甬江中下游兩種纖毛蟲的形態(tài)研究【開題報(bào)告+文獻(xiàn)綜述+畢業(yè)設(shè)計(jì)】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b>　　開題報(bào)告</b></p><p><b>　　生物技術(shù)</b></p><p>　　甬江中下游兩種自由生纖毛蟲形態(tài)學(xué)研究</p><p>　　一、選題的背景與意義</p><

2、p>　　甬江水系為浙江省八大水系之一，發(fā)源于奉化、新昌和嵊州交界的烏山。上游稱剡江，中游稱奉化江，在寧波市區(qū)以下始稱甬江，在鎮(zhèn)?？谕庥紊阶⑷霒|海, 是寧波的母親河，干流總長(zhǎng)106km，流域面積5400km2。</p><p>　　原生動(dòng)物在動(dòng)物界中屬于最原始、最低等的單細(xì)胞動(dòng)物，它們身體通常較微小，一般長(zhǎng)度在100～300um之間。原生動(dòng)物的種類繁多，如今記載的種類已逾65000種， 其中至少有半數(shù)為現(xiàn)存種

3、。原生動(dòng)物結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，生命周期短，對(duì)污染反應(yīng)迅速，水體環(huán)境的突然變化能及時(shí)從原生動(dòng)物群落的變化上反映出來。原生動(dòng)物除了可以在自然水域中廣泛分布外，還可以在處理廢水和污水時(shí)建立起來的人工體系中棲居。在污水處理的人工體系中， 原生動(dòng)物的種類及數(shù)量與生物處理的效果有著密切的關(guān)系，因此，原生動(dòng)物又可以用來作為污水處理的指示生物。原生動(dòng)物與細(xì)菌之間存在相互依存的功能關(guān)系，直接觀察原生動(dòng)物的種類組成和生長(zhǎng)，不僅能反映出細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，也能間接地監(jiān)測(cè)出

4、水質(zhì)，起著指示的作用。利用化學(xué)綜合污染指數(shù)這一普遍接受的水質(zhì)化學(xué)評(píng)價(jià)方法，將原生動(dòng)物對(duì)污染的反映屬性直接建立在化學(xué)參數(shù)的基礎(chǔ)之上，從而更客觀地反映出水質(zhì)的狀況。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：</p><p><b>　　研究的基本內(nèi)容；</b></p><p>　　1、定期對(duì)甬江中下游水體中的纖毛蟲進(jìn)行采集；<

5、;/p><p>　　2、光學(xué)顯微鏡觀察目標(biāo)生物的活體形態(tài)；</p><p>　　3、對(duì)纖毛蟲原生動(dòng)物的活體形態(tài)與染色后得到的結(jié)構(gòu)進(jìn)行種類確定；</p><p>　　4、了解纖毛蟲對(duì)甬江水體的影響；</p><p><b>　　擬解決的主要問題：</b></p><p>　　纖毛蟲的分離與培養(yǎng)；<

6、/p><p><b>　　蛋白銀法染色技術(shù)；</b></p><p>　　三、研究的方法與技術(shù)路線：</p><p><b>　　研究方法：</b></p><p><b>　　1、采集工具準(zhǔn)備：</b></p><p>　　準(zhǔn)備500和1000ml廣口瓶各

7、一, 用于盛放載玻片的染色缸(數(shù)量視采集點(diǎn)設(shè)置而定), 裝PFU (海綿塊約7x7x7 cm)的密閉塑料袋或具蓋水桶等, 拖浮網(wǎng)，同時(shí)還應(yīng)準(zhǔn)備若干個(gè)由培養(yǎng)皿改制成的潮濕房以備用(分離培養(yǎng)用)。</p><p><b>　　2、標(biāo)本采集：</b></p><p>　　在淺的水體(如水塘、河溝、淺灘或潮間帶的積水處), 可先用木桿將水?dāng)噭?dòng), 至底層沉積物泛起后以大廣口瓶采

8、水, 并應(yīng)撈取若干地點(diǎn)之植物莖葉或漂浮物(枯葉、敗絮等)。</p><p><b>　　3、分離與培養(yǎng)：</b></p><p>　　分離：根據(jù)蟲體的大小而選用不同口徑的微吸管將所需蟲體挑選至已備好的培養(yǎng)皿或多孔凹玻片內(nèi)(對(duì)于蟲體數(shù)量不多時(shí)推薦后者)。當(dāng)用多孔凹玻片分離蟲體時(shí), 為防止干涸，分離后的玻片即應(yīng)置于潮濕房?jī)?nèi)?？梢暻闆r選擇不同的培養(yǎng)方式如不能立刻分離時(shí),

9、則建議加培養(yǎng)水(或清潔水)至樣品內(nèi)(至少等量)以稀釋并暫于低于原水環(huán)境5-10℃的培養(yǎng)箱內(nèi)保存(但此步不應(yīng)超過24小時(shí))。對(duì)土壤樣本則可取土樣數(shù)克入10-12cm之培養(yǎng)皿內(nèi), 加入培養(yǎng)水, 24小時(shí)后解剖鏡下觀察, 或?qū)⑺约啿紴V出后觀察, 并挑取蟲體進(jìn)行分離。</p><p>　　一經(jīng)分離后即刻應(yīng)對(duì)分離標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)，以備查。</p><p>　　培養(yǎng)：根據(jù)培養(yǎng)蟲體的單一程度可至少將培養(yǎng)

10、類型分為三種, 即粗培養(yǎng), 純培養(yǎng)和克隆培養(yǎng), 使用者可根據(jù)所需選取其適用的方式。一般說來，對(duì)于做分類區(qū)系或生態(tài)學(xué)研究中的種類鑒定時(shí), 可優(yōu)先考慮選用前兩者，而從事分子生物學(xué)、細(xì)胞發(fā)生、種下關(guān)系的研究或存疑種的鑒定時(shí)則可主要采用后兩種方法。</p><p><b>　　活體觀察：</b></p><p>　　用毛細(xì)吸管吸一小滴蟲體(液量盡可能少! 以將蓋玻片壓至極限而

11、水不至于自四邊溢出為度)于載玻片上, 加蓋玻片(四周涂以少許凡士林以避免直接壓在蟲體上)；觀察與標(biāo)本原始數(shù)據(jù)的記錄（采集地、日期、編號(hào)），在低倍鏡下測(cè)量 (應(yīng)至少選取大、中、小三個(gè)不同個(gè)體以得到蟲體變幅的信息), 觀察并記錄蟲體的大小、外形(尤其應(yīng)注意個(gè)體間的外形差異, 同一個(gè)體之外形變化以及同一蟲體之具體不同部位的變化特征)、運(yùn)動(dòng)特征(主要包括蟲體運(yùn)動(dòng)特征，纖毛器的運(yùn)動(dòng)特征，游泳的體位變化);中倍鏡下觀察(輕壓蓋玻片以減緩蟲體運(yùn)動(dòng)):

12、 纖毛及纖毛器(長(zhǎng)度,分布和排列特征等), 伸縮泡(位置/數(shù)目以及形成過程，排空間歇時(shí)間，有無收集管等)、內(nèi)質(zhì)情況(有無特殊的油球、空泡、結(jié)晶體、食物泡數(shù)目/分布特征等)、色素體的有無及體色。油鏡下觀察(輕壓蓋玻片至蟲體無法運(yùn)動(dòng)為止), 此時(shí)應(yīng)特別注意細(xì)胞的表膜結(jié)構(gòu)、纖毛特征、射出體的有無/分布/形態(tài)、伸縮泡的形成及變化過程、食物泡和內(nèi)質(zhì)/表膜下顆粒分布特點(diǎn)等分類學(xué)特征。</p><p>　　觀察所用光學(xué)顯微鏡以

