生物安全知識

1、生物安全,一、概念 防范、處理病原微生物及其毒素對人體危害的綜合性措施。二、核心 防感染、防擴(kuò)散。三、目標(biāo) 保護(hù)實驗室工作人員、社會公眾和環(huán)境。,四、綜合性措施1. 微生物危害評估2. 安全設(shè)備、個體防護(hù)裝置3. 實驗室的特殊設(shè)計和建設(shè)要求4. 嚴(yán)格的管理制度和標(biāo)準(zhǔn)化的操作規(guī)程,生物安全,微生物,微生物是存在于自然界的一大群體形微小、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼直接看不見，必須藉助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡放大數(shù)百倍、數(shù)

2、千倍，甚至數(shù)萬倍才能觀察到的微小生物。,微生物的分布,微生物在自然界的分布極為廣泛，其中以土壤中最多。在人類和動、植物的體表，以及與外界相通的腔道中，亦有大量的微生物存在。,微生物與人類的關(guān)系,絕大多數(shù)微生物對人類和動、植物是有益的,而且有些是必需的，如：固氮菌；釀酒、制醋；抗生素、人體的正常菌群。 有少數(shù)微生物能引起人類和動、植物的病害，這些具有致病性的微生物稱為致病微生物或病原微生物。,病原微生物侵入機(jī)體后，生長、繁殖、

3、釋放毒性物質(zhì)等，引起機(jī)體不同程度的病理改變的過程，稱為感染或傳染。 細(xì)菌進(jìn)入機(jī)體能否引起感染取決于兩方面的因素，一是機(jī)體的的免疫力，二是細(xì)菌的致病力，其結(jié)局根據(jù)病原菌和宿主兩方面力量強(qiáng)弱而定。,感染,一、根據(jù)感染的來源分類1. 外源性感染來自宿主體外的病原菌所引起的感染 傳染源：病人及帶菌者（為主） 患病及帶菌動物 2. 內(nèi)源性感染 條件致病菌,感染的類型,二、

4、根據(jù)感染發(fā)生的地點分類1. 醫(yī)院內(nèi)感染2. 社會感染3. 實驗室感染,感染的類型,感染的類型,三、根據(jù)感染的結(jié)果分類1. 隱性感染 當(dāng)宿主的抗感染免疫力較強(qiáng)，或入侵的病菌數(shù)量不多、毒力較弱，感染后對機(jī)體損害較輕，不出現(xiàn)或出現(xiàn)不明顯的臨床癥狀。又稱亞臨床感染。,感染的類型,三、根據(jù)感染的結(jié)果分類2. 顯性感染 當(dāng)宿主體抗感染的免疫力較弱，或侵入的致病菌數(shù)量較多、毒力較強(qiáng)，

5、以致機(jī)體的組織細(xì)胞受到不同程度的損害，生理功能也發(fā)生改變，出現(xiàn)一系列的臨床癥狀和體征。又稱臨床感染。,感染的類型,三、根據(jù)感染的結(jié)果分類3. 帶菌狀態(tài) 有時致病菌在顯性或隱性感染后并未立即消失，在體內(nèi)繼續(xù)留存一定時間，與機(jī)體免疫力處于相對平衡狀態(tài)。 帶菌者—重要的傳染源。,感染途徑,1．呼吸道,如肺結(jié)核、百日咳,2．消化道,如傷寒、霍亂、食物中毒,3．皮膚粘膜,4. 血液；5. 經(jīng)節(jié)肢動物媒

6、介；6. 性傳播,人，如破傷風(fēng)桿菌,傷口,，即糞—口途徑,實驗室相關(guān)感染,感染來源培養(yǎng)物和儲存物實驗動物標(biāo)本被上述內(nèi)容污染的物品,實驗室相關(guān)感染,感染途徑 氣溶膠吸入感染皮膚、粘膜接觸感染 食入感染,實驗室相關(guān)感染,導(dǎo)致感染最多的4種實驗室事故溢出和潑灑針頭和注射器銳器、碎玻璃動物的咬傷或抓傷,實驗室相關(guān)感染,敏感宿主免疫系統(tǒng)疫苗接種狀況年齡 必須有錄用前或上崗前的體檢。記錄個人病

