臨床常用免疫學(xué)檢測

1、第八章 臨床常用免疫學(xué)檢測,【目的要求】,一、掌握重要免疫反應(yīng)如免疫球蛋白測定，補(bǔ)體C3、C4測定，抗鏈球菌溶血素“O”試驗(yàn)，梅毒螺旋體抗體測定。人獲得性免疫缺陷病毒抗體及RNA測定，類風(fēng)濕因子測定，抗核抗體檢測的定義、參考值及臨床意義。二、熟悉常見免疫反應(yīng)如傷寒和副傷寒沙門菌免疫測定，沙眼衣原體IgG、IgM抗體測定，外斐反應(yīng)，癌抗原125（153）測定，糖鏈抗原199測定。,教學(xué)內(nèi)容,第一節(jié)、體液免疫檢測第二節(jié)、細(xì)胞免疫檢測

2、第三節(jié)、腫瘤標(biāo)志物檢測第四節(jié)、自身抗體的檢測第五節(jié)、感染免疫的檢測第六節(jié)、移植免疫的檢測第七節(jié)、其他免疫檢測,第一節(jié) 體液免疫檢測,一、免疫球蛋白二、補(bǔ)體系統(tǒng),一、免疫球蛋白,概念：由漿細(xì)胞合成分泌的一組具有抗體活性的球蛋白，存在于機(jī)體的血液、體液、外分泌液和部分細(xì)胞的膜上。分類: 可將免疫球蛋白分為五類：IgG、IgA、IgM、IgD 、IgE 。后兩者含量較低。,（一）免疫球蛋白G,人

3、體含量最多（占免疫球蛋白的70% ～ 80% ）；屬再次免疫應(yīng)答抗體；對病毒、細(xì)菌和寄生蟲等都有抗體活性；是唯一可通過胎盤的免疫球蛋白；IgG參考值：7.0～16.6g/L,臨床意義,1.生理性變化胎兒出生前可從母體獲得IgG，22～28周與母體相等，出生后3～4個月降至最低，16歲前達(dá)到成人水平。2.病理性變化（1）IgG增高：是再次免疫應(yīng)答的標(biāo)志。常見于各種慢性感染、慢性肝病、膠原血管病、以及自身免疫性疾?。?,（2

4、） IgG降低：見于各種先天性和獲得性體液免疫缺陷病、重鏈病、輕鏈病、腎病綜合征、病毒感染及服用免疫抑制劑的患者。,（二）免疫球蛋白A,分血清型IgA與分泌型IgA兩種。后者主要存在于分泌液中，如：唾液、淚液等。由呼吸道、消化道、泌尿生殖道的淋巴樣組織合成。參考區(qū)間：成人血清IgA為0.7-3.5g/L。,IgA臨床意義,1.生理性變化兒童比成人低，到16歲前達(dá)到成人水平；2.病理性變化（1）增高：見于IgA型MM、SLE、

5、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、肝硬化、濕疹和腎臟疾病等；（2）降低：見于反復(fù)呼吸道感染、非IgA型MM、重鏈病、輕鏈病、原發(fā)性和繼發(fā)性免疫缺陷病、自身免疫性疾病和代謝性疾病。,（三）免疫球蛋白M,是初次免疫應(yīng)答反應(yīng)中的Ig;是最早出現(xiàn)的抗體；是分子質(zhì)量最大的Ig；具有很強(qiáng)的凝集抗原的能力。如：天然同族凝聚素（抗A、抗B)、冷凝集素。參考區(qū)間：成人IgM:0.5～2.6g/L,IgM臨床意義,1.生理性變化從孕20周起，胎兒自身可合成大量

6、IgM，8-16歲達(dá)成人水平。2.病理性變化（1）增高：見于初期病毒性肝炎、肝硬化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、SLE等。單純增加時(shí)可提示為原發(fā)性感染。（2）降低：見于IgG型重鏈病、IgA型MM、先天性免疫缺陷癥、免疫抑制療法后、淋巴系統(tǒng)腫瘤、腎病綜合征及代謝謝性疾病等。,(四）免疫球蛋白E,為血清中最少的一種Ig,是一種親細(xì)胞性抗體，是介導(dǎo)I型變態(tài)反應(yīng)的抗體，與變態(tài)反應(yīng)、寄生蟲感染及皮膚過敏等有關(guān)。參考區(qū)間：成人血清IgE:0.1

7、～0.9mg/L。,IgE臨床意義,1.生理性變化嬰兒臍血水平很低，出生后逐漸升高，12歲達(dá)成人水平；2.病理性變化（1）增高：見于IgE型MM、重鏈病、肝臟病、結(jié)節(jié)病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、特異性皮炎、過敏性哮喘、過敏性鼻炎、蕁麻疹、嗜酸性粒細(xì)胞增多癥、皰疹樣皮炎、寄生蟲感染、支氣管肺曲菌病等疾病。,,（2）降低：見于先天性或獲得性丙種球蛋白缺乏癥、惡性腫瘤、長期用免疫抑制劑和共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥等。,（五）M蛋白,M蛋白或稱單克隆免