13、微分干涉顯微鏡為最好, 如以相差顯微鏡, 推薦正低相差為佳(PL positive low), 若僅有明視野觀察則可通過改變數(shù)值光欄以詳細(xì)觀察表膜結(jié)構(gòu)。</p><p><b>　　記錄：</b></p><p>　　在記錄用紙上對(duì)所觀察標(biāo)本予以編號(hào) （如1999-12-5-01）（同時(shí)盡可能給出一日后可辨別的名稱）</p><p>　　采集

14、人，地點(diǎn)，日期，生境特征（鹽度、水溫、pH等）</p><p><b>　　技術(shù)路線</b></p><p>　　四、研究的總體安排與進(jìn)度：</p><p>　　2010年10月—2010年12月：</p><p>　　1.實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作：查找資料，對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容做初步的了解；</p><p>　　

15、2.實(shí)驗(yàn)儀器和藥品的準(zhǔn)備；</p><p><b>　　3.取樣；</b></p><p>　　4.完成開題報(bào)告及任務(wù)書。</p><p>　　2011年11月—2011年2月：</p><p>　　撰寫文獻(xiàn)綜述及翻譯英文文獻(xiàn)</p><p>　　2011年2月—2010年3月：</p>

16、;<p><b>　　撰寫初稿。</b></p><p>　　2010年4月—2010年5月：</p><p>　　1.初稿經(jīng)指導(dǎo)老師指正后進(jìn)行修改和完善；</p><p>　　2.畢業(yè)論文定稿，準(zhǔn)備答辯。</p><p><b>　　五、主要參考文獻(xiàn)：</b></p>

17、<p>　　[1]張毅強(qiáng).近代獸醫(yī)原生動(dòng)物學(xué)的分類概況[J].廣西畜牧獸醫(yī)2005,21(2):88-91.</p><p>　　[2]齊桂蘭,劉桂杰.常見原生動(dòng)物纖毛蟲的采集、分離與培養(yǎng)[J].生物學(xué)教學(xué),2008,33(7): 38-39.</p><p>　　[3]陳琳.纖毛蟲的生物學(xué)基礎(chǔ)與危害魚類的常見種屬[J].福建畜牧獸醫(yī),1999,2: 45-51.</p&g

18、t;<p>　　[4]Pierce RW, Turner JT. Ecology of planktonic ciliates in marine food webs[J]. Rev Aquat Sci, 1992, 6: 139-181.</p><p>　　[5]張毅強(qiáng).近代獸醫(yī)原生動(dòng)物學(xué)的分類概況[J]. 廣西畜牧獸醫(yī),2005,21(2):88-91.</p><p>

19、;　　[6]劉磊.簡(jiǎn)析活性污泥中微生物群體的特征及作用[J].環(huán)境科學(xué)與技術(shù),2009,32(6C):561-562.</p><p>　　[7]科海所.海洋原生動(dòng)物[J].齊魯漁業(yè),2007,24(8):60.</p><p>　　[8]Campbell L, Landry LR. Response of microbial community structure to env- -ir

20、onmental forcing in the Arabian sea[J]. Deep-sea Research.1998, 45(2): 2301-2325. </p><p>　　[9]李江平,李雯.指示生物及其在環(huán)境保護(hù)中的應(yīng)用[J].云南環(huán)境科學(xué),2001,20(1):51-54.</p><p>　　[10]范曉鵬,沈韞芬.環(huán)境因素對(duì)原生動(dòng)物群落特征的影響[J].應(yīng)用與環(huán)境生物

21、學(xué)報(bào),2001,7(6):554-447.</p><p>　　[11]黃彬,張明鳳,陳寅山,許友勤.原生動(dòng)物生物指數(shù)在福州市內(nèi)河水質(zhì)評(píng)價(jià)中的運(yùn)用[J].福建環(huán)境,2003,20(4):29-31. </p><p>　　[12]劉松巖,吳坤杰,田海軍.原生動(dòng)物在水體生物監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用研究[J]. 信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào),2007,17(3):112-113.</p><

22、;p>　　[13]王婭寧,施心路,劉桂杰等.纖毛原生動(dòng)物研究的經(jīng)濟(jì)意義[J].生物學(xué)雜志, 2009,26(6):72-75.</p><p>　　[14]周可新,許木啟,曹宏等.土壤原生動(dòng)物在環(huán)境監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用[J]．動(dòng)物學(xué)雜志, 2003,38(1):80-83. </p><p>　　[15] Martin-gonzalez A, Borniquel S, Diaz S. Ult

23、rastructural alterations in ciliated protozoa under heavy metal exposure[J]. Cell BiolInt, 2005, 29(2): 119-126.</p><p>　　[16]沈韞芬,馮偉松,顧曼如.河流的污染監(jiān)測(cè)[M].北京:中國(guó)建筑工業(yè)出版社,1995. </p><p>　　[17]崔木子,施心路,劉桂杰等

24、.原生動(dòng)物的水質(zhì)監(jiān)測(cè)及凈化作用研究綜述[J].吉首大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2008,28(1):90-93.</p><p>　　[18]邢宏,邢光印,張楊.水中原生動(dòng)物對(duì)細(xì)茵的影響[J].中國(guó)給水排水,2006,22(10):4.</p><p>　　[19]林利明,朱延彬,譚石慈.利用原生動(dòng)物的趨化性進(jìn)行水質(zhì)生物檢測(cè)的方法研究[J].華南師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,1994,4:42-4

25、6. </p><p>　　[20]許木啟,翟家驥,邵永怡.利用PFU原生動(dòng)物群落多樣性快速監(jiān)測(cè)北京通惠河水質(zhì)[J].動(dòng)物學(xué)雜志,1998,33(4):1-7. </p><p>　　[21]李風(fēng)超,沈韞芬,劉存歧.應(yīng)用原生動(dòng)物群落評(píng)價(jià)枯水期白洋淀的水質(zhì)現(xiàn)狀[J].生態(tài)學(xué)雜志,2005,24(7):785-789. </p><p>　　[22]Cairns JJ.

26、 Bidwell JR. Toucity testing with communities : microcosms mesocosms and whole-sustem manipulations[J]. Rev Environ Contam Toxical.1996,147:45-69.</p><p>　　[23]陳聲貴，許木啟,楊向平等.原生動(dòng)物在活性污泥中的作用[J].生態(tài)學(xué)雜志,2002,21(3):

27、47-51. </p><p>　　[24]Lin Xiaofeng, Song Weibo. Redescription of the marine ciliate, Certesia quadrinucleata (Protozoa: Ciliophora) from Qingdao, China[J]. J. Mar. Biol. Ass. U.K.,2004,84, 1-6.</p><

28、;p>　　[25]Song Weibo, Chen Shao, Yi Zhenzhen, Li Liqiong, et al.. The morphology, morphogenesis and SSrRNA gene sequence of a new marine ciliate, Diophrys apoligothrix spec. nov. (Ciliophora; Euplotida) [J].ScienceDire

29、ct,2009,45,38-50.</p><p>　　[26]劉春龍, 李忠秋, 孫海霞. 纖毛蟲對(duì)反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)環(huán)境指標(biāo)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝的影響的研究[J]. 家畜生態(tài), 2004, 25(3): 57-60.</p><p><b>　　畢業(yè)論文文獻(xiàn)綜述</b></p><p><b>　　生物技術(shù)</b></p&

30、gt;<p>　　原生動(dòng)物對(duì)水質(zhì)監(jiān)測(cè)作用的研究進(jìn)展</p><p>　　摘 要：纖毛蟲是原生動(dòng)物中種類數(shù)量最多、個(gè)體最大的一個(gè)類群，在水生生態(tài)系統(tǒng)中，纖毛蟲對(duì)水體的物質(zhì)循環(huán)起著重要的促進(jìn)作用，對(duì)水體纖毛蟲的生態(tài)學(xué)研究，對(duì)全面了解水體中有機(jī)物質(zhì)的循環(huán)過程及類群間相互關(guān)系、結(jié)構(gòu)與功能的變化等有重要的意義，它的某些種類可作為有機(jī)污染的指示生物，應(yīng)用其種類組成分布特征及優(yōu)勢(shì)種的生態(tài)耐性，可監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)水體的污

