化作用。當(dāng)水體發(fā)生污染后，水體中的纖毛蟲會(huì)分泌粘多糖等物質(zhì)，將懸浮的顆粒物凝集成絮狀沉淀[16]. </p><p>　　3 歷史研究現(xiàn)狀與進(jìn)展</p><p>　　有關(guān)纖毛蟲的研究可追溯到17世紀(jì)后期，1674年列文虎克用自制顯微鏡首次發(fā)現(xiàn)并描述了纖毛蟲，至今已有300多年的歷史.</p><p>　　我國(guó)的纖毛蟲

27、研究始于本世紀(jì)20年代，至50-60年代對(duì)各類自由生活以及海膽體內(nèi)共棲的纖毛蟲的分類學(xué)、分類學(xué)、地理分布以及生態(tài)學(xué)等領(lǐng)域，做了許多開拓性的工作。但出于某種原因，在隨后的20年里出現(xiàn)了暫停，直到80年代又興起。隨著研究工具的進(jìn)步國(guó)際上對(duì)纖毛蟲的研究在60年代到70年代，由建立在活體觀察水平上轉(zhuǎn)為對(duì)纖毛蟲的超微結(jié)構(gòu)以及分子生物學(xué)特征進(jìn)行揭示[17]。目前我國(guó)在本領(lǐng)域的研究處于初步于起步的階段，主要涉及形態(tài)分類學(xué)、系統(tǒng)學(xué)、細(xì)胞發(fā)生學(xué)、病害學(xué)等

28、幾門分支學(xué)科，但任有許多的領(lǐng)域是空白的。 </p><p>　　近年來，對(duì)于微型浮游動(dòng)物的研究受到人們的重視，因?yàn)樗腿藗兊纳a(chǎn)和經(jīng)濟(jì)息息相關(guān)。所以對(duì)于形態(tài)學(xué)的研究意義是非常重大的，因?yàn)槟壳叭藗儗?duì)濕地的保護(hù)意識(shí)很少，對(duì)杭州灣濕地地區(qū)的原生動(dòng)物研究更是處于起步階段，原生動(dòng)物的采集與描述形態(tài)學(xué)研究是為相關(guān)領(lǐng)域的進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)性資料[18]。大致的技術(shù)路線為采樣、室外測(cè)理化性質(zhì)、室內(nèi)鑒定、活體觀察和染色觀察。

29、目前纖毛蟲原生動(dòng)物形態(tài)學(xué)研究的常用方法有活體觀察法、甲基綠-派洛寧臨時(shí)核器染色法、蛋白銀法、電鏡掃描法等。只有各種方法相互結(jié)合，相輔相成才能夠得到一個(gè)完整的纖毛蟲形態(tài)學(xué)描述。在研究纖毛蟲系統(tǒng)發(fā)育上也采用了分子系統(tǒng)發(fā)育學(xué)[19]。</p><p>　　4 纖毛蟲的采集分離與培養(yǎng)</p><p><b>　　4.1 采集</b></p><p>　

30、　于2011年3月從杭州灣濕地采集纖毛蟲原生動(dòng)物，并現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定部分理化因子，如水溫、鹽度、PH、溶解氧等。</p><p><b>　　4.2 分離</b></p><p>　　因采集后蟲體處于一個(gè)非正常的、高度濃縮了的群落結(jié)構(gòu)中，為避免所獲種類消亡，應(yīng)在數(shù)小時(shí)內(nèi)對(duì)其進(jìn)行分離處理。</p><p>　　分離于解剖鏡下進(jìn)行，根據(jù)蟲體的大小而選用不同

31、口徑的微吸管將所需蟲體挑選至已備好的培養(yǎng)皿或多孔凹玻片內(nèi)(對(duì)于蟲體數(shù)量不多時(shí)推薦后者)。當(dāng)用多孔凹玻片分離蟲體時(shí)，為防止干涸，分離后的玻片即應(yīng)置于潮濕房?jī)?nèi)。分離后應(yīng)立即對(duì)分離標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)，通常采用的編號(hào)方法為年-月-日-序號(hào)(如2011-3-15-1)，同時(shí)還應(yīng)在同一張記錄紙上記錄采集人、采集地及主要生境特征(如溫度、鹽度等)等。</p><p>　　如不能立刻分離時(shí)，則建議加培養(yǎng)水或清潔水至樣品內(nèi)(至少等量)加

