采供血機構工作人員遠程二類上崗

1、采供血機構工作人員遠程二類上崗培訓,張俊玲,第二冊 傳染病和傳染性病原體,一 、傳染性病原體 二、免疫學基礎三、 HIV 四、 HIV篩選試驗原理五、 HIV抗體的篩檢方法的選擇六、抗HIV抗體篩檢試驗的應用七、質量保證八、其它傳染性病原體,一 傳染性病原體,病毒、細菌、原蟲、真菌，只有前三種可經血傳播，但最常見的經血傳播的病原體是病毒。,,病毒：由核酸、核衣殼、

2、包膜組成；但朊病毒不含核酸、僅由蛋白質組成、此病毒侵襲神經系統和腦組織。病毒蛋白質存在于病毒包膜和核衣殼上，可被機體免疫應答來識別。,,細菌：原核生物-具有清晰的細胞 結構、但缺乏真正的細胞核。許多細菌包被有莢膜，能直接引起免疫應答。,,原蟲：屬真核生物、是單細胞有機體、大多數原蟲生活在水里、僅少數寄生在其它動物的身上。真核生物-有真正的細胞核（核膜、核仁）。,,真菌：不同與細菌、大多數真菌能分解有 機物和廢物、只有少數種類的真菌可

3、引起人類疾病。真菌分霉菌型和酵母型（酵母菌和類酵母菌）酵母型以單細胞形式通過出芽的方式生長。霉菌可形成菌絲體，酵母菌不形成菌絲體。,,近年，一種新的傳染性病原體朊病毒被證實存在。朊病毒是唯一不含任何核苷酸，僅由蛋白質組成的病原體。,經血傳播的傳染性病原體的傳播,傳染性病原體是否可經血傳播取決于以下三個條件；1. 病原體必須能夠隨血進入宿主或患者體內。2. 被感染的獻血者沒有任何癥狀。3. 病原體在血液中能存活一段時間。,,具備三個

4、條件是否真的發(fā)生還取決于多種因素，如患者的免疫狀態(tài)和輸入的傳染性病原體的數量。輸血是傳播傳染性病原體的主要途徑但不是首要途徑。,二、免疫學基礎,1、 免疫系統的組成; 免疫器官，免疫組織，免疫細胞，免疫分子組成。,,免疫器官：中樞免疫器官——骨髓、胸腺、是免疫活性細胞的產生、增殖和分化的場所 周圍免疫器官——脾、淋巴結、何粘膜相關淋巴組織、是免疫細胞和應答的場所。,,免疫細胞： 1 .T淋巴細

5、胞 2. B淋巴細胞 3. 第三類淋巴細胞 4. 輔助細胞,,T淋巴細胞：輔助T淋巴細胞（Th）：CD4 分Th1和Th2 細胞毒淋巴細胞（Tc）：CD8,,2. B淋巴細胞：是產生抗體的細胞 3. 第三類淋巴細胞（大顆粒淋巴細胞）：

6、NKc Kc LAK細胞（5%-10%） NKc殺傷腫瘤細胞和病毒感染細胞 Kc 識別IgG包被的細胞 LAK非特異性的殺滅靶細胞4. 輔助細胞：單核吞噬細胞系統、樹突狀細胞和棘細胞,,免疫分子；主要是免疫球蛋白、既抗體、它屬于r球蛋白。,,1.抗體是由蛋白質和碳水化合物組成、是r-球蛋白、也稱作免疫球蛋白2.抗體分子的基本結構是由一條重鏈（分子量約50000）和一條輕鏈（分子量約25

7、000）組成，共有五種免疫球蛋白：IgG IgM IgA IgE IgD, 其區(qū)別在于重鏈成分和結構的不同。,,3. IgG 占人體免疫球蛋白總量73%、4. IgM占人體免疫球蛋白總量8%、由五個基本單位組成、是初次免疫應答的主要抗體。5. IgA占人體免疫球蛋白總量18%、由二個基本單位組成、是分泌物和粘膜中的主要抗體,,6. IgE 和 IgD共占1%、IgD位于淋巴細胞表面為表面受體；IgE與過敏反應有關、位于肥大