31、染狀況。</p><p>　　關(guān)鍵詞：原生動(dòng)物；纖毛蟲；水質(zhì)；生物監(jiān)測(cè)；</p><p>　　原生動(dòng)物在動(dòng)物界中屬于最原始、 最低等的單細(xì)胞動(dòng)物，它們身體通常較微小，一般長(zhǎng)度在100～300um之間。原生動(dòng)物的種類繁多，如今記載的種類已逾65000種，其中至少有半數(shù)為現(xiàn)存種[1]。常見的纖毛蟲有草履蟲(Paramecium)、棘尾蟲(Stylonychia)、喇叭蟲(Stentor)、鐘蟲

32、(Vorticella)[2] 等。纖毛蟲（ciliate）是原蟲中結(jié)構(gòu)最復(fù)雜，種類最多的一個(gè)門，包括4700種由生活和2500種營(yíng)固著生括或寄生的蟲種，海水水和淡水中都有分布自由生活種類是浮游生物的組成部分[3]，如鐘蟲、游樸蟲、棘尾蟲等個(gè)體較大者，均可作為魚類的餌料，形成食物鏈的一大部分基礎(chǔ)，也是連接微食物環(huán)和經(jīng)典食物鏈的重要中介[4]，故在水系中起著重要作用。</p><p><b>　　原生動(dòng)物

33、概述</b></p><p>　　原生動(dòng)物是動(dòng)物界中最低等的一類真核單細(xì)胞動(dòng)物，個(gè)體一般微小，由單個(gè)細(xì)胞組成。它們活領(lǐng)域分布的及其廣泛，一般在淡水、海水、沼澤甚至潮濕的土壤中均可生存，也有不少寄生在其他動(dòng)物的體內(nèi)。原生動(dòng)物的分類相對(duì)復(fù)雜，德國(guó)學(xué)者Butschli是第一個(gè)提出原生動(dòng)物在單細(xì)胞模式基礎(chǔ)上的分類系統(tǒng)的人，他把原生動(dòng)物門劃分為4個(gè)綱--鞭毛蟲綱、肉足蟲綱、 孢子蟲綱、纖毛蟲綱[5]。原生動(dòng)物能

34、用來改善水質(zhì)、評(píng)價(jià)和指示污水廠的運(yùn)行和處理效果[6]。在水處理工作中常見的主要是3類：(1) 肉足蟲。它們最主要的特征是蟲體的細(xì)胞質(zhì)可以延伸形成偽足，并利用其作為運(yùn)動(dòng)和攝食的主要胞器， 某些無明顯偽足的種類可以利用原生質(zhì)流進(jìn)行運(yùn)動(dòng)。(2)鞭毛蟲。通常具有一根或一根以上的鞭毛，作為運(yùn)動(dòng)的細(xì)胞器。鞭毛蟲種類繁多，分布很廣，生活方式多種多樣。營(yíng)寄生生活的鞭毛蟲主要寄生于宿主的消化道、泌尿道、血液及陰道毛滴蟲對(duì)人體危害較大。(3) 纖毛蟲。纖毛

35、蟲的體形多樣化，是在原生動(dòng)物中特化程度最高、最為復(fù)雜的一大類群。以纖毛為運(yùn)動(dòng)胞器是纖毛蟲的主要特征，多數(shù)種類終生全身被有纖毛，有的只在生活某一階段存在纖毛。絕大多數(shù)纖毛蟲具有一層柔軟的表膜和</p><p>　　原生動(dòng)物在海洋微食物網(wǎng)及近岸生態(tài)系的物質(zhì)流動(dòng)與能量傳遞過程中擔(dān)當(dāng)著樞紐作用，因此，長(zhǎng)期以來，該類群的種類鑒定一直是制約相關(guān)微生態(tài)研究的一個(gè)瓶頸。有人研究酸度對(duì)原生動(dòng)物群落的影響：當(dāng)酸度達(dá)到一定程度，再增大

36、同樣會(huì)對(duì)其產(chǎn)生破壞性影響，其它物理化學(xué)因素也是如此[8]。因此，利用原生動(dòng)物監(jiān)測(cè)水質(zhì)可以直接反映出環(huán)境質(zhì)量變化對(duì)水生生物的影響及其危害的程度，是實(shí)現(xiàn)水環(huán)境監(jiān)測(cè)目的的一種最直接而有效的手段。 </p><p>　　2 原生動(dòng)物的指示作用</p><p>　　2.1 環(huán)境污染指示</p><p>　　指示生物又叫生物指示物，指那些在一定地區(qū)范圍內(nèi)，能通過其特性、數(shù)量、種

37、類群落等變化，指示其環(huán)境或某一環(huán)境因子特征的生物[9]。目前比較經(jīng)典的生物指數(shù)如：Beck生物指數(shù)、 Goodnight和Whitley生物指數(shù)、Trent生物指數(shù)和Chandle計(jì)分制等。原生動(dòng)物結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，生命周期短，與它們所生存的環(huán)境直接接觸，對(duì)污染反應(yīng)迅速。當(dāng)外部環(huán)境存在脅迫時(shí)，原生動(dòng)物群落特征都會(huì)發(fā)生相應(yīng)規(guī)律性變化[10]，及時(shí)反映出水體環(huán)境的突然變化。另外，絕大多數(shù)原生動(dòng)物種類為世界性分布，不受季節(jié)和地區(qū)差異的限制。黃彬等[1

38、1]用原生動(dòng)物做指示，來評(píng)價(jià)福州市內(nèi)河的環(huán)境情況。劉松巖等[12]也將原生動(dòng)物應(yīng)用水體生物的檢測(cè)中。</p><p>　　利用纖毛蟲的種類組成分布特征及優(yōu)勢(shì)種的生態(tài)耐性，不僅可以評(píng)價(jià)水體的污染狀況，還可應(yīng)用纖毛蟲監(jiān)測(cè)土壤環(huán)境[13]。實(shí)踐表明，纖毛蟲可用于檢測(cè)土壤中的重金屬毒性。膨大腎形蟲和齒脊腎形蟲是土壤中常見的兩種纖毛蟲，許多毒性實(shí)驗(yàn)證明[14],它們與其他常用的測(cè)試生物一樣對(duì)環(huán)境的變化敏感，甚至更為敏感，因

39、為它們沒有保護(hù)性的細(xì)胞壁，更直接的暴露在周圍環(huán)境中，與污染物相接觸。Martin Gonzalez等研究發(fā)現(xiàn)，土壤中重金屬Cd、Zn污染能促進(jìn)土壤纖毛蟲的超微結(jié)構(gòu)變化，使細(xì)胞的活動(dòng)能力受限[15]。</p><p>　　2.2 反映水質(zhì)狀況</p><p>　　原生動(dòng)物與細(xì)菌之間存在相互依存的功能關(guān)系，直接觀察原生動(dòng)物的種類組成和生長(zhǎng)，不僅能反映出細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，也能間接地監(jiān)測(cè)出水質(zhì)，起著

40、指示的作用。利用化學(xué)綜合污染指數(shù)[16]這一普遍接受的水質(zhì)化學(xué)評(píng)價(jià)方法，將原生動(dòng)物對(duì)污染的反映屬性直接建立在化學(xué)參數(shù)的基礎(chǔ)之上，從而更客觀地反映出水質(zhì)的狀況。在自然環(huán)境中，水質(zhì)較好的水體自養(yǎng)程度高，植物性鞭毛蟲所占比例較高；隨著水體有機(jī)污染程度的提高，異養(yǎng)程度增加，動(dòng)物性鞭毛蟲所占比例將增加[17]。原生動(dòng)物與細(xì)菌之間也存在相互依存的功能關(guān)系，掠食性的原生動(dòng)物可以使細(xì)菌生長(zhǎng)維持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期， 防止細(xì)菌種群的衰老，提高細(xì)菌酶的活力[18]