8、疫球蛋白，B細(xì)胞增殖產(chǎn)生、具有相同結(jié)構(gòu)和電泳遷移率、是免疫球蛋白分子或分子片段。參考值：陰性,M蛋白臨床意義,1.多發(fā)性骨髓瘤；2.巨球蛋白血癥；3.重鏈??；4.輕鏈?。?.半分子?。?.惡性淋巴瘤；7.良性M蛋白血癥；,二、補(bǔ)體系統(tǒng),補(bǔ)體是存在于人和脊椎動物血清及組織液中的一組有酶活性的糖蛋白，加上其調(diào)節(jié)因子和相關(guān)膜蛋白共同組成一個補(bǔ)體系統(tǒng)。參與抗感染及免疫調(diào)節(jié)，介導(dǎo)病理性反應(yīng)。,（一）補(bǔ)體C3,補(bǔ)體C3是一

9、種由肝臟合成的β2球蛋白，由α和β兩條多肽鏈組成。含量最多；是經(jīng)典途徑和旁路途徑的關(guān)鍵物質(zhì)；是急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。參考區(qū)間：成人C3: 0.8～1.5g/L。,C3臨床意義,1.生理性變化出生后逐漸增加，12歲左右達(dá)成人水平；2.病理性變化（1）增高：常見于一些急性時(shí)相反應(yīng)，如急性炎癥、傳染病早期、腫瘤、排異反應(yīng)、急性組織損傷。,,（2）減低：見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活動期、大多數(shù)腎小球腎炎、慢性活動性肝炎、慢性肝

10、病、肝硬化、肝壞死、先天性補(bǔ)體缺乏等。,（二）補(bǔ)體C4,補(bǔ)體C4是一種多功能β1球蛋白。補(bǔ)體活化；促進(jìn)吞噬；防止免疫復(fù)合物沉著；中和病毒。參考區(qū)間：成人C4:0.20 ～0.60g/L。,C4臨床意義,1.生理性變化出生后逐漸增加，12歲左右達(dá)成人水平；2.病理性變化（1）增高：見于各種傳染病、急性炎癥和組織損傷等；（2）降低：見于自身免疫性肝炎、狼瘡性腎炎、SLE、1型糖尿病、胰腺癌、多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、

11、IgA性腎病、遺傳性IgA缺乏癥。,教學(xué)內(nèi)容,第一節(jié)、體液免疫檢測第二節(jié)、細(xì)胞免疫檢測第三節(jié)、腫瘤標(biāo)志物檢測第四節(jié)、自身抗體的檢測第五節(jié)、感染免疫的檢測第六節(jié)、移植免疫的檢測第七節(jié)、其他免疫檢測,第二節(jié) 細(xì)胞免疫檢測,一、T細(xì)胞亞群的檢測 （一）T細(xì)胞花結(jié)形成試驗(yàn)； （二）T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)； （三）T細(xì)胞分化抗原測定。二、B細(xì)胞分化抗原檢測三、自然殺傷細(xì)胞免疫檢測四、細(xì)胞因子檢測,教學(xué)內(nèi)容,第一節(jié)、體液免疫檢測

12、第二節(jié)、細(xì)胞免疫檢測第三節(jié)、腫瘤標(biāo)志物檢測第四節(jié)、自身抗體的檢測第五節(jié)、感染免疫的檢測第六節(jié)、移植免疫的檢測第七節(jié)、其他免疫檢測,第三節(jié) 腫瘤標(biāo)志物檢測,腫瘤標(biāo)志物是由腫瘤細(xì)胞本身合成、釋放，或是機(jī)體對腫瘤細(xì)胞反應(yīng)而產(chǎn)生或升高的一類物質(zhì)。存在于血液、細(xì)胞、組織或體液中；反映腫瘤的存在和生長；對腫瘤的診斷、療效和復(fù)發(fā)的監(jiān)測、預(yù)后的判斷有一定價(jià)值。包括：蛋白質(zhì)類、糖類和酶類。,一、蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物的檢測,（一）甲胎蛋白

13、測定甲胎蛋白（AFP)是在胎兒早期由肝臟和卵黃囊合成的一種血清糖蛋白，出生后，AFP的合成很快受到抑制。當(dāng)肝細(xì)胞或生殖腺胚胎細(xì)胞組織發(fā)生惡性病變時(shí)，有關(guān)基因重新被激活，使原來已喪失合成AFP能力的細(xì)胞又重新開始合成。,參考區(qū)間：<25μg/L(RIA、CLIA、ELISA）,AFP臨床意義1.原發(fā)性肝細(xì)胞癌時(shí)患者血清AFP增高，陽性率為67.8%～74.4%。約50%的患者AFP>300μg/L,但約有18%的原發(fā)性肝