8、細胞和嗜堿性細胞表面,,免疫系統的組成：免疫器官、免疫組織、免疫細胞 免疫分子組成。但根據其作用，免疫系統是由兩部分組成、即外來蛋白的體內識別和阻止體內傳染性病原體繁殖生長這兩部分組成，這種免疫應答是特異性的。,免疫反應,免疫反應分體液免疫和細胞免疫細胞免疫由T淋巴細胞介導、包括輔助性T細胞和殺傷性T細胞，輔助性T細胞表達CD4、殺傷性T細胞表達CD8，體液免疫（Bc）:是B細胞介導的抗原抗體反應，和免疫學檢測方法有關,,細胞免疫（

9、Th）→Th1 → Th2 ↗ NK破壞被微生物感染的細胞和組織 Tc: →LAK非特異性的殺滅靶細胞 ↘K：識別IgG包被的感染細胞,,減少輸血傳染傳染性病原體的方法仔細選擇獻血員篩檢捐獻的血液去除血液中被感染的特殊成分用物理方法滅活感染性病原體,,血液篩查就是檢查傳染性標志物傳染性標志物：可以是病原體本身、也可以是特異性抗

10、體.HIV和HBV 感染后，抗體的產生對機體免受再次感染有保護作用，,,對獻血員篩查而言，檢測病原體自身比檢測抗體要好。抗體的出現僅提示了一種免疫力，而非感染狀態(tài)。對乙型肝炎，檢測HBsAg是用于HBV 感染的篩查；而對于HIV，檢測HIV抗體用于獻血者HIV感染的篩查,三 HIV,1. 1983年發(fā)現的HIV1；1986年西非發(fā)現HIV2，兩者的包膜蛋白不同。2. 與HIVRNA相關的兩種蛋白質分別是7KDa和9KDa（7P和9

11、P），逆轉錄酶是P66。糖蛋白的縮寫是gp.3. HIV1的包膜蛋白：P17/gp41/gp120 HIV2的包膜蛋白:P17/ gp36/gp110\130.,,4. 當病毒開始復制時、感染進入最后階段、產生大量病毒粒子，以出芽的方式脫離細胞時，外面包裹一層細胞膜、形成病毒顆粒。5. HIV為逆轉錄病毒，其核心蛋白P24和包膜蛋白gp41最具免疫性，主要破壞免疫系統、感染CD4+細胞。（CD4+細胞：幫助刺激免疫應答的Tc、

12、Thc、吞噬細胞）,,6. AIDS相關綜合征的縮寫是ARC7. ARC惡性發(fā)展的預兆是：既可檢測到gp41抗體又能檢測到P24抗原。8. 輸血是HIV傳播的重要途徑、但不是主要途徑。,四HIV篩選試驗原理,1. HIV抗體檢測的基本方法：EIA（抗人球法I型、競爭法 II型、夾心法 III型）、顆粒凝集試驗、特異性快速試驗（顆粒凝集試驗、特異性快速試驗只能檢測抗體）。,,抗人球蛋白EIA法中的標記酶通常是辣根過氧化物酶（使底

13、物氧化）和堿性磷酸酶（使底物去磷酸化）。競爭型EIA法的酶結合物是酶標HIV抗體 ，其濃度應低于標本中的HIV抗體最小濃度。,,HIV抗原檢測 ： HIV抗原檢測采用夾心法（抗體-抗原-抗體 ）結果判讀 ： I型與夾心法 III型中、高OD值、產生顏色、表明有反應；競爭法 II型中、高OD值、產生顏色、表明無反應；Cut-off值的計算：Cut-off值=Ncm+0.2 (陰性對照的平均值),,標準比率=OD值/Cut-of