41、。林利明等[19]曾利用草履蟲對(duì)不同水質(zhì)的趨化性，分析它們移動(dòng)到實(shí)驗(yàn)區(qū)水樣的數(shù)目，從而判斷水質(zhì)的污染程度和毒性大小。許木啟等[20]報(bào)道了北京通惠河原生動(dòng)物群落多樣性特征與水質(zhì)的相互關(guān)系。李鳳超等[21]應(yīng)用PFU微型生物群落監(jiān)測(cè)方法，對(duì)長(zhǎng)期處于低水位狀態(tài)下的白洋淀水質(zhì)進(jìn)行了綜合評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，白洋淀水域受府河污水的影響，淀內(nèi)的內(nèi)源性污染對(duì)原生動(dòng)物群落造成了極大的影響。</p><p>　　2.3 生物系統(tǒng)物質(zhì)循

42、環(huán)</p><p>　　研究發(fā)現(xiàn)，不同生境中的原生動(dòng)物在食物鏈中所占據(jù)的營(yíng)養(yǎng)級(jí)是不同的，它不僅僅是有機(jī)物和碎屑的分解者，細(xì)菌、藻類的捕食者和浮游動(dòng)物的捕食對(duì)象，還起到連接具有高生產(chǎn)力的，能保持大量營(yíng)養(yǎng)成分的微生物圈和后生動(dòng)物的作用[22]。因此它在水生態(tài)系的物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)中起到十分重要的作用。目前世界上普遍采用活性污泥法進(jìn)行污水處理，即利用活性污泥中的細(xì)菌吸附、氧化分解污染物[23]。原生動(dòng)物是活性污泥中細(xì)菌

43、的主要捕者，而纖毛蟲在運(yùn)行良好的活性污泥中占原生動(dòng)物總數(shù)70％，通過纖毛蟲對(duì)細(xì)菌的捕食作用，使活性污泥中的細(xì)菌始終保持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，促進(jìn)生物消耗，減少污泥生成量，所以纖毛蟲是活性污泥中最常見也是最重要的捕食者[24]。在畜牧業(yè)方面，瘤胃內(nèi)的原生動(dòng)物主要有兩個(gè)亞類：鞭毛蟲綱和纖毛蟲綱，前者主要存在幼年動(dòng)物中，后者則是成年反芻動(dòng)物體內(nèi)主要的類群，占整個(gè)瘤胃微生物生物量30％～80％[25]。纖毛蟲在增加瘤胃飽和脂肪酸的含量、維持細(xì)菌必需的厭

44、氧環(huán)境及降低硝酸鹽和亞硝酸鹽的致毒作用方面有重要意義[26]。</p><p><b>　　3. 展望</b></p><p>　　原生動(dòng)物群落的變化可以指示和預(yù)報(bào)水域污染的現(xiàn)狀和發(fā)展的趨勢(shì)， 我們可以利用它們?cè)谒w的變化情況監(jiān)測(cè)水質(zhì)的變化，在監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)水質(zhì)的瞬時(shí)變化和長(zhǎng)期內(nèi)的連續(xù)變化方面，原生動(dòng)物作為理想的監(jiān)測(cè)生物具有不可替代的作用。但是由于水質(zhì)情況復(fù)雜，生態(tài)系統(tǒng)多種

45、多樣，適應(yīng)能力各不相同，難以確定污染物的性質(zhì)和含量。因此，在條件許可的情況下，應(yīng)采取多種方法進(jìn)行綜合監(jiān)測(cè)，以確保監(jiān)測(cè)結(jié)果的科學(xué)性。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1]張毅強(qiáng).近代獸醫(yī)原生動(dòng)物學(xué)的分類概況[J].廣西畜牧獸醫(yī)2005,21(2):88-91.</p><p>　　[2]齊桂蘭,劉桂杰.常見原生

46、動(dòng)物纖毛蟲的采集、分離與培養(yǎng)[J].生物學(xué)教學(xué),2008,33(7): 38-39.</p><p>　　[3]陳琳.纖毛蟲的生物學(xué)基礎(chǔ)與危害魚類的常見種屬[J].福建畜牧獸醫(yī),1999,2: 45-51.</p><p>　　[4]Pierce RW, Turner JT. Ecology of planktonic ciliates in marine food webs[J]. Re

47、v Aquat Sci, 1992, 6: 139-181.</p><p>　　[5]張毅強(qiáng).近代獸醫(yī)原生動(dòng)物學(xué)的分類概況[J]. 廣西畜牧獸醫(yī),2005,21(2):88-91.</p><p>　　[6]劉磊.簡(jiǎn)析活性污泥中微生物群體的特征及作用[J].環(huán)境科學(xué)與技術(shù),2009,32(6C):561-562.</p><p>　　[7]科海所.海洋原生動(dòng)物[J

48、].齊魯漁業(yè),2007,24(8):60.</p><p>　　[8]Campbell L, Landry LR. Response of microbial community structure to env- -ironmental forcing in the Arabian sea[J]. Deep-sea Research.1998, 45(2): 2301-2325. </p><

49、;p>　　[9]李江平,李雯.指示生物及其在環(huán)境保護(hù)中的應(yīng)用[J].云南環(huán)境科學(xué),2001,20(1):51-54.</p><p>　　[10]范曉鵬,沈韞芬.環(huán)境因素對(duì)原生動(dòng)物群落特征的影響[J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào),2001,7(6):554-447.</p><p>　　[11]黃彬,張明鳳,陳寅山,許友勤.原生動(dòng)物生物指數(shù)在福州市內(nèi)河水質(zhì)評(píng)價(jià)中的運(yùn)用[J].福建環(huán)境,200

50、3,20(4):29-31. </p><p>　　[12]劉松巖,吳坤杰,田海軍.原生動(dòng)物在水體生物監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用研究[J]. 信陽農(nóng)業(yè)高等專科學(xué)校學(xué)報(bào),2007,17(3):112-113.</p><p>　　[13]王婭寧,施心路,劉桂杰等.纖毛原生動(dòng)物研究的經(jīng)濟(jì)意義[J].生物學(xué)雜志, 2009,26(6):72-75.</p><p>　　[14]周可新,

51、許木啟,曹宏等.土壤原生動(dòng)物在環(huán)境監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用[J]．動(dòng)物學(xué)雜志, 2003,38(1):80-83. </p><p>　　[15] Martin-gonzalez A, Borniquel S, Diaz S. Ultrastructural alterations in ciliated protozoa under heavy metal exposure[J]. Cell BiolInt, 2005,

52、29(2): 119-126.</p><p>　　[16]沈韞芬,馮偉松,顧曼如.河流的污染監(jiān)測(cè)[M].北京:中國(guó)建筑工業(yè)出版社,1995. </p><p>　　[17]崔木子,施心路,劉桂杰等.原生動(dòng)物的水質(zhì)監(jiān)測(cè)及凈化作用研究綜述[J].吉首大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2008,28(1):90-93.</p><p>　　[18]邢宏,邢光印,張楊.水中原生動(dòng)物

53、對(duì)細(xì)茵的影響[J].中國(guó)給水排水,2006,22(10):4.</p><p>　　[19]林利明,朱延彬,譚石慈.利用原生動(dòng)物的趨化性進(jìn)行水質(zhì)生物檢測(cè)的方法研究[J].華南師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,1994,4:42-46. </p><p>　　[20]許木啟,翟家驥,邵永怡.利用PFU原生動(dòng)物群落多樣性快速監(jiān)測(cè)北京通惠河水質(zhì)[J].動(dòng)物學(xué)雜志,1998,33(4):1-7. <