14、癌患者AFP不高。2.生殖腺胚胎腫瘤（睪丸癌、卵巢癌、畸胎癌等）、胃癌或胰腺癌時(shí)血中AFP含量也可升高。,,3.病毒性肝炎、肝硬化時(shí)AFP有不同程度的升高，通常AFP<300μg/L。4.妊娠3～4個月，孕婦AFP開始升高，7～8個月達(dá)高峰，但多低于400μg/L，分娩后3周恢復(fù)正常。胎兒神經(jīng)管畸形、雙胎、先兆流產(chǎn)等均會使孕婦血液和羊水中AFP升高。,（二）癌胚抗原測定,癌胚抗原（CEA)是一種富含多糖的蛋白復(fù)合物。早期胎兒的

15、胃腸道及某些組織均有合成CEA的能力，但6個月后含量逐漸降低，出生后含量極低。廣譜性腫瘤標(biāo)志物；臟器特異性低；可用于：輔助惡性腫瘤的診斷；判斷預(yù)后；監(jiān)測療效和腫瘤復(fù)發(fā)等,參考區(qū)間：<5μg/L(RIA、CLIA、ELISA）,臨床意義1.CEA升高 主要見于胰腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等患者；2.動態(tài)觀察 一般病情好轉(zhuǎn)時(shí)，CEA濃度下降，病性加重時(shí)可升高；,,3.結(jié)腸炎、胰腺炎、肝臟疾病、肺氣腫及

16、支氣管哮喘等也常見CEA輕度升高；4. 96%～97%非吸煙健康人血清CEA濃度 2.5μg/L,少數(shù)人> 5.0μg/L。,（三）其它蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物的檢測,1.組織多肽抗原測定（TPA)-----惡性腫瘤70%；2.前列腺特異抗原測定(PSA)---前列腺癌60～90%；3.鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原測定----肺鱗狀細(xì)胞癌、食管癌、83%的宮頸癌。,二、糖脂腫瘤標(biāo)志物檢測,（一）糖鏈抗原199測定糖鏈抗原199（CA199

17、)是一種糖蛋白，屬于唾液酸化Lewis血型抗原。正常人唾液腺、前列腺、胰腺、乳腺、胃、膽管、膽囊、支氣管的上皮細(xì)胞存在微量CA199。參考區(qū)間：<3.7萬U/L(RIA、CLIA、ELISA）3.7萬U/L=37U/mL,CA199臨床意義,胰腺癌、肝膽和胃腸道疾病時(shí)可明顯升高。1.目前認(rèn)為，CA199是胰腺癌的首選腫瘤標(biāo)志物，胰腺癌早期，當(dāng)特異性為95%時(shí)，敏感性可達(dá)80%～90%，若與CEA同時(shí)測定，敏感性還可進(jìn)一步提

18、高。2.約有5% ～10%的人不表達(dá)Lewis類抗原，因此部分胰腺癌患者CA199的血清濃度不升高；,,3.診斷膽囊癌和膽管癌的陽性率為85%左右，胃癌、結(jié)腸癌為40%，直腸癌為30%～50%；但無早期診斷價(jià)值，對早期患者的敏感度僅為30%。4.連續(xù)檢測對病情進(jìn)展、手術(shù)療效、預(yù)后估計(jì)及復(fù)發(fā)診斷有重要價(jià)值；5.急性胰腺炎、膽法淤積型膽管炎、膽石癥、急性肝炎、肝硬化等，血清CA199也可出現(xiàn)不同程度的升高；6.若結(jié)合CEA檢測，對胃

19、癌診斷符合率可達(dá)85%。,（二）癌抗原125測定,癌抗原125（CA125)為一種糖蛋白性腫瘤相關(guān)抗原，存在于上皮性卵巢癌組織及患者的血清中，在胎兒體腔上皮分泌物及羊水中以及成人的輸卵管、子宮和宮頸內(nèi)膜也可發(fā)現(xiàn)CA125。參考區(qū)間：<3.5萬U/L(RIA、CLIA、ELISA）3.5萬U/L=35U/mL,CA125臨床意義,1.CA125存在于卵巢組織細(xì)胞和漿液性腺癌組織中，不存在于黏液型卵巢癌中。卵巢上皮癌患者的CA1