14、f值，數值小于1為無反應結果； 數值大于1為有反應結果；但在競爭型EIA法中、比率= Cut-off值/ OD值。,,特異性快速法：蛋白A由金黃色葡萄球菌產生，能與IgG的Fc段結合（補體結合部位）。,五HIV抗體的篩檢方法的選擇,靈敏度：檢測出最弱陽性標本的能力（真陽性/真陽性+假陰性100%） 特異性：避免假陽性或非特異性陽性結果的能力（真陰性/真陰性+假陽性100%）。 質控品：質控品中不能含有那些可能干擾實驗的防腐

15、劑，疊氮鈉可能EIA法中的辣根過氧化物酶時候失活。,六抗HIV抗體篩檢試驗的應用,篩檢結果處理：初試陽性標本用特異性快速法一般只重做一份，而顆粒法和EIA均做雙份。,七質量保證,1. 對質量體系而言，最本質的是各種程序文件化。2. SOP初稿由各崗位工作人員起草，負責人審核。3.質量審核的目的在于質量控制工作的完整性和質量體系得有效性。,八其它傳染性病原體,（一） HBV（二） HCV（三） 梅毒（四）瘧疾（五）恰加斯?。ㄓ?/p>

16、稱為南美洲錐蟲?。?,（一）、HBV 27nm的HBV殼體核心含有病毒核酸和DNA聚合酶、其具有傳染性；而22nm的球形顆?；蚬軤钚☆w粒只含有病毒蛋白、其沒有傳染性。,HBV-1 病毒結構模式圖,HBV-1病毒的增值過程,HBV感染后的血清變化,,HBV血清標志物,對血清標志的基本認識,二HCV感染與檢測,HCV-1 病毒結構：至今尚未培養(yǎng)成功，三維結構不清，使用反義病毒學推出。,HCV-2 臨床病理,,丙肝實驗室診

17、斷及臨床意義,（三）、梅毒,梅毒 密螺旋體屬T-蒼白球細菌傳染?。℅-），梅毒螺旋體對溫度非常敏感、4℃保存24-48小時后、傳染危險基本上消除。,密螺旋體,人類密螺旋體屬病原體主要有四種統稱： 1. 蒼白球（梅毒） 2. 細弱密螺旋（雅司病）局限在熱帶T-蒼白球亞類 3.品他螺旋體（品他?。?：主要

18、在 中美和南美洲流行 4.（Bejel?。悍侵藜爸袞|的非性傳 染病,梅毒臨床分期,一期損傷粘膜淋巴系統一般分三期： 二期損傷皮膚和細胞膜、傳染性最 強。 三期損傷神經系統合心血管系統,,梅毒檢測

19、： →非特異性：RPR(用正常牛 心類脂質作抗原)、USR ↘ 特異性：TPHA、FTA-ABS （用梅毒螺旋體作為抗原）螺旋體是革蘭氏染色陰性，細胞壁中的外層細胞膜含有抗原性蛋白,（四）、瘧疾,1. 瘧原蟲有二個宿主：人和按蚊2. 瘧原蟲在二個宿主的生命循環(huán) 人類宿主內的生命循環(huán)： 孢子蟲→肝細胞

20、（滋養(yǎng)體→裂細胞→裂殖子）→釋放入血→紅細胞（滋養(yǎng)體→裂細胞→裂殖子）→部分形成雌雄配子體（雌雄配子體在血液中存活6-12小時）,,能引起瘧疾的瘧原蟲有四種： 間日瘧原蟲 卵型瘧原蟲 三日瘧原蟲 惡性瘧原蟲通常只有由惡性瘧原蟲引起的瘧疾是致命的,（四）、恰加斯?。ㄓ址Q為南美洲錐蟲病）,1.克魯斯錐蟲引起的、屬于有鞭毛的原生動

21、物2.克魯斯錐蟲在人類宿主的血液中不能增殖3.錐鞭體在昆蟲中的腸內以短膜型鞭毛蟲形式增殖,有關概念,（一）、病原體1、能引起輸血傳播的病原體有：病毒、細菌、原蟲。2、最常見的經輸血傳播的病原體是病毒。,（二）、病毒,1、朊病毒是唯一的不含任何核苷酸僅由蛋白質組成的病原體。2、DNA是由堿基（腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶）、磷酸和核糖組成的脫氧核糖核酸。RNA是由堿基（腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶）、磷酸和核糖組成的核糖

