蛋白酶抑制劑篩選模型

1、微生物來源HIV抑制劑,HIV 是AIDS的病原體自1981年第1例AIDS病例發(fā)現(xiàn)至今已有30余年，AIDS迅速在人類世界蔓延，嚴(yán)重威脅著人類的健康。根據(jù)2009年艾滋病流行報(bào)告, 全球大約已有6000萬人感染了HIV, 2500 萬人死于艾滋病相關(guān)疾病。2008年, 全球大約有3340萬HIV感染者, 270萬新發(fā)感染者, 200萬人死于艾滋病,,,抗HIV藥物：自1987年第一個(gè)抗HIV藥物齊多夫定用于臨床以來,目前已有六大類

2、、30余種藥物通過美國FDA認(rèn)證核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑（ NRTIs 14種）非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑（NNRTIs 3種）蛋白酶抑制劑（ PIs 11種）融合抑制劑（Fusion Inhibitors）進(jìn)入抑制劑（EIs）整合酶抑制劑（Integrase Inhibitors）,1995年，Ho D.D.和George M. Shaw關(guān)于HIV病毒動(dòng)力學(xué)的研究成果給抗病毒治療帶來了突破，高效聯(lián)合抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（

3、highly active anti-retrovival therapy，HAART）的臨床療效得到了肯定 聯(lián)合方案： NRTIs為主干，一般2種NRTIs聯(lián)合1種NNRTIs或1種PIs制劑,輝瑞公司研制的第一個(gè)CCR5抑制劑-馬拉維若（maraviroc）于2007年下半年在美國上市，2010十大令人惋惜的Ⅲ期失敗新藥：默沙東的CCR5抑制劑Vicriviroc默克公司的整合酶抑制劑raltegravir于2007年10月獲準(zhǔn)

4、上市，另一整合酶抑制劑Gilead生物科學(xué)公司的Elvitegravir Ⅲ期臨床試驗(yàn)顯示： 與raltegravir療效相當(dāng)新一代NNRTI類新藥：Etravirine（依曲韋林片 、 TMC-278 ）已于2008年初FDA批準(zhǔn)上市、對(duì)現(xiàn)有NNRTI耐藥的病人中具有顯著的抗病毒效力,,1、HIV吸附或融合抑制劑：HIV侵入T淋巴細(xì)胞的起始階段是HIV吸附于細(xì)胞膜表面，是由于HIV膜蛋白gp120與T細(xì)胞表面受體CD4的高度特異性

5、結(jié)合。,霉酚酸(MPA)從Penicillium sp. FO28017培養(yǎng)液中分離得到的小分子物質(zhì), 是一種次黃嘌呤核苷酸脫氫酶( IMPDH ) 抑制劑和抗H IV抑制劑蛋白印跡分析MPA能減少H IV的gp120表達(dá)從而抑制H IV的感染，其作用機(jī)制主要是通過減少H IV表面膜蛋白gp 120的表達(dá)來抑制合胞體形成。,Boyd等發(fā)現(xiàn)從藍(lán)藻菌中提取的蛋白質(zhì)藍(lán)藻菌病毒素一N(CV-N)具有強(qiáng)效廣譜的抗HIV病毒活性：與病毒表面外殼

6、糖蛋白gpl20發(fā)生不可逆的結(jié)合作用，形成CV-N-gpl20復(fù)合物Siamycin類化合物： SiamycinⅠ（BMY229304)、 SiamycinII（RP71955, BMY229303)和NP206(FR901724)Actinohivin ：放射菌株K97-003產(chǎn)生，114個(gè)AA的蛋白，為融合抑制劑,吸附或融合抑制劑篩選模型,將純化的CD4或HIV一1 gpl20包被至ELISA板上，在不同濃度藥物存在的情況下，檢

7、測另一種蛋白的結(jié)合量特異識(shí)別HIVgp41六股a一螺旋束核心結(jié)構(gòu)空間構(gòu)型的單克隆抗體，以該抗體建立夾心ELISA方法,2 、抑制輔受體相互作用趨化因子CCR5，為G蛋白偶聯(lián)因子超家族（GPCR）成員的細(xì)胞膜蛋白，是HIV-1入侵機(jī)體細(xì)胞的主要輔助受體之一,7個(gè)微生物代謝產(chǎn)物類CCR5 抑制劑,3、蛋白酶抑制劑：HIV蛋白酶由pol基因編碼，功能為切割聚合蛋白gag基因編碼聚合蛋白→基質(zhì)蛋白（p17）、核衣殼蛋白（p7、p9）、衣

8、殼蛋白（p24）,(1) cytochalasin A和L-696,474L-696,474從真菌Hypoxylon fragiforme中分離到的一種松胞菌素是HIV-1蛋白酶的競爭性抑制劑，其活性與時(shí)間，底物濃度，酶濃度呈線性關(guān)系，其抑制作用是快速型且具選擇性該化合物的結(jié)構(gòu)與已發(fā)現(xiàn)的cytochalasin A很相似，cytochalasin A也能抑制HIV-1蛋白酶，兩者可能通過與HIV-1蛋白酶二聚體結(jié)合發(fā)揮作用,（2）

9、resistomycin和tetronic acid 同系物 Roggo等從Actinomycete sp.DSM7357中分離出具有抗HIV活性的6種tetronic acid同系物和resistomycin。（3）．Mer-N5075 本品的產(chǎn)生菌是Streptomyce chromofuscus Mer-N5075，它也是一種HIV-1蛋白酶抑制（4）．RPI-856 A,B,C和D是由Streptomyce sp

10、.AL-322產(chǎn)生。對(duì)其蛋白酶的抑制具有選擇性：能抑制HIV-1和HTLV-1蛋白酶，而對(duì)其它蛋白酶無或僅有較弱的抑制作用,蛋白酶抑制劑篩選模型,HIV-1蛋白酶與短肽鏈（含Tyr-Pro鍵）反應(yīng)通過對(duì)肽鍵的測定推算出HIV-1蛋白酶的活力以此為對(duì)照，在系統(tǒng)中加入待測樣品,4、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑：逆轉(zhuǎn)錄酶由pol基因編碼，功能為轉(zhuǎn)錄和復(fù)制病毒基因組逆轉(zhuǎn)錄酶是艾滋病選擇性化療的首選靶位之一quinoxapatin A和quinox