20、25濃度可明顯升高，早期診斷和復(fù)發(fā)診斷的敏感性可達(dá)50～90%，故對診斷卵巢癌有較大臨床價(jià)值，尤其對觀察治療效果和判斷復(fù)發(fā)較為靈敏。2.盆腔腫瘤的鑒別。CA125可用于鑒別卵巢包塊，特別適用于絕經(jīng)后婦女。,,3. 宮頸癌、乳腺癌、胰腺癌、膽道癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等也有一定的陽性反應(yīng)；4. 3%～6%的良性卵巢瘤、子宮肌瘤患者血清CA125有時(shí)也會明顯升高，但多數(shù)不超過10萬U/L;5.肝硬化失代償期血清CA125明顯升高；

21、6.生理狀態(tài)下，如早孕期（3個月）CA125也可升高。,(三）其它糖脂腫瘤標(biāo)志物檢測,1.癌抗原50（CA50)---無器官特異性；2.癌抗原724（CA724)---胃腸道和卵巢腫瘤；3.癌抗原242（CA242)---胰腺癌、結(jié)腸癌、胃癌；4.癌抗原153（CA153)---30%～50%乳腺癌升高。,三、酶類腫瘤標(biāo)志物檢測,1.前列腺酸性磷酸酶（PAP)---前列腺癌; 2.神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定（NSE)---小細(xì)胞

22、肺癌、90%神經(jīng)母細(xì)胞瘤、溶血；3.α-L-巖藻糖苷酶（AFU)---81.2%原發(fā)性肝癌。,四、腫瘤標(biāo)志物的選擇,1.同一種腫瘤可含多種標(biāo)志物，而一種標(biāo)志物可出現(xiàn)在多種腫瘤。2.選擇特異標(biāo)志物或最佳組合有利于提高腫瘤診斷的陽性率。3.動態(tài)檢測有利于良性和惡性腫瘤的鑒別，也有利于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷。,教學(xué)內(nèi)容,第一節(jié)、體液免疫檢測第二節(jié)、細(xì)胞免疫檢測第三節(jié)、腫瘤標(biāo)志物檢測第四節(jié)、自身抗體的檢測第五節(jié)、感染免疫的檢測第六

23、節(jié)、移植免疫的檢測第七節(jié)、其他免疫檢測,第四節(jié) 自身抗體檢測,當(dāng)某些原因削弱或破壞機(jī)體的自身免疫耐受時(shí)，該機(jī)體的免疫系統(tǒng)就會對自身組織或成分產(chǎn)生免疫應(yīng)答稱為自身免疫反應(yīng)。由于自身免疫反應(yīng)產(chǎn)生的疾病稱為自身免疫疾病。自身抗體的檢測是診斷自身免疫病的重要依據(jù)。,一、類風(fēng)濕因子的檢測,類風(fēng)濕因子（RF)是變性IgG剌激機(jī)體產(chǎn)生的一種自身抗體，主要存在于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血清和關(guān)節(jié)液內(nèi)。主要為IgM型（乳膠凝集法）。檢測方法乳膠凝

24、集法、濁度分析法、ELISA法,RF臨床意義,類風(fēng)濕性疾病時(shí)，RF的陽性率可高達(dá)70%～90%，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的陽性率為70%。IgG與患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)外癥狀有關(guān)，IgM型與IgA型的效價(jià)與病情有關(guān)，與骨質(zhì)破壞有關(guān)。,RF臨床意義,其他自身免疫性疾病，如多發(fā)性皮肌炎、硬皮病、干燥綜合征、SLE、自身免疫性溶血、慢性活動性肝炎等也見RF陽性。某些感染性疾病，如傳染性單核細(xì)胞增多癥、結(jié)核病、感染性心內(nèi)膜炎等也多呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。故

25、本試驗(yàn)的特異性不高，應(yīng)予鑒別診斷。,二、抗核抗體檢測,（一）抗核抗體測定廣義的抗核抗體（ANA)的靶抗原不再局限于細(xì)胞核內(nèi)，而是擴(kuò)展到整個細(xì)胞成分，包括細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。經(jīng)典的ANA是指針對真核細(xì)胞核成分的自身抗體的總稱。ANA的類型主要是IgG，也有IgM、IgA。這種抗體無器官和種族的特異性。,,檢測方法為間接免疫熒光法（IIF)。以Hep-2細(xì)胞和鼠肝作抗原，固定于載玻片上，與受檢血清反應(yīng)。血清中抗體與抗原結(jié)合，再加入FITC標(biāo)

26、記的抗人Ig，在熒光顯微鏡下可觀察到ANA的熒光強(qiáng)度和熒光模型。,抗核抗體的熒光模型主要括：,1.核均質(zhì)型---與抗dsDNA、抗組蛋白和核小體抗體有關(guān)；2.核膜型---主要有抗核孔復(fù)合物和抗板層素兩種抗體；3.顆粒型---與抗UIRNP、抗Sm、抗SSA、抗SSB等抗體有關(guān)；4.核點(diǎn)型（1）少核點(diǎn)型---即p80盤曲蛋白抗體；（2）多核點(diǎn)型---即sp100抗體。,,5.著絲點(diǎn)型---與抗著絲點(diǎn)抗體有關(guān)；6.核仁型---與