54、/p><p>　　[21]李風(fēng)超,沈韞芬,劉存歧.應(yīng)用原生動(dòng)物群落評(píng)價(jià)枯水期白洋淀的水質(zhì)現(xiàn)狀[J].生態(tài)學(xué)雜志,2005,24(7):785-789. </p><p>　　[22]Cairns JJ. Bidwell JR. Toucity testing with communities : microcosms mesocosms and whole-sustem manipulatio

55、ns[J]. Rev Environ Contam Toxical.1996,147:45-69.</p><p>　　[23]陳聲貴，許木啟,楊向平等.原生動(dòng)物在活性污泥中的作用[J].生態(tài)學(xué)雜志,2002,21(3):47-51. </p><p>　　[24]Lin Xiaofeng, Song Weibo. Redescription of the marine ciliate,

56、Certesia quadrinucleata (Protozoa: Ciliophora) from Qingdao, China[J]. J. Mar. Biol. Ass. U.K.,2004,84, 1-6.</p><p>　　[25]Song Weibo, Chen Shao, Yi Zhenzhen, Li Liqiong, et al.. The morphology, morphogenesis

57、 and SSrRNA gene sequence of a new marine ciliate, Diophrys apoligothrix spec. nov. (Ciliophora; Euplotida) [J].ScienceDirect,2009,45,38-50.</p><p>　　[26]劉春龍, 李忠秋, 孫海霞. 纖毛蟲對(duì)反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)環(huán)境指標(biāo)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝的影響的研究[J]. 家畜生態(tài),

58、 2004, 25(3): 57-60.</p><p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)</b></p><p><b>　　（20_ _屆）</b></p><p>　　甬江中下游兩種纖毛蟲的形態(tài)研究</p><p><b>　　目　錄</b></p><p&g

59、t;<b>　　1 引言1</b></p><p>　　1.1 環(huán)境污染指示1</p><p>　　1.2 反映水質(zhì)狀況1</p><p>　　1.3 生物系統(tǒng)物質(zhì)循環(huán)1</p><p>　　2 實(shí)驗(yàn)方法與材料2</p><p><b>　　2.1 采樣2</b>

60、</p><p>　　2.1.1 采集工具準(zhǔn)備2</p><p>　　2.1.2 采集地點(diǎn)和時(shí)間2</p><p>　　2.1.3 采集標(biāo)本2</p><p>　　2.2 分離與培養(yǎng)2</p><p>　　2.2.1 分離2</p><p>　　2.2.3 培養(yǎng)2</p>

61、<p>　　2.3 活體觀察2</p><p>　　2.4 染色觀察3</p><p>　　2.4.1 蛋白銀法3</p><p>　　2.4.2 銀氨染色法3</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析3</b></p><p>　　3.1 相似瓦榴彈蟲Pinacocol

62、eps similis (Kahl, 1933)3</p><p>　　3.1.1 形態(tài)描述3</p><p>　　3.1.2 分析比較4</p><p>　　3.2 東方諾蘭德蟲Nolandia orientalis6</p><p>　　3.2.1 形態(tài)描述6</p><p>　　3.2.2 分析比較6

63、</p><p><b>　　4討論11</b></p><p><b>　　致謝11</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)12</b></p><p>　　摘要：甬江水系為浙江七大水系之一，流域面積約占寧波總面積的48%，為浙東地區(qū)的重要水資源。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展及

64、城市人口的急劇增長(zhǎng)，工業(yè)廢水與生活污水的無序排放對(duì)該水系的生態(tài)系統(tǒng)造成巨大損害。纖毛蟲原生動(dòng)物作為良好的生物指示種，在環(huán)境監(jiān)測(cè)中扮演重要角色，但關(guān)于甬江水體內(nèi)纖毛蟲原生動(dòng)物的研究少有報(bào)道。鑒于此，我們開展了對(duì)該水體內(nèi)纖毛蟲的種類構(gòu)成、群落結(jié)構(gòu)的變化等研究。本文主要對(duì)兩種纖毛蟲，Pinacocoleps similis (Kahl, 1933)相似瓦榴彈蟲與Nolandia orientalis東方諾蘭德蟲，進(jìn)行詳盡的形態(tài)描述，主要內(nèi)容包

65、括活體形態(tài)、蛋白銀與氨銀法染色后得到纖毛圖式、大核形狀等特征。</p><p>　　關(guān)鍵詞：甬江;原生動(dòng)物；纖毛蟲；形態(tài)描述。</p><p>　　ABSTRACT: Yongjiang River is one of the seven major river systems in Zhejiang Province, the drainage area approximately co

66、mposes the Ningbo total area 48%, which is a important water resource for the Eastern Zhejiang Province. With economic development and rapid growth of urban population, industrial wastewater and domestic sewage discharge

67、 of the water system disorder caused enormous damage to the ecosystem. Ciliate is a good biological indicator species and play an important role in monitoring</p><p>　　KEYWORDS: Yongjiang river; Protozoa; ci

68、liate; morphological description.</p><p><b>　　1 引言</b></p><p>　　甬江水系為浙江省七大水系之一[1]，發(fā)源于奉化、新昌和嵊州交界的烏山。上游稱剡江，中游稱奉化江，在寧波市區(qū)以下始稱甬江，在鎮(zhèn)?？谕庥紊阶⑷霒|海, 是寧波的母親河，干流總長(zhǎng)106km，流域面積5400km2。甬江流域是浙江省城市化程度最高

69、、經(jīng)濟(jì)最發(fā)達(dá)地區(qū)之一，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和城市化進(jìn)程的推進(jìn)，流域的水資源問題日益嚴(yán)重[2]，導(dǎo)致生物多樣性的降低。而原生動(dòng)物與細(xì)菌之間存在相互依存的功能關(guān)系，直接觀察原生動(dòng)物的種類組成和生長(zhǎng)，不僅能反映出細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，也能間接地監(jiān)測(cè)出水質(zhì)，起著指示的作用。近20年來，我國(guó)纖毛蟲的研究已取得了長(zhǎng)足的進(jìn)展，但至今為止，還沒有任合有關(guān)甬江纖毛蟲類的研究。</p><p>　　1.1 環(huán)境污染指示</p>&

70、lt;p>　　指示生物又叫生物指示物，指那些在一定地區(qū)范圍內(nèi)，能通過其特性、數(shù)量、種類群落等變化，指示其環(huán)境或某一環(huán)境因子特征的生物[3]。目前比較經(jīng)典的生物指數(shù)如：Beck生物指數(shù)、Goodnight和Whitley生物指數(shù)、Trent生物指數(shù)和Chandle計(jì)分制等。原生動(dòng)物結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，生命周期短，與它們所生存的環(huán)境直接接觸，對(duì)污染反應(yīng)迅速。當(dāng)外部環(huán)境存在脅迫時(shí)，原生動(dòng)物群落特征都會(huì)發(fā)生相應(yīng)規(guī)律性變化[4]，及時(shí)反映出水體環(huán)境的

71、突然變化。另外，絕大多數(shù)原生動(dòng)物種類為世界性分布，不受季節(jié)和地區(qū)差異的限制。黃彬等[5]用原生動(dòng)物做指示，來評(píng)價(jià)福州市內(nèi)河的環(huán)境情況。劉松巖等[6]也將原生動(dòng)物應(yīng)用水體生物的檢測(cè)中。</p><p>　　利用纖毛蟲的種類組成分布特征及優(yōu)勢(shì)種的生態(tài)耐性，不僅可以評(píng)價(jià)水體的污染狀況，還可應(yīng)用纖毛蟲監(jiān)測(cè)土壤環(huán)境[7]。實(shí)踐表明，纖毛蟲可用于檢測(cè)土壤中的重金屬毒性。膨大腎形蟲和齒脊腎形蟲是土壤中常見的兩種纖毛蟲，許多毒性