22、核酸。3、病毒感染相應的宿主細胞后，可被機體免疫應答的物質是病毒核酸。 4、病毒的結構：病毒核酸、病毒衣殼（病毒核心）、包膜（病毒外衣）。5、窗口期：潛伏性感染后，機體內不能檢測到相應的抗體,(三)、細菌

23、,1、細菌是由細胞核、細胞器、細胞壁極其附屬結構（莢膜、鞭毛、菌毛和芽孢）組成。2、細菌感染人體后產生的病變通常是由細菌產生并釋放病毒而導致的。,,3·真核細胞微生物：有核膜、核仁、多個染色體，由DNA和組蛋白組成。（真菌、原蟲）4·原核細胞微生物：僅有原始核，無核膜和核仁，僅為單個裸露的DNA分子。（細菌）5·非細胞性生物：由單一的DNA或RNA和蛋白質組成，必須寄生在活的易感細胞內生長繁殖。（病毒

24、）,(四)、原蟲和真菌,1、原蟲是單細胞有機體。2、真菌是一種具有典型細胞核的真核細胞微生物。 a.酵母菌： 單細胞真菌，不形成菌絲， 真菌分為 b.類酵母菌：但類酵母菌可有假菌絲 c.霉菌：多細胞真菌，有菌絲和孢子,血型血清學,一、血液中主要成分的功能及其在數學中的意義二、ABO的抗原抗體反應及其影響因素三、 ABO血型系統的正反定型，對獻血者和患者鑒定四、RH血

25、型系統 五、配血試驗重要性六、血型鑒定和配血試驗的原理,血型血清學,一、血液成分與功能全血是由細胞和血漿組成，1、紅細胞： 其入血后壽命約120天、隨后被網狀內皮系統降解清除，紅細胞內的血紅蛋白在輸血工作中用已知濃度的硫酸銅溶液測定、男性用密度為1.052、女性用1.050的硫酸銅溶液。血紅蛋白男135-170g/L 女120-160g/L,,↗粒細胞2.白細胞： →淋巴細胞 ↘單核細

26、胞 白細胞是有核細胞且平均壽命很短，粒細胞平均3-5天，單核細胞離開循環(huán)系統后壽命只有幾天,,↗中性粒細胞 50%-70% 粒細胞 →嗜堿性粒細胞1%-5% （其功能是抵御炎癥感染） ↘嗜酸性粒細胞 0%-1%,,淋巴細胞：大部分由淋巴組織和胸腺產 生 20%-40% 主要是針對外源性抗原及

27、病毒性 感染,,單核細胞： 8% （清除外源性物質如細菌、這一 過程稱為吞噬）3. 血小板：正常成人含量約10-30萬、血小板離體后如保存適當、可保存5天,,血清和血漿： 血清是凝固紅細胞的上清液； 血漿是抗凝血的上清液。凝血激活途徑：內源性（表面接觸）、外源性（組織損傷 ）,二、血型免疫學基礎,1. I

28、gG和IgM的區(qū)別（都能激活補體、最適PH值6.5-7.5） IgG（73%）不完全抗體、能通過胎盤、與紅細胞在鹽水中不凝集、但可致敏紅細胞、最適反應溫度37℃、。如HR血型抗體 IgM（8%）完全抗體、不能通過胎盤、與紅細胞在鹽水中凝集、最適反應溫度4℃、。如ABO血型抗體，平均壽命10天,,2. 抗原與抗體比例最適細胞濃度是2-5%3. 抗人球蛋白試驗 抗人球蛋白試驗分三階段；第一致敏與包被、第二階段洗滌、第三階段加入抗

29、人球蛋白。4. 補體 56℃30分鐘可將其滅活,三、ABO血型系統,1. 1900年Landsteiner發(fā)現了ABO血型2. ABO血型鑒定、必須進行細胞與血清兩組試驗、即正定與反定、反定時用O細胞的目的是證實是否有不規(guī)則抗體3. 新生兒ABO血型只作正定4. A抗原亞型1911年發(fā)現A1 A2兩種亞型、A2 和A2B的血清中有可能有抗A1抗體。,,5. 抗AB和抗A常用抗AB來確定弱A和B抗原這種抗A和抗B的混合