27、針對核糖體、U3-RNP、RNA聚合酶的抗體、抗Sel-70抗體、PM-Sel抗體、抗原纖維蛋白抗抗體有關(guān)。,（二）可提取性核抗原抗體譜測定,可提取的核抗原（ENA)由多種相對分子質(zhì)量不同的多肽構(gòu)成，即雙鏈DNA、Sm、核糖體、Sel-70、Jo-1、SSB、SSA和RNP等。利用免疫印跡試驗(yàn)可以對這些抗原的自身（抗ENA)抗體進(jìn)行檢測，用來反映某些自身免疫病的狀況。,ANA篩查: 間接免疫熒光法（IIFT）,抗原譜完整 （細(xì)胞核、細(xì)

28、胞漿） 檢測ANA的金標(biāo)準(zhǔn)，具有很高的敏感性和特異性 基質(zhì)組合: HEp-2細(xì)胞+靈長類肝 HEp-2 細(xì)胞包含大約100 至150 種自身抗 原。,HEp-2細(xì)胞: 篩查不同的自身抗體,均質(zhì)型,核點(diǎn)型,著絲點(diǎn)型,核仁型,抗dsDNA抗體：核均質(zhì)型,HEp-2細(xì)胞,猴肝,ANA譜(確認(rèn)）： 最多18種抗原,（三）抗DNA抗體測定,抗DNA分為抗雙鏈DNA（dsDNA)抗體、抗單鏈DNA(ssDNA)和抗ZDNA抗體?？筪s

29、DNA抗體的靶抗原是細(xì)胞核中DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，它的檢測有臨床重要性。檢測抗dsDNA抗體最特異和最敏感的方法是用馬疫錐蟲或綠蠅短膜蟲作為抗原基質(zhì)進(jìn)行間接免疫熒光測定。,,結(jié)果判斷：短膜蟲動基體均質(zhì)性著色，核漿呈弱均質(zhì)性著色為陽性。,HEp-2細(xì)胞,綠蠅短膜蟲,臨床意義,1.抗dsDNA抗體陽性 見于活動期SLE，陽性率為70%～90%。本試驗(yàn)特異性較高，但敏感性較低。2.抗ssDNA抗體陽性 見于SLE

30、（陽性率70%～95%）,尤其是合并有狼瘡性腎炎。,（四）抗胞質(zhì)抗體測定,1.抗線粒體抗體（AMA)測定抗線料體抗體是一種針對細(xì)胞質(zhì)中線料體內(nèi)膜和外膜蛋白成分的自身抗體，無器官和種屬特異性，該抗體主要是IgG.結(jié)果判定 Hep-2細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)泥沙樣粒型著染。,AMA臨床意義,許多肝臟疾病時(shí)可檢出AMA。其陽性率在原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC)無癥狀者為90.5%。有癥狀患者為92.5%；慢性活動性肝炎可高達(dá)90%以上；但是，膽總管阻

31、塞和肝外膽管阻塞為陰性。AMA可作為原發(fā)性膽汁性肝硬化和肝外膽道阻塞性肝硬化癥的鑒別診斷。,,2.抗肌動蛋白抗體檢測該抗體有幾種不同的抗原包括肌動蛋白、非肌球蛋白的重鏈、原肌球蛋白。結(jié)果判斷：Hep-2細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有密集纖維狀著染。,HEp-2細(xì)胞,猴肝,臨床意義,抗肌動蛋白抗體見于各種慢性肝臟疾病、肝硬化、原發(fā)性膽汁性肝硬化、Ⅰ型自身免疫性肝炎，也見于重癥肌無力、克羅恩病、長期血液透析。,,3.抗Jo-1抗體檢測靶抗原是組氨酰

32、-tRNA合成酶。其生理功能是催化tRNA接上組氨酸。Jo-1抗體主要是IgG1型抗體。結(jié)果判定： Hep-2細(xì)胞胞質(zhì)有斑點(diǎn)狀熒光顆粒，細(xì)胞核的核漿也顯示斑點(diǎn)狀顆粒。,HEp-2細(xì)胞,猴肝,臨床意義,Jo-1抗體對肌炎伴間質(zhì)性肺纖維化有高度特異性，抗體的效價(jià)與疾病的活動性相關(guān)。多發(fā)性肌炎、Jo-1抗體陽性及HLA-DR/-DRw52標(biāo)志稱為“Jo-1綜合征”。,三、抗組織細(xì)胞抗體檢測,（一）抗腎小球基底膜抗體測定腎小球基底膜有內(nèi)、外