7、史，并進(jìn)行一次有目的的職業(yè)健康評估。根據(jù)需要提供主動或被動免疫。,實驗室相關(guān)感染（事例）,1993年國內(nèi)某醫(yī)院報告225名醫(yī)院工作人員HBV檢測結(jié)果，醫(yī)生護(hù)士、檢驗人員，其中檢驗人員感染率最高，陽性率為81.2%。多為主觀估計錯誤及操作失誤引發(fā)。2003年 新加坡、臺灣SARS實驗室感染事件2004年 北京SARS實驗室感染事件,通過微生物危害評估確定對象微生物應(yīng)在哪一級的生物安全防護(hù)實驗室中進(jìn)行操作；制定相應(yīng)的操作規(guī)程、實驗室管理

8、制度和緊急事故處理辦法，必須形成書面文件并嚴(yán)格遵守執(zhí)行。,微生物危害評估,微生物的危害等級,危害等級分類的依據(jù)病原微生物的毒力傳播方式和宿主范圍具有的有效預(yù)防措施具有的有效治療措施,微生物的危害等級,微生物的危害等級（分為四個等級）,I級：個體和群體低危險 是指在通常情況下不會引起人或者動物疾病的微生物。如大腸桿菌、肺炎球菌等。,微生物的危害等級,II級：中等個體危險，有限群體危險 能引起人或動物發(fā)病，但

9、一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴(yán)重危害的病原體。實驗室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險有限。如沙門氏菌屬、志賀氏菌屬、霍亂弧菌、乙型肝炎病毒、流感病毒、麻疹病毒等。,III級：高個體危險，低群體危險 能引起人類或動物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原體。如炭疽桿菌、結(jié)核分枝桿菌、鼠疫桿菌、 HIV 、狂犬病病毒等。,

10、微生物的危害等級,IV級：高度的個體和群體危險 能引起人類或動物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與動物間傳播的病原體。如埃博拉病毒、拉薩病毒等。,微生物的危害等級,實驗室生物安全防護(hù)分級,一級生物安全防護(hù)實驗室，簡稱BSL1或P1二級生物安全防護(hù)實驗室，簡稱BSL2或P2三級生物安全防護(hù)實驗室，簡稱BSL3或P3四級生物安全防護(hù)實驗室，簡稱BSL4或P4

11、 一級最低，四級最高。,實驗室的分級,1. 一級生物安全防護(hù)實驗室適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物，如用于教學(xué)的普通微生物實驗室等。不需要生物安全柜開放實驗臺,2. 二級生物安全防護(hù)實驗室適用于對人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物Ⅰ級生物安全柜、防護(hù)服、生物危害標(biāo)志開放實驗臺,實驗室的分級,3. 三級生物安全防護(hù)實驗室 適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的

12、致病微生物及其毒素，通常已有預(yù)防傳染的疫苗。 HIV 的研究（血清學(xué)實驗除外）應(yīng)在三級生物安全防護(hù)實驗室中進(jìn)行Ⅱ級生物安全柜、特殊防護(hù)服、定向氣流（外界－HEPA－清潔區(qū)－半污染區(qū)－污染區(qū)－ HEPA－外界）、生物危害標(biāo)志,實驗室的分級,4. 四級生物安全防護(hù)實驗室 適用于對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效的疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素。III級生物安全柜、正壓服、定向氣流（外界－HE

13、PA－清潔區(qū)－半污染區(qū)－污染區(qū)－ HEPA－外界）、 生物危害標(biāo)志外出淋浴、污染物特殊處理,實驗室的分級,安全設(shè)備,生物安全柜是最重要的安全設(shè)備，形成最主要的防護(hù)屏障。實驗室應(yīng)按要求分別配備Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級生物安全柜，防護(hù)能力逐級提高。不得用超凈工作臺代替生物安全柜。,,超凈臺,氣流從頂部或底部經(jīng)過過濾器后從操作區(qū)正面流向工作臺面，被樣品污染的氣流排出柜外，沒有循環(huán)氣流。超凈臺保護(hù)樣品不受污染，適用于普通實驗室或1級生物安全水平中對人員