30、物與弱A和B抗原親和力強，抗AB在患者的紅細胞鑒定中部需要，但建議用于獻血者簡單。6. 直接抗人球蛋白試驗：測定細胞表面致敏的抗體7. 間接抗人球蛋白試驗：測定游離在血清中的抗體,,A2和A2B的人血清中有可能有抗A1，但通常很弱。A2人血清有抗A1占2%， A2B的人血清中有抗A1占25 %,四、Rh血型系統,。,RH系統不象ABO系統，它有六個基因，稱為：Cc,Dd,Ee;五種抗原稱為Cc,D,Ee。d基因不產生抗原。,,1.

31、 RhDu型的獻血員作為Rh陽性看待、RhDu型的病人作為Rh陰性性看待。2. 不完全D和RhDu型不同、不完全D是部分抗原丟失、可產生針對丟失部分抗原的抗-D抗體；而RhDu型是細胞上D抗原數量低于正常。,五、配合性試驗和發(fā)血,患者用血選擇1.為大量輸血的患者選血、大量輸血是指患者在24小時內輸了超過自身血容量的血液、在輸了12單位血后，可以輸注未經交叉配合的血液，但三天后仍需輸血必須進行交叉配合。,,2. 給嬰兒或新生兒選擇全血

32、或紅細胞懸液、一般用不超過7天的、最新鮮的血液。血液選用與母嬰配合Rh血型合適的血液（由于嬰兒血清中存在母親的血型抗體如母親為O型，嬰兒為A型，則選用O型的紅細胞加AB型血漿）；在換血的情況下選血的原則有賴于換血的原因。RhD新生兒溶血病患兒換血、則用RhD陰性血；ABO新生兒溶血病患兒換血、則用低效價O型血；其他任何新生兒黃疸患兒換血、可選用ABO、Rh與嬰兒同型的血液或Rh同型的。,,3. 不規(guī)則抗體篩選：不規(guī)則抗體篩選多用抗人球蛋

33、白試驗、篩選細胞有雙細胞篩選R1R1O型CDe/CDe, R2R2cDE/ cDE, 三細胞篩選R1R1 、R2R2 、 RRO型cde/cde.,,4. 輸血反應：發(fā)熱反應 過敏反應 溶血反應,,溶血反應：→血管內溶血：在循環(huán)系統內紅細胞溶解，伴有黃疸和血紅蛋白癥，這種反應主要是由IgM型抗體引起。↘血管外溶血：由吞噬細胞造成紅細胞破壞，由I

34、gG型抗體引起。,血型鑒定和配血試驗,血型鑒定方面注意兩個問題，一個是抗血清：污染和效價降低，污染導致假陽性、效價降低導致假陰性一個是標本：除了污染、還需要考慮纖維蛋白的影響。,。,假凝集：除了試劑和標本的污染外，這種現象通常出現在白蛋白/球蛋白比例不正常的血清中。如果是假凝集、加一滴高滲鹽水（1.5%）凝集散開，而正凝集不會散開。華通膠也會引起假凝集（錢串狀凝集），可用37℃鹽水洗滌就可以。,自身抗體和冷抗體,自身抗體和冷抗體

35、：影響ABO反定型。這種現象用37℃孵育。 冷抗體非常強時、 37℃孵育會引起溶血。,紅細胞免疫抗體的測定,1.鹽水法2.酶（木瓜酶）法3.抗人球蛋白法（間接法）：致敏、洗滌、 加抗人球蛋白試劑 致敏; 洗滌:鹽水的PH值必需在6.5~7.5之間。4.直接人球蛋白法：溶貧、輸血反應、新生兒溶血，測體內致敏的紅細胞抗體。,,反應強度：用1＋ ~4＋標記、L表示溶血鑒定試驗的紅細胞：血型鑒定使用的紅細胞需要用