72、實(shí)驗(yàn)證明[8],它們與其他常用的測(cè)試生物一樣對(duì)環(huán)境的變化敏感，甚至更為敏感，因?yàn)樗鼈儧]有保護(hù)性的細(xì)胞壁，更直接的暴露在周圍環(huán)境中，與污染物相接觸。Martin等(2005)研究發(fā)現(xiàn)，土壤中重金屬Cd、Zn污染能促進(jìn)土壤纖毛蟲的超微結(jié)構(gòu)變化，使細(xì)胞的活動(dòng)能力受限[9]。</p><p>　　1.2 反映水質(zhì)狀況</p><p>　　原生動(dòng)物與細(xì)菌之間存在相互依存的功能關(guān)系，直接觀察原生動(dòng)物的

73、種類組成和生長(zhǎng)，不僅能反映出細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，也能間接地監(jiān)測(cè)出水質(zhì)，起著指示的作用。利用化學(xué)綜合污染指數(shù)[10]這一普遍接受的水質(zhì)化學(xué)評(píng)價(jià)方法，將原生動(dòng)物對(duì)污染的反映屬性直接建立在化學(xué)參數(shù)的基礎(chǔ)之上，從而更客觀地反映出水質(zhì)的狀況。在自然環(huán)境中，水質(zhì)較好的水體自養(yǎng)程度高，植物性鞭毛蟲所占比例較高；隨著水體有機(jī)污染程度的提高，異養(yǎng)程度增加，動(dòng)物性鞭毛蟲所占比例將增加[11]。原生動(dòng)物與細(xì)菌之間也存在相互依存的功能關(guān)系，掠食性的原生動(dòng)物可以使細(xì)

74、菌生長(zhǎng)維持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期， 防止細(xì)菌種群的衰老，提高細(xì)菌酶的活力[12]。林利明等(1994) [13]曾利用草履蟲對(duì)不同水質(zhì)的趨化性，分析它們移動(dòng)到實(shí)驗(yàn)區(qū)水樣的數(shù)目，從而判斷水質(zhì)的污染程度和毒性大小。許木啟等(1998) [14]報(bào)道了北京通惠河原生動(dòng)物群落多樣性特征與水質(zhì)的相互關(guān)系。李鳳超等(2005) [15]應(yīng)用PFU微型生物群落監(jiān)測(cè)方法，對(duì)長(zhǎng)期處于低水位狀態(tài)下的白洋淀水質(zhì)進(jìn)行了綜合評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，白洋淀水域受府河污水的影響，淀內(nèi)

75、的內(nèi)源性污染對(duì)原生動(dòng)物群落造成了極大的影響。</p><p>　　1.3 生物系統(tǒng)物質(zhì)循環(huán)</p><p>　　研究發(fā)現(xiàn)，不同生境中的原生動(dòng)物在食物鏈中所占據(jù)的營(yíng)養(yǎng)級(jí)是不同的，它不僅僅是有機(jī)物和碎屑的分解者，細(xì)菌、藻類的捕食者和浮游動(dòng)物的捕食對(duì)象，還起到連接具有高生產(chǎn)力的，能保持大量營(yíng)養(yǎng)成分的微生物圈和后生動(dòng)物的作用[16]。因此它在水生態(tài)系的物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)中起到十分重要的作用。目前世

76、界上普遍采用活性污泥法進(jìn)行污水處理，即利用活性污泥中的細(xì)菌吸附、氧化分解污染物[17]。原生動(dòng)物是活性污泥中細(xì)菌的主要捕者，而纖毛蟲在運(yùn)行良好的活性污泥中占原生動(dòng)物總數(shù)70％，通過纖毛蟲對(duì)細(xì)菌的捕食作用，使活性污泥中的細(xì)菌始終保持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，促進(jìn)生物消耗，減少污泥生成量，所以纖毛蟲是活性污泥中最常見也是最重要的捕食者。在畜牧業(yè)方面，瘤胃內(nèi)的原生動(dòng)物主要有兩個(gè)亞類：鞭毛蟲綱和纖毛蟲綱，前者主要存在幼年動(dòng)物中，后者則是成年反芻動(dòng)物體內(nèi)主要

77、的類群，占整個(gè)瘤胃微生物生物量30％～80％。纖毛蟲在增加瘤胃飽和脂肪酸的含量、維持細(xì)菌必需的厭氧環(huán)境及降低硝酸鹽和亞硝酸鹽的致毒作用方面有重要意義[18]。</p><p><b>　　2 實(shí)驗(yàn)方法與材料</b></p><p>　　實(shí)驗(yàn)主要步驟是采樣，分離培養(yǎng)，活體觀察，染色觀察，數(shù)據(jù)記錄。</p><p><b>　　2.1 采

78、樣</b></p><p>　　2.1.1 采集工具準(zhǔn)備</p><p>　　準(zhǔn)備500和1000ml廣口瓶各一, 用于盛放載玻片的染色缸, 裝PFU (海綿塊約7x7x7 cm)的具蓋水桶等, 拖浮網(wǎng)以及若干個(gè)由培養(yǎng)皿改制成的潮濕房以備用(分離培養(yǎng)用)。</p><p>　　為進(jìn)行定量研究, 備有浮游生物計(jì)數(shù)框、水樣采集器（5-10升）及量筒(500-

79、1000ml)等。對(duì)于浮游生種類我們準(zhǔn)備約20-50 m孔徑的小型微孔浮游生物網(wǎng)；水樣采集器；PFU。對(duì)于周叢生種類以及固著生種類我們對(duì)前者仍可用PFU塊進(jìn)行采集, 而后者則需用載玻片框。</p><p>　　培養(yǎng)和分離用水是選取潔凈的自然水, 并經(jīng)加熱(至80℃即可), 冷卻充氣后封口保存?zhèn)溆?</p><p>　　2.1.2 采集地點(diǎn)和時(shí)間</p><p>　　

80、于2011年3月15日—4月15日在甬江中下游——寧波大學(xué)南側(cè)江段。</p><p>　　2.1.3 采集標(biāo)本</p><p>　　在淺的水體(淺灘的積水處),用木桿將水?dāng)噭?dòng), 至底層沉積物泛起后以大廣口瓶采水, 并應(yīng)撈取若干漂浮物(枯葉、敗絮等)。</p><p>　　采用浮游生物網(wǎng),在水中經(jīng)若干次來回拖捕以富集蟲體。所獲之蟲體水樣在瓶?jī)?nèi)不應(yīng)裝得過滿, 以免造成水

81、體缺氧。</p><p>　　用載玻片框，將框沉入水中并作好標(biāo)記。通常視水中蟲體多寡而讓其在水中暴露1至數(shù)周。取出時(shí)應(yīng)盡量避免攪動(dòng)，以染色缸取原位水小心將玻片插入缸內(nèi)帶回。</p><p>　　海綿塊(PFU)墜以重物, 浸入水中后擠干內(nèi)部的氣泡（浸入水中需先行反復(fù)擠壓數(shù)次以去除氣泡）。調(diào)節(jié)海綿塊的深度，上端固定于水面標(biāo)志物上。</p><p><b>　

82、　2.2 分離與培養(yǎng)</b></p><p>　　由于蟲體經(jīng)采集后是一非正常的、高度濃縮了的群落結(jié)構(gòu)，因此我們?cè)诜蛛x和處理時(shí)力爭(zhēng)在數(shù)小時(shí)內(nèi)進(jìn)行, 以避免所獲種類消亡。</p><p><b>　　2.2.1 分離</b></p><p>　　解剖鏡下進(jìn)行, 根據(jù)蟲體的大小而選用不同口徑的微吸管將所需蟲體挑選至已備好的多孔凹玻片內(nèi)。當(dāng)

83、用多孔凹玻片分離蟲體時(shí), 為防止干涸，分離后的玻片立即置于潮濕房?jī)?nèi)。當(dāng)我們不能立刻分離時(shí), 則加培養(yǎng)水至樣品內(nèi)以稀釋并暫于低于原水環(huán)境5-10℃的培養(yǎng)箱內(nèi)保存(但此步不應(yīng)超過24小時(shí))。</p><p><b>　　2.2.3 培養(yǎng)</b></p><p>　　根據(jù)培養(yǎng)蟲體的單一程度可至少將培養(yǎng)類型分為三種, 即粗培養(yǎng), 純培養(yǎng)和克隆培養(yǎng),我們選用粗培養(yǎng)。</