32、以稀釋，并置于低于原水環(huán)境5-10℃的培養(yǎng)箱內(nèi)保存(但此保存期不應(yīng)超過24小時(shí))。</p><p>　　分離時(shí)應(yīng)注意：為獲得“純”的個(gè)體，并避免由于微吸管沾附而帶來的污染，所取個(gè)體應(yīng)先至少轉(zhuǎn)入一中間水體中，經(jīng)此前再次“分離”而建立最后的培養(yǎng)，其間所用吸管可吸取熱水(>60℃)數(shù)次以清除管內(nèi)雜混種類。</p><p>　　分離后，從次日起應(yīng)每日對(duì)所分離蟲體進(jìn)行檢查，以了解其存活情況，同

33、時(shí)在必要時(shí)進(jìn)行剔除雜質(zhì)及其他混入生物、轉(zhuǎn)移培養(yǎng)水體、補(bǔ)充餌料或進(jìn)一步分離純化等操作。分離后的原始水樣應(yīng)力求較長(zhǎng)時(shí)間地保存，目的在于發(fā)現(xiàn)其他數(shù)量較少而尚未被發(fā)現(xiàn)的種類，故也應(yīng)每日鏡檢1-2次，對(duì)此水樣在必要時(shí)應(yīng)做稀釋（如高污染或過富水樣）或適當(dāng)?shù)慕禍靥幚恚ㄈ缭瓉硭w如此）。</p><p><b>　　4.3 培養(yǎng)</b></p><p>　　根據(jù)所要培養(yǎng)蟲體的單一程度

34、可將培養(yǎng)類型分為三種, 粗培養(yǎng), 純培養(yǎng)和克隆培養(yǎng),而本次試驗(yàn)我們選用的是粗培養(yǎng)。</p><p>　　粗培養(yǎng)：直接用毛細(xì)管吸取原采集樣至培養(yǎng)皿中, 解剖鏡下去除大型后生動(dòng)物及多余的沉積物, 加適量米?；蚣糸_的麥粒和原采集地的水以致富細(xì)菌(水較富時(shí)也可不加)。通常每天檢查1-2次, 以除掉一些不需要培養(yǎng)卻快速繁殖的種, 且每天需要更新大約原來一半數(shù)量的培養(yǎng)水[20] </p><p>　　

35、此種培養(yǎng)對(duì)于不易建立純培養(yǎng)的種類或小型種類特別值得提倡。此外當(dāng)培養(yǎng)水體中種類較豐富而個(gè)體數(shù)量(總數(shù)量)不大時(shí), 均可采取此方法以達(dá)到富集蟲體且最大限度地保存各種的目的。此方法由于蟲體生活在原來的水環(huán)境內(nèi), 較之純培養(yǎng)更易于全面地檢獲和保存標(biāo)本, 因此也更多地應(yīng)用于對(duì)某生境所有種類的構(gòu)成研究上。</p><p><b>　　5 活體觀察</b></p><p>　　活

36、體觀察在纖毛蟲形態(tài)學(xué)研究中占有重要的地位。通過活體觀察可以獲取纖毛蟲活體細(xì)胞大小、外形、運(yùn)動(dòng)、纖毛器、伸縮泡、食物泡、內(nèi)質(zhì)顆粒及射出體等一些經(jīng)銀染后無法獲得的分類學(xué)特征。但是其很難獲得大多數(shù)纖毛器和纖毛圖式等方面的細(xì)節(jié)，故纖毛蟲形態(tài)的全面描述需通過活體觀察與銀染法兩種方法的結(jié)合才能進(jìn)行。</p><p>　　具體步驟：解剖鏡下用毛細(xì)吸管吸一小滴蟲體，液量以將蓋玻片壓至極限而水不至于從四邊溢出為度；然后置于載玻片上