33、透明層及中間致密層構(gòu)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，它是由Ⅳ型膠原、層黏連蛋白、纖維黏連蛋白和蛋白多糖組成。,結(jié)果判斷,抗GBM抗體陽性時(shí)，有3種熒光圖形：在所有腎小球基底膜處顯示非常尖銳、線狀或花瓣?duì)钪?；顆粒狀著染；斑點(diǎn)狀著染。,臨床意義,抗腎小球基底膜抗體是抗基底膜抗體型腎小球腎炎特異性抗體，包括Good-Pasture綜合、急進(jìn)型腎小球腎炎及免疫復(fù)合物型腎小球腎炎。,（二）抗胃壁細(xì)胞抗體測定,抗胃壁細(xì)胞抗體（PCA)是器官及細(xì)胞特異性自身抗體，其

34、靶抗原是分子量為94000的ATP酶、胃壁細(xì)胞的質(zhì)子泵和主細(xì)胞分子量41000的胃蛋白酶原。結(jié)果判斷：小鼠胃壁細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)呈細(xì)小顆粒狀著染。,臨床意義,惡性貧血患者90%為PCA陽性。慢性萎縮性胃炎患者100%為PCA陽性。,（三）抗甲狀腺抗體測定,1.抗甲狀腺球蛋白抗體甲狀腺球蛋白（TG)是由甲狀腺濾泡細(xì)胞合成的一種糖蛋白，抗甲狀腺球蛋白主要是Ig G。結(jié)果判定：人或靈長類動物的甲狀腺冷凍切片甲狀腺腺泡內(nèi)呈細(xì)小波浪狀著染。,臨床意

35、義,90%～95%橋本甲狀腺炎、52%～58%甲狀腺功能亢進(jìn)和35%甲狀腺癌的患者可出現(xiàn)抗TG陽性。,2.抗甲狀腺微粒體抗體,是針對甲狀腺微粒體的一種抗體。參考值人或靈長類動物的甲狀腺冷凍切片甲狀腺泡上皮細(xì)胞質(zhì)斑點(diǎn)狀著染、核陰性。,臨床意義,抗TM陽性檢出率：橋本甲狀腺炎為50%～100%；甲狀腺功能低癥為88.9%；甲狀腺腫瘤為13.1%；亞急性甲狀腺炎為17.2～25%；SLE為15.4～44.7%；其他風(fēng)濕病為30%。正常人

36、也有8.4%的陽性率。,（四）抗平滑肌抗體測定,抗平滑肌抗體（ASMA)主要為IgG類，也有IgM類。無器官和種屬特異性，一般認(rèn)為不結(jié)合補(bǔ)體。結(jié)果判定：鼠胃平滑肌呈均質(zhì)型著染，腎小血管陽性。,臨床意義,抗平滑肌抗體主要見于自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁肝硬化、急性病毒性肝炎。,（五）抗心肌抗體測定,抗心肌抗體的自身抗原包括線粒體內(nèi)膜上的腺苷酸轉(zhuǎn)移蛋白、心肌肌質(zhì)蛋白、原肌球蛋白和熱休克蛋白。常用間接免疫熒光法檢測。結(jié)果判定：心肌細(xì)胞內(nèi)

37、與肌纖維方向垂直的橫向帶狀著染。,臨床意義,心肌炎、心肌衰竭、風(fēng)濕熱、重癥肌無力、心疾病和心臟手術(shù)后患者均可檢測到抗心肌抗體。,（六）肝臟相關(guān)自身抗體測定,1.抗肝、腎微粒體抗體檢測 抗肝、腎微粒體抗體（LKM)可同時(shí)與肝和腎微粒體起反應(yīng)。2.抗可溶性肝抗原抗體檢測 抗可溶性肝抗原抗體（SLA)相應(yīng)的靶抗原是一種存在于肝細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的蛋白質(zhì)細(xì)胞角蛋白。這種抗原既沒有特異性，也沒有器官特異性。,四、其他抗體檢測,（一）抗

38、中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體測定抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體（ANCA)是血管炎患者的自身抗體，是診斷血管炎的一種特異性指標(biāo)。（二）抗心磷脂抗體測定抗心磷脂抗體（ACA)是一組針對各種帶負(fù)電荷磷脂的自身抗體。在SLE患者中陽性檢出率高，達(dá)70%～80%。（三）抗乙酰膽堿受體抗體（AchRA)測定重癥肌無力大約90%的患者陽性。,教學(xué)內(nèi)容,第一節(jié)、體液免疫檢測第二節(jié)、細(xì)胞免疫檢測第三節(jié)、腫瘤標(biāo)志物檢測第四節(jié)、自身抗體的檢測第五節(jié)、感染免疫

