靈芝多糖的結(jié)構(gòu)特征研究

1、靈芝多糖的結(jié)構(gòu)特性分析靈芝多糖的結(jié)構(gòu)特性分析何晉浙邵平孟祥河孫培龍?（浙江工業(yè)大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院食品系，杭州310032）摘要摘要采用沸水回流法從靈芝子實(shí)體中提取多糖，經(jīng)Sevage法除蛋白，乙醇沉淀，離心、透析、膜分離濃縮、凍干后得靈芝多糖。經(jīng)高碘酸氧化、Smith降解及甲基化反應(yīng)，并利用多糖及剛果紅混合液在堿性溶液中的波長的紅移變化，通過UVVIS、IR、GC、GCMS、NMR對靈芝水提多糖的結(jié)構(gòu)特征及三螺旋體結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析研究。

2、結(jié)果表明：靈芝多糖含有三螺旋體構(gòu)型，GCMS分析靈芝多糖的主要單糖組分為葡萄糖和少量的半乳糖、甘露糖、木糖、艾杜糖，IR及1H—NMR分析多糖為β構(gòu)型高碘酸氧化、Smith降解和甲基化分析說明：多糖主要為(1→3)糖苷鍵連接構(gòu)型并伴有少量的1→6位支鏈鍵連接的結(jié)構(gòu)，靈芝多糖是由D葡萄糖單元通過β(1→3)糖苷鍵連接葡聚多糖，其主要構(gòu)型特征為(1→3)βD線性連接的骨架結(jié)構(gòu)，其主要結(jié)構(gòu)為下列構(gòu)型：關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞靈芝多糖，結(jié)構(gòu)特性，β葡聚糖，

3、三螺旋體1引言靈芝是中國名貴的中藥材，其具有滋補(bǔ)強(qiáng)身、扶正固本、久服有輕身延年之功效，屬多孔菌科類真菌[1]。其水提物的主要活性組分是多糖。近年來越來越多的報告顯示真菌多糖具有強(qiáng)烈的抗腫瘤、抗病毒、抗衰老、抗氧化、降血糖及免疫活性作用[2]。而真菌多糖的生物活性與多糖的結(jié)構(gòu)存在特別重要的構(gòu)效關(guān)系[3]。目前，雖然對靈芝多糖的活性研究報道較多，但對其多糖結(jié)構(gòu)作全面深入的分析研究報道并不是很多。蔣志國等[4]采用HSCCC方法分離純化香菇中

4、的多糖；孫元琳等[5]采用紅外光譜和GC方法分析當(dāng)歸多糖水解后的單糖組成。本研究主要對赤靈芝多糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行提取、純化、通過膜分離，并經(jīng)高碘酸氧化、及甲基化反應(yīng)，通過紫外可見光譜（UVVIS）、紅外光譜（IR）、GCMS、核磁共振（NMR）對靈芝多糖進(jìn)行三旋螺旋體結(jié)構(gòu)及多糖的結(jié)構(gòu)特性進(jìn)行了全面的分析研究。以進(jìn)一步促進(jìn)靈芝多糖的藥理作用及其構(gòu)效關(guān)系的研究。2實(shí)驗(yàn)部分本文系浙江省科技廳和國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃863計劃資助項目（No.2008C

5、32030No.2007AA10Z337）醋酸酐，100℃反應(yīng)1h。再加入少量甲苯，減壓濃縮蒸干，溶于3mL氯仿中，用少量蒸餾水充分振蕩洗滌，如此重復(fù)3次。氯仿層以適量無水硫酸鈉過夜干燥后，過濾用氯仿定容至10mL，供GCMS分析。2.2.4多糖高碘酸氧化分別取0、0.5、1.0、1.5、2.0、4.0mL15mmolL高碘酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液蒸餾水定容至4mL，取0.1mL稀釋250倍后在紫外223nm下測定其光密度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。稱取靈芝

6、多糖25mg，少量水溶解后，加入15mmolL1高碘酸鈉溶解，定容至25mL，置于暗處，室溫下進(jìn)行反應(yīng)，于0、6、12、18…間隔6小時取樣0.1mL，蒸餾水稀釋250倍后測定直至光密度達(dá)穩(wěn)定值加乙二醇終止反應(yīng)由高碘酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算高碘酸消耗量同時取2mL反應(yīng)液測定甲酸耗量。剩余部分進(jìn)行Smith降解：12KMWCO透析袋流水透析48h，未透出液減壓蒸餾濃縮至約30mL置小燒瓶中加150mg硼氫化鈉避光還原28h然后用醋酸中和反應(yīng)液至

7、中性，濃縮、蒸干，如此重復(fù)3次，獲多聚糖醇。稱取10mg多聚糖醇，再加人2molL三氟乙酸2mL，同上述乙?；椒ㄟM(jìn)行水解、乙?；磻?yīng)，進(jìn)行GCMS分析。2.2.5三螺旋體結(jié)構(gòu)分析由多糖和剛果紅混合物在NaOH堿性介質(zhì)下，由可見光譜的最大吸收波長的漂移變化進(jìn)行分析。2.2.6色譜操作條件檢測器為火焰檢測器(FID)，氣相色譜條件為：柱溫初溫150℃，以10℃min，升至220℃，恒溫30min。進(jìn)樣口溫度230℃，分流比1：25，檢測器

8、溫度250℃，氫氣35mLmin，空氣350mLmin，尾吹氣35mLmin。氣質(zhì)色譜條件以2℃min升溫，其他操作條件與GC同。3.結(jié)果與討論3.1多糖的紅外光譜（IR）分析多糖分別經(jīng)10K、30K、50K、100K膜包分離后，以100K以上的膜分離多糖截留組分含量最高，以該組分多糖進(jìn)行特性分析研究。圖1顯示了靈芝多糖（GLP）的紅外光譜，其特征譜線分別在3419.12926.11623.21400.31078.4894cm1具有明顯