37、，加蓋玻片(四周涂以少許凡士林以避免直接壓在蟲體上)；先在低倍鏡下觀察 ，至少選取大、中、小三個(gè)不同個(gè)體以得到蟲體變幅的信息，記錄蟲體的大小、外形，觀察個(gè)體間的外形差異，同一個(gè)體的外形變化，運(yùn)動(dòng)特征，然后于中倍鏡下觀察(輕壓蓋玻片至蟲體略微變形但仍可運(yùn)動(dòng))，記錄纖毛及纖毛器(長(zhǎng)度，分布和排列特征等)，伸縮泡(位置/數(shù)目以及形成過程，排空間歇時(shí)間，有無收集管等)、內(nèi)質(zhì)情況(有無特殊的油球、空泡、結(jié)晶體、食物泡數(shù)目/分布特征等)、色素體的有

38、無及體色；最后可于油鏡下觀察，輕壓蓋玻片至蟲體完全無法運(yùn)動(dòng)為止，此時(shí)應(yīng)特別注意細(xì)胞的表膜結(jié)構(gòu)、纖毛特征、射出體的有無/分布/形態(tài)、伸縮泡的形成及變化過程、食物泡和內(nèi)質(zhì)/表膜下顆粒分布特點(diǎn)等分類學(xué)特征[21]。</p><p>　　活體觀察采用的顯微鏡為光學(xué)顯微鏡，必要時(shí)也可采用微分干涉顯微鏡，需邊觀察邊拍照。</p><p><b>　　6 染色法</b></p

39、><p>　　本次實(shí)驗(yàn)中用到一種染色方法：蛋白銀染色法。在以往的各種描述方法中，許多工作都使用傳統(tǒng)的方式進(jìn)行只有很少一部分種類的形態(tài)在分子水平上被述過。只有大約一半用了銀染方法[22]。</p><p><b>　　6.1蛋白銀染色法</b></p><p>　　蛋白銀染色技術(shù)最早為一組織染色法, Bodion 1937年首先將之應(yīng)用于原生動(dòng)物上，

40、傳統(tǒng)染色液的配制是在蛋白銀溶液內(nèi)放入金屬銅[23]。經(jīng)過幾十年來不斷的改進(jìn)，已成為纖毛蟲纖毛圖式顯示的最重要和最基本的方法。本方法對(duì)大部分纖毛蟲的染色效果極佳，但對(duì)于咽膜類、腎形類及籃環(huán)目等類群則常常不夠理想。其主要用以顯示蟲體的皮層及內(nèi)部結(jié)構(gòu)，如纖毛下器、毛基體、核器及各種表膜下纖維系統(tǒng)等，而銀線系統(tǒng)則不被染色。</p><p><b>　　具體步驟： </b></p>&l

41、t;p>　　(1)將培養(yǎng)皿中的蟲體用微吸管吸至含有Bouin液和飽和升汞(HgCl2)的胚胎皿固定5-10min；</p><p>　　(2)用蒸餾水洗3-4次(Bouin液水洗至無色為止)；</p><p>　　(3)用最細(xì)微吸管小心將蟲體“吹”至胚胎皿中心；</p><p>　　(4)用微吸管吸取0.1-0.2%的次氯酸鈉(NaClO)或次氯酸鉀(KClO

42、)微量直接供至蟲體處以漂白至“透明”(約1-2min)。</p><p>　　(5)蒸餾水洗2-4次(以清洗完全為度)，同步驟（2）；</p><p>　　(6)滴加濃度控制在約0.5%的蛋白銀，加蓋，然后在90℃的加熱板上保持30~50min (視不同種類的嗜染狀況及蟲體大小而調(diào)整時(shí)間)；</p><p>　　(7)室溫下用0.1-0.2 %的顯影液顯影1-5mi