14、和環(huán)境無保護(hù)要求的實驗。,Ⅰ級生物安全柜,只提供對操作者的保護(hù)，不對產(chǎn)品進(jìn)行保護(hù)。氣流從操作員處流入柜體高效空氣過濾器（High efficiency particulate air Filter，HEPA）過濾的氣體排放到環(huán)境中。,對操作員和產(chǎn)品進(jìn)行保護(hù)氣流從操作人員處流入安全柜中HEPA過濾后的氣體排放到環(huán)境中,Ⅱ級生物安全柜,A 用于連接等臂長手套的艙孔B 窗口C 兩個排風(fēng)HEPA 過濾器D 送風(fēng)HEPA 過

15、濾器E 雙開門高壓滅菌器或傳遞箱F 化學(xué)浸泡槽,Ⅲ級生物安全柜（手套箱）,實驗室防護(hù)服面部防護(hù)手套呼吸防護(hù),個人生物安全防護(hù)裝備,個人生物安全防護(hù)1. 在實驗室工作時，任何時候都必須穿著工作服、隔離服、連體衣或正壓服。,2. 在處理完感染性實驗材料和動物后，以及在離開實驗室工作區(qū)域前，都必須洗手。3. 在進(jìn)行可能直接或意外接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動物的操作時，應(yīng)戴上合適的手套。手套用完后，應(yīng)

16、先消毒再摘除，隨后必須洗手。,個人生物安全防護(hù),4. 為了防止眼睛或面部受到潑濺物、碰撞物或人工紫外線輻射的傷害，必須戴安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護(hù)設(shè)備。5. 嚴(yán)禁穿著實驗室防護(hù)服離開實驗室（如去餐廳、咖啡廳、辦公室、圖書館、員工休息室和衛(wèi)生間）6. 不得在實驗室內(nèi)穿露腳趾的鞋子,個人生物安全防護(hù),廢棄物處置 1. 所有棄置的實驗室生物樣本、培養(yǎng)物和被污染的廢棄物在從實驗室中取走之前，應(yīng)使其達(dá)到生物學(xué)安全。

17、2. 生物學(xué)安全可通過高壓蒸汽滅菌或其他被承認(rèn)的技術(shù)達(dá)到。,廢棄物處置 3. 可重復(fù)使用的物品和污染的器具應(yīng)置于裝有次氯酸鈉1:10稀釋液或其他合適的消毒劑的不銹鋼容器內(nèi)，然后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌、清洗和再次滅菌。4. 實驗室廢棄物應(yīng)置于適當(dāng)?shù)拿芊馇曳缆┤萜髦邪踩\出實驗室。運輸感染性物質(zhì)時，應(yīng)使用金屬的或塑料材質(zhì)的二層容器。,消毒 利用理化因素殺死物體或環(huán)境中病原微生物的措施。并不一定能殺死

18、含芽胞的細(xì)菌或非病原微生物。滅菌 利用理化因素殺死物體上所有微生物的過程，包括芽胞。,消毒與滅菌,防腐 防止或抑制細(xì)菌生長繁殖的方法清潔 通過除去塵埃和污穢減少微生物數(shù)量無菌 不存在任何活菌，是滅菌的結(jié)果。無菌操作 防止細(xì)菌進(jìn)入人體或物品的操作技術(shù),消毒與滅菌,1. 高壓蒸氣滅菌法 高壓蒸氣滅菌器是一個密閉、耐高壓蒸鍋。

19、103.4kPa（1.05kg/cm2）溫度可達(dá)121.3ºC，15~20min，可殺滅包括細(xì)菌芽胞在內(nèi)的所有微生物。,一、濕熱滅菌法,2. 煮沸法 100ºC，5min 殺死細(xì)菌繁殖體100ºC，1~2h 殺滅細(xì)菌芽胞加入2%碳酸鈉 沸點為105℃，防金屬物品生銹。,3. 間歇蒸氣滅菌法 利用反復(fù)多次的流動熱蒸氣間歇加熱以達(dá)到滅菌的目的。100ºC，15~30min，37