39、的檢測第六節(jié)、移植免疫的檢測第七節(jié)、其他免疫檢測,第五節(jié) 感染免疫檢測,一、細(xì)菌感染免疫檢測（一）血清抗鏈球菌溶血素“Ｏ”試驗(yàn)溶血素“Ｏ”是A群溶血性鏈球菌產(chǎn)生的具有溶血活性的代謝產(chǎn)物，相應(yīng)抗體稱抗鏈球菌溶血素“Ｏ”(ASＯ)。參考值：陰性（LAT),ASＯ臨床意義,陽性表示患者近期內(nèi)有A群溶血性鏈球菌感染，常見于活動性風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性心臟病、急性腎小球腎炎、急性上呼吸道感染、皮膚和軟組織的感染等。,(二）傷寒

40、和副傷寒沙門菌免疫測定,傷寒沙門菌感染后，菌體“Ｏ”抗原和鞭毛“H”抗原可剌激人體產(chǎn)生相應(yīng)抗體；副傷寒桿菌分甲、乙和丙三型各自的菌體抗原和鞭毛抗原也可產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。,,1.肥達(dá)反應(yīng)（WR) 是利用傷寒和副傷寒沙門菌菌液為抗原，檢測患者血清中有無相應(yīng)抗體的一種凝集試驗(yàn)。參考值：直接凝集法：傷寒H<1:160; Ｏ<1:80; 副傷寒甲、乙和丙<1:80。,ASＯ臨床意義,單份血清抗體效價(jià)Ｏ

41、>1:80及H>1：160者有診斷意義；若動態(tài)觀察，持續(xù)超過參考值或較原效價(jià)升高4倍以上更有價(jià)值。（1）Ｏ、H均升高：提示傷寒可能性大，多數(shù)患者在病程第2周出現(xiàn)陽性；（2）Ｏ不高、H升高，可能是預(yù)防接種或是非特異性回憶反應(yīng)；（3）Ｏ升高、H不高，則可能是感染早期或與傷寒沙門菌Ｏ抗原有交叉反應(yīng)的其他沙門菌感染。,,2.傷寒和副傷寒沙門菌抗體IgM測定參考值：陰性或滴度<1:20(ELISA)臨床意義IgM抗

42、體于發(fā)病后1周即出現(xiàn)升高，有早期診斷價(jià)值。,傷寒和副傷寒沙門菌可溶性抗原測定,參考值陰性（乳膠凝集法）。臨床意義對確診傷寒沙門菌感染有重要意義。,（三）流行性腦脊髓膜炎免疫學(xué)測定,參考值1.抗體測定： 陰性；2.抗原測定： 陰性。臨床意義腦膜炎奈瑟菌抗原的測定可用于流行性腦脊髓膜炎的確診。感染1周后，抗體逐漸增高，2個月后逐漸下降。,二、病毒感染免疫檢測,（一）TORCH試驗(yàn)TORCH試驗(yàn)為婦產(chǎn)科產(chǎn)前的常規(guī)檢查項(xiàng)

43、目。包括：弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的病原抗體檢測。對新生兒的致畸致殘風(fēng)險(xiǎn)評估有一定的臨床意義。,,（二）漢坦病毒抗體IgM測定腎綜合征出血熱（HFRS)的病原體是漢坦病毒。（三）流行性乙型腦炎病毒抗體IgM測定（四）柯薩奇病毒抗體和RNA測定（五）輪狀病毒抗體和RNA測定（六）嗜異性凝集試驗(yàn)及吸收試驗(yàn)（EB病毒感染2周后抗體效價(jià)達(dá)高峰）（七）嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS)病毒抗體及RNA測定,

44、三、寄生蟲感染免疫檢測,（一）日本血吸蟲抗體測定（二）囊蟲抗體測定（三）瘧原蟲抗體和抗原測定,四、性傳播疾病免疫檢測,（一）衣原體抗體測定衣原體包括沙眼衣原體、鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體3種，其中沙眼衣原體（CT)是引起性傳播疾病常見的病原體之一。參考值IgM效價(jià)≤1:32，IgG效價(jià)≤1:512(IFA),臨床意義,IgM陽性提示近期有CT感染，有利于早期診斷。IgG在發(fā)病后6～8周出現(xiàn)，持續(xù)時(shí)間較長；提示曾有過CT感染。,

45、,（二）支原體的血清學(xué)測定對人致病的主要有肺炎支原體、解脲支原體、人型支原體和生殖道支原體。（三）梅毒螺旋體抗體測定梅毒螺旋體侵入人體后，在血清中除可出現(xiàn)特異性抗體外，還可出現(xiàn)非特異性抗體（反應(yīng)素）。,,參考值1.非特異性抗體的定性試驗(yàn)（1）快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR)陰性; (2）不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR)陰性； (3)性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL)陰性。2.梅毒螺旋體的特異性抗體的確診試驗(yàn)（1）梅毒螺旋體血凝