43、n (或更短)；</p><p>　　(8)鏡檢后用5%的硫代硫酸鈉(Na2S2O3)定影約5min；</p><p>　　(9)蒸餾水洗一次(此時(shí)應(yīng)清潔蟲體)，將蟲體轉(zhuǎn)入已涂有等量蛋白膠的載玻片上，混勻，用眉毛筆調(diào)體位(在必要時(shí)，如需腹面朝上等)，除去余液，至加熱板上烘片約10min；</p><p>　　(10)常規(guī)脫水封片(70%酒精起－80%－90%－95%

44、－100%－100%－無水酒精和二甲苯混合液(1：1)－二甲苯－二甲苯，以上過程每步約2-5min，其中在無水酒精中每步應(yīng)不少于5min，以確保徹底脫水)。</p><p>　　又名碳酸銀染色法。此染色法的突出特點(diǎn)是快速簡(jiǎn)便，顯示功能強(qiáng)，應(yīng)用得當(dāng)時(shí)可在十幾分鐘內(nèi)得到高質(zhì)量的類似蛋白銀的染色效果。這對(duì)于許多不易用蛋白銀染色的種類如大部分咽膜目類，腎形目類及籃環(huán)目類尤其突出。</p><p>

45、<b>　　7 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論</b></p><p>　　7.1耳狀偏喇叭蟲 </p><p>　　活體通常有250um長(zhǎng)，體長(zhǎng)和體寬的比例為2:1，形狀多變,但多為圓錐形，倒鐘形或喇叭形，甚至在某些纖長(zhǎng)的個(gè)體中可以呈“T”型（圖1E-G)。蟲體的前部分有時(shí)候很寬大，且在口圍帶邊緣形成了一個(gè)很深的前庭腔(圖1A, E-G 箭頭所示)，前庭腔在腹面上的深凹槽處中斷，與

46、細(xì)胞咽有清晰的界限(圖.1A, 箭頭指示出)。蟲體的后末端逐漸變窄并形成一對(duì)細(xì)圓型的尾端(圖 1E-G)。</p><p>　　在蟲體的表面有濃密的纖毛覆蓋，并且呈現(xiàn)很好地、有規(guī)律的排列，呈縱向并形成條紋狀(圖1H)。表皮遍布許多深灰色的呈橢圓形的皮質(zhì)顆粒，大約有1—1.5微米長(zhǎng)，密集排布于兩排纖毛列之間（圖 1B-D)。細(xì)胞質(zhì)無色或者淺灰色，由于食物泡、食物顆粒等內(nèi)含物的存在，以及較厚的細(xì)胞膜，所以通常使蟲體看

47、上去是不透明的。食物泡內(nèi)通常含有硅藻或其它有機(jī)碎屑。并沒有觀察到有伸縮泡的存在。大核呈現(xiàn)念珠狀，通常有17-34個(gè)結(jié)節(jié)，在蟲體前部呈現(xiàn)彎曲，整串大核呈 “J”字形。在用蛋白銀染色方法處理后，每個(gè)大核的結(jié)節(jié)處看上去充滿了卵圓形的核仁。不能夠觀察到小核的存在。蟲體通常通過后末端固著在基質(zhì)上，但是當(dāng)受到驚嚇時(shí)會(huì)容易游動(dòng)和離開。當(dāng)在水體中游動(dòng)的時(shí)候，細(xì)胞沿著身體主軸慢慢旋轉(zhuǎn)游動(dòng)。</p><p>　　圖1A,4A-E顯示

48、的是口器?？诰壞っ黠@且有200片小膜組成，纖毛有大約30um長(zhǎng)。口圍帶沿著圍口沿幾乎封閉，但是在伸入前庭腔之前被腹面上的一個(gè)深裂口截?cái)?。在前庭腔之?nèi)口圍帶又進(jìn)一步旋轉(zhuǎn)了一圈半（圖1A箭頭）?？趪鷰У哪┒瞬糠值哪ぐ甑幕看蠹s有10-15微米長(zhǎng)且明顯長(zhǎng)于近端部分的那些。每個(gè)小膜通常由三排動(dòng)體，兩長(zhǎng)一短。口側(cè)膜十分明顯且在結(jié)構(gòu)上是雙向的：外層部分由許多成對(duì)的動(dòng)體組成且里面部分由許多密集單位。大約有19-28前庭動(dòng)體密集得沿前庭腔上壁排列，但在