84、p><p>　　粗培養(yǎng)：直接吸取原采集樣入培養(yǎng)皿中, 鏡下去除大型后生動(dòng)物及多余的沉積物, 加適量米粒或剪開的麥粒以致富細(xì)菌(水較富時(shí)也可不加)。通?？擅咳諜z查1-2次, 以清除某些快速繁殖的不欲保留的種類, 并每日更新約半量的培養(yǎng)水。</p><p>　　此種培養(yǎng)對(duì)于不易建立純培養(yǎng)的種類或小型種類特別值得提倡。此外當(dāng)培養(yǎng)水體中種類較豐富而個(gè)體數(shù)量(總數(shù)量)不大時(shí), 均可采取此方法以達(dá)到富集蟲

85、體且最大限度地保存各種的目的。此方法由于蟲體生活在原來的水環(huán)境內(nèi), 較之純培養(yǎng)更易于全面地檢獲和保存標(biāo)本, 因此也更多地應(yīng)用于對(duì)某生境所有種類的構(gòu)成研究上。</p><p><b>　　2.3 活體觀察</b></p><p>　　活體觀察方法主要用以獲取纖毛蟲活體細(xì)胞大小、外形、運(yùn)動(dòng)、纖毛器、伸縮泡、食物泡、內(nèi)質(zhì)顆粒及射出體等特征, 以彌補(bǔ)單純?nèi)旧牟蛔恪?lt;/

86、p><p>　　具體步驟用毛細(xì)吸管吸一小滴蟲體于載玻片上，加蓋玻片(四周涂以少許凡士林以避免直接壓在蟲體上)；觀察與標(biāo)本原始數(shù)據(jù)的記錄。在低倍鏡下測(cè)量， 觀察并記錄蟲體的大小、外形、運(yùn)動(dòng)特征；中倍鏡下觀察，纖毛及纖毛器的長(zhǎng)度,分布和排列特征等；伸縮泡的位置，數(shù)目以及形成過程，排空間歇時(shí)間，有無收集管等；內(nèi)質(zhì)中有無特殊的油球、空泡、結(jié)晶體、食物泡數(shù)目和分布特征等；色素體的有無及體色。油鏡下觀察，我們特別注意細(xì)胞的表膜結(jié)

87、構(gòu)，纖毛特征，射出體的有無、分布和形態(tài)，伸縮泡的形成及變化過程，食物泡和內(nèi)質(zhì)，表膜下顆粒分布特點(diǎn)等分類學(xué)特征。</p><p><b>　　2.4 染色觀察</b></p><p>　　本次實(shí)驗(yàn)中一共用到兩種染色方法：蛋白銀染色法和氨銀染色法。</p><p>　　2.4.1 蛋白銀法</p><p>　　蛋白銀染色技術(shù)

88、最早為一組織染色法, Bodion 1937年首先將之應(yīng)用于原生動(dòng)物上，經(jīng)過幾十年來不斷的改進(jìn)，已成為纖毛蟲纖毛圖式顯示的最重要和最基本的方法。本方法對(duì)大部分纖毛蟲的染色效果極佳，但對(duì)于咽膜類、腎形類及籃環(huán)目等類群則常常不夠理想。其主要用以顯示蟲體的皮層及內(nèi)部結(jié)構(gòu)，如纖毛下器、毛基體、核器及各種表膜下纖維系統(tǒng)等，而銀線系統(tǒng)則不被染色。</p><p>　　具體步驟：(1) 將蟲體于胚胎皿中用Bouin液或飽和升汞

89、(HgCl2)固定5-10min；(2) 蒸餾水洗3-4次(Bouin液以水洗至無色為準(zhǔn))；(3) 以最細(xì)微吸管小心將蟲體“吹”至胚胎皿中心；(4) 用0.1-0.2%的次氯酸鈉(NaClO)微量直接供至蟲體處以漂白至“透明”(約1-2min) ；(5) 蒸餾水洗兩次(以清洗完全為度)；(6) 將胚胎皿中蛋白銀濃度控制在約0.5%，加蓋后于50-60℃的恒溫箱底板上保持30min；(7) 室溫下用0.1-0.2 %的顯影液顯影1-5mi

90、n；(8) 鏡檢后用5%的硫代硫酸鈉(Na2S2O3)定影約5min；(9) 蒸餾水洗一次(此時(shí)應(yīng)清潔蟲體)，將蟲體轉(zhuǎn)入載玻片上并與等量的蛋白膠混勻，用眉毛筆調(diào)體位，除去余液，至溫箱烘片約10min；(10) 常規(guī)脫水封片。</p><p>　　2.4.2 銀氨染色法</p><p>　　又名碳酸銀染色法。此染色法的突出特點(diǎn)是快速簡(jiǎn)便，顯示功能強(qiáng)，應(yīng)用得當(dāng)時(shí)可在十幾分鐘內(nèi)得到高質(zhì)量的類似蛋

91、白銀的染色效果。這對(duì)于許多不易用蛋白銀染色的種類如大部分咽膜目類，腎形目類及籃環(huán)目類尤其突出。</p><p>　　具體步驟：（1）在凹玻片中加一滴10%福爾馬林（4%甲醛），然后加一滴蟲體懸液，靜置1min；（2）于其中加入一滴Fernandez-Galiano液；（3）將凹玻片置于約60℃的電熱板上，不停振動(dòng)；（4）待溶液由黃色變?yōu)樽厣珪r(shí)，約5min，加一滴冷水或硫代硫酸鈉溶液終止顯影；（5）鏡檢，拍照；（6

92、）清洗后入載玻片加等量的蛋白膠混勻，調(diào)體位，除余夜后烘片約5-10min；（7）常規(guī)脫水封片。</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1 相似瓦榴彈蟲Pinacocoleps similis (Kahl, 1933)</p><p>　　3.1.1 形態(tài)描述</p><p>　　大部

93、分活體體長(zhǎng)和形狀相近，大約55-65×20-30μm，卵圓型或圓筒形，橫向面為圓形。橫向面的前末端較短且第二層盔板的前末端像個(gè)皇冠般尖銳化；其后末端明顯鈍圓（圖1A, 2A-D）。射出體呈桿形，長(zhǎng)約3.0×0.5μm，主要位于口區(qū)，由于十分小且數(shù)目較少，所以很難觀察到（圖1K）。無色的細(xì)胞質(zhì)中經(jīng)常有若干個(gè)灰色至褐色的食物泡（直徑最大可達(dá)15μm）和顆粒（在2-8μm）。一個(gè)大小12×10μm的橢圓形大核，多

94、數(shù)位于身體中部，而且有一個(gè)連接緊密的小核（圖1A, 2M, N）。身體末端有一個(gè)直徑大約10–15 μm收縮液泡，排泄孔位于身體的尾部（圖1A, C-E, 2H）。游泳速度快，有時(shí)沿底層爬行。</p><p>　　相似瓦榴彈蟲的盔板分 6層排布：圍口層，前端的次二層，前端主層，后端主層，后端次二層和尾層。每層平均由15個(gè)無色長(zhǎng)方形盔板組成，且大多數(shù)盔板的形狀大小相同。圍口層幾乎在活體中很難辨認(rèn)。前端次二層有兩個(gè)尖

95、銳的尖刺（圖1A, B, 2G）。前端主層，后端主層和后端次二層沒有獨(dú)特性。尾層只能在間接或極后端的視圖中才能看到，且尾端有一些5-6μm長(zhǎng)的尾端刺毛（圖1A, 2A-D, I）。盔板中比較精細(xì)的結(jié)構(gòu)在圖1B, 2E-G中：盔板無開口；靠近右側(cè)邊緣的脊光滑且發(fā)達(dá)；右側(cè)邊緣的一系列長(zhǎng)齒與脊沒有相連；左側(cè)邊緣的曲線非常平滑和細(xì)長(zhǎng)。</p><p>　　口位于細(xì)胞頂端。圍口動(dòng)基列是由配對(duì)的毛基體組成的，此動(dòng)基列被三個(gè)口

