人gata結(jié)合蛋白4gata4酶聯(lián)免疫分析

1、人GATA結(jié)合蛋白結(jié)合蛋白4(GATA4)酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：檢測范圍：96T4ngL120ngL使用目的：使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)含量。實驗原理實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)水平。用純化的人GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗

2、的微孔中依次加入GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)，再與HRP標(biāo)記的GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)濃度。試劑盒組成試劑盒組成130倍濃縮

3、洗滌液20ml1瓶7終止液6ml1瓶2酶標(biāo)試劑6ml1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（240ngL）0.5ml1瓶3酶標(biāo)包被板12孔8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml1瓶4樣品稀釋液6ml1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml1瓶12密封袋1個標(biāo)本要求標(biāo)本要求1標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣

4、根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。120ngL5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液60ngL4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30ngL3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液15ngL2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液7.5ngL1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2

5、號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底注意事項注意事項1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在

6、水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴格按照說明書的操作進行，試驗