49、前庭腔底部或中部地區(qū)沒有動(dòng)體。</p><p>　　大約有80-120列有雙動(dòng)基體組成的動(dòng)基列。所有的動(dòng)基列在背部幾乎延伸整個(gè)體長(zhǎng)，在腹面有些動(dòng)基列明顯縮短，形成一條縫合線。動(dòng)基列排布對(duì)比區(qū)十分明顯。</p><p>　　7.2 相似物種的比較 </p><p>　　基于耳狀偏喇叭蟲的一般形態(tài)，其與另外一海洋種---王氏突口蟲，十分相似。-王氏突口蟲的活體形<

50、/p><p>　　態(tài)及圖文描述由王家輯在1934年提出，但該種一直以來都缺少纖毛圖示的信息。但是該種仍然可以與耳狀偏喇叭蟲清楚地區(qū)別開來。</p><p>　　因?yàn)樵摲N的體內(nèi)存在有大量的共生綠藻（zoochlorellae），它使細(xì)胞在活體時(shí)呈深綠色（相比較之下，耳狀偏喇叭蟲體內(nèi)不存在有共生綠藻）（王1934）。根據(jù)其一般形態(tài)，我們可以推斷王氏突口蟲很有可能是偏喇叭蟲屬于中的一個(gè)種，但因?yàn)槿鄙?/p>

51、詳細(xì)的纖毛圖示的信息，所以我們不能確定該推斷是否正確。</p><p>　　另外一些與耳狀偏喇叭蟲形態(tài)相似的應(yīng)該作比較的種包括：Stentor auricula Kent, 1881, Stentor multiformis (Müller, 1786) Ehrenberg, 1838, Stentor muelleri Ehrenberg, 1831, Stentor caudatus Dragesc

52、o, 1970, Stentor polymorphus (Müller, 1773) Ehrenberg, 1830, Stentor coeruleus (Pallas, 1766) Ehrenberg, 1831, and Stentor introversus Tartar, 1958. 其中Stentor auricula與 耳狀偏喇叭蟲在體型和海中棲息地最相似, 盡管它不同之處是在后面有一個(gè)球狀 (和耳狀偏喇叭蟲念

53、珠狀相比較的話) 大核(Kent 1881, Foissner 和 Wölfl 1994）。 </p><p>　　Stentor multiformis,從海洋和淡水棲息地中均有報(bào)道，與耳狀偏喇叭蟲的不同之處在于所含的動(dòng)體器列較少（34-45VS.80-120),口器完全不同，一個(gè)球形的（與耳狀偏喇叭蟲的念珠狀相比較）大核。耳狀偏喇叭蟲可以通過以下綜合的特征中從相似的喇叭蟲屬中分離出來：在活體時(shí)的形態(tài)

54、，細(xì)胞尺寸，動(dòng)體器列數(shù)目，圍口纖毛的紋路和生境。</p><p><b>　　8 結(jié)論</b></p><p>　　海洋纖毛蟲的物種多樣性及典型環(huán)境中的區(qū)系研究是當(dāng)前國(guó)際原生動(dòng)物學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一，該類生物在生態(tài)系統(tǒng)微食物網(wǎng)、環(huán)境監(jiān)測(cè)與修復(fù)、以及水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域中扮演著重要角色。濱海濕地作為少數(shù)幾個(gè)物種多樣性極其豐富的生態(tài)系統(tǒng)之一，但有關(guān)該生境內(nèi)纖毛蟲分類學(xué)與生態(tài)學(xué)的研