46、試驗(yàn)（TPHA)陰性；（2）熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS)陰性。,,（四）淋球菌血清學(xué)測定及DNA測定 協(xié)同凝集試驗(yàn)；PCR定量（五）人類免疫缺陷病毒抗體及RNA測定 人類免疫病毒（HIV)是艾滋病（AIDS)的病原體。參考值：1.篩選試驗(yàn) ELISA法和快速蛋白印跡法均為陰性。2.確診試驗(yàn) 蛋白印跡試驗(yàn)和RT-PCR法均陰性。,臨床意義,篩選試驗(yàn)靈敏度高，但特異性不高，故有假陽性；所以篩選試驗(yàn)陽

47、性時(shí)應(yīng)用確診試驗(yàn)證實(shí)。確診試驗(yàn)陽性，特別是RT-PCR法檢測HIV-RNA陽性，對肯定診斷和早期診斷頗有價(jià)值。,教學(xué)內(nèi)容,第一節(jié)、體液免疫檢測第二節(jié)、細(xì)胞免疫檢測第三節(jié)、腫瘤標(biāo)志物檢測第四節(jié)、自身抗體的檢測第五節(jié)、感染免疫的檢測第六節(jié)、移植免疫的檢測第七節(jié)、其他免疫檢測,第六節(jié) 移植免疫檢測,在組織移植或器官移植中，受者接受供者的移植物后，受者的免疫系統(tǒng)與供者的移植物相互作用而發(fā)生的免疫應(yīng)答，稱為移植免疫。研究移植免疫

48、的主要目的是了解移植排斥反應(yīng)發(fā)生的機(jī)制，以預(yù)防和控制排斥反應(yīng)的發(fā)生，使移植物能在受體內(nèi)長期存活。,一、移植類型,1.自體移植；2.同系移植；3.同種（異體）移植；4.異種移植。,二、排斥反應(yīng),1.靶抗原移植能否成功，在很大程度上取決于排斥反應(yīng)，而排斥反應(yīng)的本質(zhì)就是T細(xì)胞介導(dǎo)的、針對移植抗原的免疫應(yīng)答。 排斥反應(yīng)的靶抗原即為組織相容性抗原。（1）主要組織相容性抗原；（2）次要組織相容性抗原；（3）其他參與排斥反應(yīng)發(fā)生的抗原

49、。,,2.排斥反應(yīng)的類型（1）宿主抗移植物反應(yīng)；1）急性排斥反應(yīng)---最初幾周2）超急性排斥反應(yīng)---數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)內(nèi)發(fā)生3）慢性排斥反應(yīng)---數(shù)周、數(shù)月至數(shù)年后發(fā)生4）加速排斥反應(yīng)---二次移植,,（2）移植物抗宿主反應(yīng)1)宿主免疫系統(tǒng)缺乏或喪失排斥移植物的功能；2）移植物中含有足量的能識別宿主組織相容性抗原的免疫活性細(xì)胞3）宿主具有移植物所缺少的組織相容性抗原。,,3.排斥反應(yīng)的效應(yīng)機(jī)制（1）CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)的遲

50、發(fā)性超敏反應(yīng)；（2）CD8+T細(xì)胞直接殺傷移植物的內(nèi)皮細(xì)胞和實(shí)質(zhì)細(xì)胞；（3）抗體激活補(bǔ)體損傷移植物血管；（4）慢性排斥。,三、移植免疫檢測,1.ABO血型配型；2.HLA配型；3.淋巴細(xì)胞毒交叉配合試驗(yàn)。,教學(xué)內(nèi)容,第一節(jié)、體液免疫檢測第二節(jié)、細(xì)胞免疫檢測第三節(jié)、腫瘤標(biāo)志物檢測第四節(jié)、自身抗體的檢測第五節(jié)、感染免疫的檢測第六節(jié)、移植免疫的檢測第七節(jié)、其他免疫檢測,第七節(jié) 其他免疫檢測,一、循環(huán)免疫復(fù)合物檢驗(yàn)；二

51、、冷球蛋白檢測；三、C反應(yīng)蛋白檢測；四、特異性IgE檢測。,小結(jié),第一節(jié)、體液免疫檢測第二節(jié)、細(xì)胞免疫檢測第三節(jié)、腫瘤標(biāo)志物檢測第四節(jié)、自身抗體的檢測第五節(jié)、感染免疫的檢測第六節(jié)、移植免疫的檢測第七節(jié)、其他免疫檢測,思考,1.哪種免疫球蛋白可通過胎盤？2.SLE活動期特異性較高的檢測指標(biāo)是什么？3.胰腺癌首選的腫瘤標(biāo)志物是什么？4.ASO陽性表示最可能什么菌感染？,Thanks for your attention