20、ºC孵箱過夜×3次適用于一些不耐熱的含糖、牛奶等培養(yǎng)基。,二、干熱滅菌法 1. 焚燒 用于廢棄物品或動物尸體等2. 燒灼 用于微生物學(xué)實驗室的接種環(huán)、 試管口等的滅菌。,3. 干烤 利用干烤箱滅菌（160~170ºC，2h） 適用于高溫下不變質(zhì)、不損壞、不蒸發(fā)的物品。,三、紫外線 波長240~3

21、00nm的紫外線具有殺菌作用，其中以260~266nm最強(qiáng)。特點： 紫外線穿透力較弱；對人體皮膚、眼睛有損傷作用。用途： 一般只用于手術(shù)室等的空氣消毒，或用于不耐熱物品的表面消毒。,四、化學(xué)消毒滅菌法,（一）高效消毒劑 1.含氯消毒劑；2.過氧化物消毒劑； 3.醛類消毒劑；4.環(huán)氧乙烷（二）中效消毒劑 1.含碘消毒劑；2.醇類消毒劑（三）

22、低效消毒劑 1.季銨鹽類；2.氯已定；3.高錳酸鉀,五、室內(nèi)空氣的消毒1. 自然通風(fēng)2. 紫外線燈照射3. 化學(xué)消毒法 （1） 15％過氧乙酸加熱熏蒸或0.5%過氧 乙酸噴霧（2） 3%過氧化氫噴霧4. 濾過除菌,六、手和皮膚的消毒 一般應(yīng)用肥皂刷洗，流水沖凈，可消除手上絕大部分甚至全部細(xì)菌。當(dāng)被病原微生物污染時，一般常用的消毒劑包括75%乙醇擦手或用0.2～0.5‰洗

23、必泰 、0.1%新潔爾滅、0.5～1‰過氧乙酸 、3～5%來蘇浸泡 5～10分鐘 。,實驗室基本管理,1. 實驗室內(nèi)的準(zhǔn)入 （1）非實驗有關(guān)人員和物品不得進(jìn)入實驗室； （2）在實驗室內(nèi)不得進(jìn)食和飲水，或者進(jìn)行其他與實驗無關(guān)的活動； （3）實驗室工作人員、外來合作者、進(jìn)修和學(xué)習(xí)人員在進(jìn)入實驗室及其崗位之前必須經(jīng)過實驗室主任的批準(zhǔn)。,在二級以上的生物安全防護(hù)實驗室的入口明顯位置處必須貼生物危害警告標(biāo)志，并標(biāo)明級別。,實驗室基本管理,

24、2. 實驗室工作人員的資格和培訓(xùn) （1）實驗室的工作人員必須是受過專業(yè)教育的技術(shù)人員。在獨立進(jìn)行工作前還需在中高級實驗技術(shù)人員指導(dǎo)下進(jìn)行上崗培訓(xùn)，達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)，方可開始工作。 （2）實驗室的工作人員必須被告知實驗室工作的潛在危險并接受實驗室安全教育，自愿從事實驗室工作。,實驗室基本管理,2. 實驗室工作人員的資格和培訓(xùn) （3）實驗室的工作人員必須遵守實驗室的所有制度、規(guī)定和操作規(guī)程。 （4）三級和四級生物安全防護(hù)實驗室的工作

25、人員在開始工作前必須留本底血清進(jìn)行有關(guān)檢測，以后定期復(fù)檢。如有疫苗必須進(jìn)行免疫注射。,感染性材料灑溢處理的一般原則1. 戴手套和防護(hù)服2. 用布覆蓋3. 倒消毒劑處理半小時以上 4. 再次消毒、洗凈或擦凈。5. 污染材料放置在廢棄物處理容器中，并通知有關(guān)部門。,應(yīng)急預(yù)案 實驗室發(fā)生高致病性病原微生物泄漏時，預(yù)防、控制措施包括：①封閉被病原微生物污染的實驗室或可能造成病原微生物擴(kuò)散的場所；②開展流行病學(xué)調(diào)查