55、究目前在國(guó)際、國(guó)內(nèi)均少有報(bào)道。本工作以我國(guó)八大咸水濕地之一的杭州灣濕地為采樣點(diǎn)，初步開展該水域內(nèi)纖毛蟲的形態(tài)分類學(xué)研究。對(duì)所采集耳狀偏喇叭蟲的形態(tài)學(xué)做了詳細(xì)的描述和報(bào)道，為杭州灣濕地中纖毛蟲物種多樣性及區(qū)系構(gòu)成提供了檔案性資料。</p><p>　　表格1. Condylostentor auriculatus 的2個(gè)種群的形態(tài)學(xué)特征</p><p>　　(第一行 - 種群1; 第二行 -

56、 種群2). 數(shù)據(jù)是根據(jù)蛋白銀浸漬法標(biāo)本 測(cè)量單位用微米 (CV, 變異系數(shù)用 %; Mean, 算術(shù)平均數(shù); Max, 最大值; Min, 最小值; n,被測(cè)試的物種的數(shù)目; SD,標(biāo)準(zhǔn)差) 。</p><p>　　性狀 最小值最大值 算術(shù)平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差 變異系數(shù) 被測(cè)試的物種的數(shù)目</p><p>　　體長(zhǎng) 128256

57、195.739.4020.121</p><p>　　170280227.335.4015.615</p><p>　　體寬 104160131.917.6713.421</p><p>　　130215173.323.5013.615</p><p>　　大核結(jié)節(jié)的

58、數(shù)量 173022.02.9313.321</p><p>　　183425.54.3216.615</p><p>　　大核結(jié)節(jié)的長(zhǎng)度 52013.13.5527.132</p><p>　　123019.85.3326.715&l

59、t;/p><p>　　大核結(jié)節(jié)的寬度 51610.52.8827.432</p><p>　　82013.53.5827.515</p><p>　　口膜的數(shù)量 140210174.217.319.919</p><p>　　1

60、60227195.318.849.715</p><p>　　動(dòng)體器列的數(shù)量 809487.35.276.020</p><p>　　前庭動(dòng)體的數(shù)量 192822.52.4510.917</p><p>　　132319.22.6813.9

61、1</p><p>　　表格 2. Condylostentor auriculatus 形態(tài)學(xué)的比較和一些與 Condylostentor及 Stentor較接近的相關(guān)的形態(tài)類型</p><p>　　性狀 C. auriculatusC. wangi* S. muelleriS. multiformisS. caudatus S.

62、 polymorphusS. coeruleusS.introversus</p><p>　　活體細(xì)胞(µm) 長(zhǎng)度230-270ca. 300 500-1000 200-500450-1000 ca. 2000ca. 4000 450-580</p><p>　　動(dòng)體器列的長(zhǎng)度 80-120- 30-50 34

63、-4578-90 ca. 100 55-100 -</p><p>　　圍口纖毛列的數(shù)目 13-28- ca. 10 6-9ca. 67 ca. 50 20-30 -</p><p>　　口圍膜處膜的數(shù)量 140-227- - 100-150ca. 160 ca. 2

64、00ca. 150 -</p><p>　　大核結(jié)節(jié)數(shù) 17-3418-20 0-20 113-21 5-206-20 -</p><p>　　大核的形狀 念珠形 念珠形 念珠形 球形念珠形 念珠形 念珠形 念珠形</p>

65、<p>　　皮質(zhì)顆粒的顏色 深灰- 褐色 藍(lán)色- 無色 青綠色 -</p><p>　　細(xì)胞顏色 灰棕色 深綠 褐色 藍(lán)色- 綠色 綠色 -</p><p>　　液泡 沒有

66、沒有 有 有 有 有 有 有</p><p>　　伸縮性 輕微 輕微 強(qiáng)烈 輕微輕微 強(qiáng)烈 強(qiáng)烈 強(qiáng)烈</p><p>　　棲息地 海洋海洋 淡水 淡水淡水 淡

67、水 淡水 淡水和海水</p><p>　　數(shù)據(jù)來源研究提供Wang,Foissner et Foissner etDragesco, Foissner et Foissner et Tartar</p><p>　　1961 1934 al., 1992 al., 1992 1970