96、區(qū)細(xì)胞器打斷（圖1E,2K）。口區(qū)細(xì)胞器短，斜向排布（圖1E）：細(xì)胞器1由4對(duì)的毛基粒組成；細(xì)胞器2和3都由三對(duì)的毛基粒組成?；铙w口腔筐不明顯，通過蛋白銀染法可看到其長(zhǎng)大約15-20μm（圖1K, 2K）。</p><p>　　軀體纖毛長(zhǎng)度約10μm并有規(guī)則的排布，平均的組成14個(gè)橫環(huán)和15個(gè)縱列（表1）。在頂端的每縱列有4個(gè)成對(duì)緊密分布的毛基粒出現(xiàn)（圖1E, K, 2K）。在尾部有一明顯（長(zhǎng)約25μm）的纖毛（

97、圖1A, 2A, D）。</p><p>　　3.1.2 分析比較</p><p>　　根據(jù)Foissner et al. (2008), Pinacocoleps Diesing,1865所描繪的特征，相似瓦榴彈蟲擁有六層多刺的盔板。該屬中的Pinacocoleps incurvus (Ehrenberg, 1833)[19]彎曲瓦榴彈蟲，P. tesselatus (Kahl, 193

98、0)[20] 棋格瓦榴彈蟲，P. pulcher (Spiegel, 1926) [21]美麗瓦榴彈蟲，這三個(gè)物種已經(jīng)被研究描述過。但這些描述并沒有運(yùn)用現(xiàn)代的方法，所以這些纖毛蟲的纖毛圖式還是未知的。</p><p>　　Pinacocoleps similis 與P. tesselatus的形態(tài)相似(Kahl, 1930) [20]。然而，前者有著比后者更顯著的盔板結(jié)構(gòu)：(1)前端次二層的前末端有兩個(gè)尖刺（P.

99、 tesselatus只有一個(gè)）；(2)前端主層有6枚齒狀結(jié)構(gòu)（P. tesselatus有3-5枚，Kahl, 1930的描述中是3枚，Noland, 1937描述中是4枚，Borror, 1972描述中是5枚）；(3)齒與脊無連接（P. tesselatus有連接）；（4)至少有6個(gè)尾部刺毛（P. tesselatus有三個(gè)）（表2,圖1F, I；Borror, 1972; Kahl, 1930, 1933）。</p>

100、<p>　　根據(jù)他們盔板的結(jié)構(gòu)，其他三個(gè)種都被歸到瓦榴彈蟲屬中：P. heteracanthus (Noland, 1937)[22]。（圖3F；basionym Coleps heteracanthus Noland, 1937），P. spiralis (Noland, 1937) [22]。(圖1J; basionym Coleps spiralis Noland, 1937)和P. arenarius (Bock,

101、1952) [23] (圖3G; basionym Coleps arenarius Bock, 1952)。</p><p>　　圖1 A-K. 活體形態(tài)和纖毛圖式(A–E, G, H, K)是Pinacocoleps similis (Kahl, 1933)。（F, I）是P. tesselatus (Kahl, 1930) Foissner et al., 2008，以及（J）是P. spiralis (N

102、oland, 1937)。A.一個(gè)典型個(gè)體的側(cè)面觀。B.一個(gè)盔板列。圍口板已省略。C.一個(gè)細(xì)長(zhǎng)個(gè)體的側(cè)面觀。D.一個(gè)豐滿個(gè)體的側(cè)面觀。E. 側(cè)面觀的纖毛圖式和口腔結(jié)構(gòu)。F. P. tesselatus (Kahl, 1930) (from Kahl, 1930)。G. P. similis (Kahl, 1933) (from Kahl, 1933)。H. P. similis (Kahl, 1933) (from Kahl, 1935

103、)。I. P. tesselatus (Kahl, 1930) (from Borror, 1972)。J. P. spiralis (Noland, 1937) comb. nov. (from Noland, 1937)。K.從側(cè)面觀來展示纖毛圖式，口腔筐，大核，小核和射</p><p>　　圖2A-N.活體Pinacocoleps similis (Kahl, 1933)（A-J），氨銀染色后（K，L）和蛋

104、白銀染色后（M, N）。A-C.整體觀（A）以及輕微擠壓個(gè)體（B, C），尾刺毛（楔形符號(hào)），尾纖毛（A,C的箭頭處）。D.最近分裂的個(gè)體。注意身體的前半部分比較修長(zhǎng)的，因?yàn)榧装暹€沒有形成。楔形符號(hào)指示尾刺毛，箭頭指示尾纖毛。E,F.主要的盔板。楔形符號(hào)指示的是纖毛孔，箭頭符號(hào)指示高聳的脊。G.前端次二板，楔形符號(hào)指示了前末端尖銳處。H.尾部觀，末端收縮泡（箭頭處）。I.尾部觀，楔形符號(hào)指示尾刺毛。J.頂端觀，楔形符號(hào)指示末端尖銳處。K

105、.頂面觀，展示的是口區(qū)細(xì)胞器（楔形符號(hào)處）。L.尾部觀，展示纖細(xì)的尾部纖毛圖式。M,N.側(cè)面觀，展示纖毛圖式，大核和口腔筐的外部（楔形符號(hào)處）。比例尺：25μm (A–D, F, M, N), 10 μm (E, G–K)。</p><p>　　3.2 東方諾蘭德蟲Nolandia orientalis </p><p>　　3.2.1 形態(tài)描述</p><p>

106、　　蟲體長(zhǎng)約70–100 × 30–40μm，形態(tài)多樣但一般呈現(xiàn)圓筒形且有輕微不對(duì)稱，長(zhǎng)與寬的比為2.5:1，在身體中部與主盔板連接處常輕微的變窄，側(cè)扁約5:3。橫向面的前末端較短，第二層盔板的前末端尖銳化像個(gè)皇冠；身體的末端有規(guī)律的縮短（圖3A, B, 4A-C）。射出體在銀染法后可見，約2.0 × 0.5 μm，沿纖毛列成簇分布，每簇3-4個(gè)（圖4K）。有無色或褐色的內(nèi)質(zhì)，通常有大量的顆粒（直徑3-6μm）食物泡

107、直徑約15μm（圖3A, 4A, B）。球狀大核直徑約10μm，球狀小核直徑約2μm，它們毗鄰或者相連接，大核（圖3A, L, 4I, J）。收縮泡位于尾部（圖3B, 4D）。依靠逆方向旋轉(zhuǎn)游泳。</p><p>　　東方諾蘭德蟲由六層盔板組成：圍口層，前端次二層，前端主層，后端主層，后端次二層和尾層，每層平均由19個(gè)長(zhǎng)方形盔板組成。蟲體的圍口層幾乎很難辨認(rèn)。前端次二層的前端明顯的尖銳使得看似皇冠狀，有些有著顯眼

108、的頂刺（圖3A, B, 4A, B）。前端主層常有6個(gè)單向窗（圖3A, 4F）。后端主層有5個(gè)單向窗，有些有著不明顯的尾刺毛（圖3A, D, 4A-C, G）。后端次二層有兩個(gè)窗口和堅(jiān)硬的尾刺毛（圖3A, 4A-D）。尾層只能在斜向或極后端的視圖中看到，其擁有長(zhǎng)達(dá)5μm的尾刺毛（圖4D）。盔板的精細(xì)結(jié)構(gòu)展示在圖3D, 4E-G：在右板邊緣有腎型單向窗；右板邊緣的齒與窗口交替排布；板脊光滑并與窗口相連；許多球形顆粒排布在鋸齒狀的左側(cè)邊緣。