68、 al., 1992al., 1992</p><p>　　圖1 耳狀偏喇叭蟲活體（A-H）的和經(jīng)過蛋白銀浸漬法處理過后的（I).</p><p>　　有代表性的個(gè)體的腹面。箭頭指向細(xì)胞咽。B 薄皮在體前部，顯示了皮質(zhì)顆粒。 C，D 顯示在身體中，后部分的皮質(zhì)顆粒。E,G。四個(gè)標(biāo)本側(cè)位，箭頭標(biāo)志前庭腔。H.細(xì)長(zhǎng)個(gè)體的腹側(cè)，箭頭指示縱向條紋。I.總體圖，以顯示核器。 AZM，口圍膜，M

69、A，大核 ，OP:口腔原基;SK，體細(xì)胞動(dòng)力學(xué)。比例尺在A= 100微米，H=80微米。</p><p>　　圖2 . 耳狀偏喇叭蟲活體A,B.2個(gè)物種的側(cè)面。C.顯示收縮面的個(gè)體，箭頭指向縱向面。D.細(xì)長(zhǎng)腹面?zhèn)€體，箭頭指向念珠狀大核。E．顯示側(cè)口膜（PM）.F-H 皮質(zhì)顆粒的細(xì)節(jié)在不同的細(xì)胞部分：（F）前部，（H）中部。I. 大核節(jié)節(jié)。比例尺=150微米.</p><p>　　圖3 蛋

70、白銀浸漬法后的耳狀偏喇叭蟲.A,B. 2個(gè)細(xì)胞的側(cè)面和背面，顯示下纖列和大核。C,D.同一標(biāo)本的背面和腹面，箭頭（D）指示縮短的動(dòng)體器列. E. 動(dòng)體器列，箭頭顯示非動(dòng)體器列。F,G..背（F）和腹面（G）同一細(xì)胞的后部分，箭頭G指示縮短的動(dòng)體器列。I 大核頂部，顯示螺旋形口器，箭頭表示大核。I-K. 生態(tài)分子水平，（I）顯示最近形成的口原基（箭頭）；（J）顯示分離的中后期；（K）顯示后期分離，箭頭指示帶狀大核。比例尺在A,C= 100

71、um,在F=30um，在I=15um，在K=150um。</p><p>　　圖.4. 在蛋白銀浸漬法后的耳狀偏喇叭蟲A,B。2個(gè)細(xì)胞前半部分的側(cè)面和腹面，箭頭（A）表示AZM，雙向箭頭A標(biāo)記AZM末端。箭頭（B）指示前庭器列。雙箭顯示最短的一排膜。E.細(xì)胞的后半部分，顯示前庭動(dòng)列。F.大核結(jié)節(jié)。G,H 一個(gè)分離后期，表示帶狀（箭頭）。I?？谄鞯募?xì)節(jié)，箭頭指示口膜。比例尺在A,B=40um,在C,D,F,H,I=

72、20um,E=30um,G=60um.</p><p>　　圖5 A-D-耳狀偏喇叭蟲 A, 來自 Kahl, 1932; B, 來自 Fauré-Fremiet, 1936; C, 來自 Ozaki & Yagiu, 1941; D, 來自 Bullington, 1940); E - Condylostoma wangi Foissner & Wölfl, 1992 (

73、來自 Wang, 1934, 叫做 Stentor auriculatus); F - Stentor muelleri Ehrenberg, 1831 (來自 Kahl, 1932); G - Stentor introversus Tartar, 1958 擴(kuò)張和伸縮 (來自Tartar, 1958); H - Stentor coeruleus (Pallas, 1766) Ehrenberg, 1831 (來自Dragesc

74、o & Dragesco-Kernéis, 1986); I - Stentor caudatus Dragesco, 1970 (來自 Dragesco, 1970); J - Stentor polymorphus (Müller, 1</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 張立，陳頌.濕地的功能與重

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