2-4動物微生物--細菌病的實驗室診斷方法

1、細菌病的實驗室診斷方法,學習目標,知識目標掌握細菌病實驗室診斷的方法理解利用各種診斷方法的進行鑒定的意義能力目標具備結合臨床病例設計實驗室診斷方案的能力,主要內容,病料的采集、保存和運送細菌的形態(tài)學檢查細菌的分離培養(yǎng)生化試驗動物接種血清學試驗分子生物學技術,重點與難點,重點細菌病實驗室診斷的方法難點設計實驗方案,細菌病的實驗室診斷,初診：根據(jù)流行病學、癥狀、病變等方面的疾病特征，做出初步診斷,通過實驗室診斷，確

2、定病原是否是細菌以及病原菌的類型,,實驗室診斷是在臨床診斷的基礎上進行的,細菌病實驗室診斷方法,病料的采集、保存和運送細菌的形態(tài)學檢查細菌的分離培養(yǎng)生化試驗動物接種血清學試驗分子生物學技術,病料的采集、保存和運送,病料采集遵循的原則防止污染 無菌采樣 適時采樣 適當部位病料采集方法（不同病料不同方法）實質臟器 液體材料 其他病料病料的保存和送檢,防止污染,動物剖檢個人防護和消毒動物尸體處

3、理廢棄物處理,動物剖檢,剖檢場所：應選擇便于消毒、不滲水的解剖地點，最好有專門的剖檢場所和剖檢臺 。剖檢前，動物尸體應浸泡消毒。,,個人防護和消毒,做好個人防護：剖檢過程中，注意個人防護。剖檢后的器械浸泡消毒后洗刷。,動物尸體焚燒爐,深埋（投入消毒藥）,動物尸體處理,焚燒或深埋：剖檢后動物尸體和病料焚燒滅菌或消毒深埋。,處理不當會引起人和動物疫病的散播,動物或人的傳染病,,廢棄物處理,無菌采樣,目的 防止病料被污染方法

4、所用器械和器皿必須滅菌點燃酒精燈注意無菌操作,適時采樣,細菌豐富增殖時期、病料應該新鮮：取瀕死動物或剛死亡的動物。死亡動物采集病料夏天不宜遲于6～8h，冬天不遲于24h。,適當部位,選擇病料的部位可采用兩個原則第一原則：根據(jù)疾病的類型和表現(xiàn)采集病變最典型的部位第二原則：一般采集正常無菌的部位,典型采樣,實質臟器的采集,剖開體腔后，立即采集，置于無菌容器內。污染或剖開過久的被檢器官：先燒烙表面，然后在燒烙的深部取一塊實質臟器

5、，放在滅菌容器內。如有細菌檢驗條件，可在剖檢后直接做病料的觸片染色和細菌的分離培養(yǎng)。,液體病料的采集,膿汁、胸水一般用滅菌的棉棒或吸管吸取放入試管內，塞好棉塞送檢。血液可無菌操作從靜脈或心臟采血，然后加抗凝劑（每1ml血液加3.8%枸櫞酸鈉0.1ml）。若需分離血清，則采血后放在滅菌的容器中，擺成斜面，待血液凝固析出血清后，再將血清吸出，置于另一滅菌試管中送檢。,其他病料的采集,皮膚要取有病變且?guī)в幸徊糠终Ｆつw的部位。被毛或羽

6、毛取病變明顯部位，并帶毛根放平皿。胎兒可將流產胎兒送往實驗室，也可用吸管或注射器吸取胎兒胃內容物放入試管送檢。腸道及內容物需選擇病變最明顯的部分，將其中內容物去掉，用滅菌水輕輕沖洗后放平皿內。,細菌性病料的保存和送檢,低溫保存盡快送檢做好記錄畜主姓名、動物種類、地址、發(fā)病情況、欲檢部位及檢驗項目、采集時間等,細菌的形態(tài)學檢查,方法光學顯微鏡檢查電子顯微鏡檢查意義觀察病料中有無細菌以及細菌的形態(tài)、數(shù)量、分布、結構、種類等

7、，進行初步判斷,細菌的分離培養(yǎng),方法：用分區(qū)劃線法在合適培養(yǎng)基上培養(yǎng)意義看培養(yǎng)基中有無細菌生長推斷是否為細菌病依據(jù)菌落的特征判斷細菌種類用菌落中的細菌進一步作形態(tài)學鑒定可進一步作生化鑒定、血清學鑒定及動物試驗可進一步作藥敏試驗,分離培養(yǎng),通常選用適合目標菌生長的平板培養(yǎng)基對細菌進行分離培養(yǎng)。不同細菌的菌落大小、形態(tài)、色澤、表面特征、邊緣狀態(tài)、隆起度、透明度等特征不同。有的細菌在鮮血瓊脂平板上形成溶血環(huán)。 也可采用選擇培養(yǎng)

8、基或鑒別培養(yǎng)基，以起到抑制雜菌或快速鑒別的效果。比如腸道桿菌科可選擇麥康凱瓊脂、伊紅美藍瓊脂。,分區(qū)劃線法,不同細菌的菌落大小、形態(tài)、色澤、表面特征、邊緣狀態(tài)、隆起度、透明度等特征不同,不同細菌的菌落,溶血環(huán),有的細菌在鮮血培養(yǎng)基上有β-溶血現(xiàn)象,伊紅美藍培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落,細菌的生化試驗,進行生化試驗的細菌必須是純培養(yǎng)物。檢驗時，根據(jù)可疑細菌的生化特性選擇特定的一組生化試驗，將結果與標準進行對比，以確定病原菌的種類

9、。例：不同種沙門氏菌的生化鑒定,,雞白痢沙門氏菌,雞傷寒沙門氏菌,鼠傷寒沙門氏菌,不同種沙門氏菌的生化鑒定,意義將待檢細菌液接種到動物體內，觀察動物發(fā)病情況，進一步確認可疑細菌的致病作用和類型。接種對象本動物試驗動物接種途徑,動物接種,常用的動物接種途徑,血清學試驗,臨床診斷中，可用于細菌的血清分型、快速診斷或大群檢疫。用已知抗體檢測動物體內的病原菌用已知的病原菌抗原檢測動物血清中的抗體例：雞白痢的檢疫,,,,,,1、

10、加一滴抗原,2、加一滴雞的全血,3、將抗原和血液混勻,4、靜置2min,觀察結果,雞白痢檢疫—全血平板凝集試驗,,雞白痢檢疫結果,分子生物學方法,分子生物學技術對病原菌的快速診斷和不能人工培養(yǎng)的細菌的探索發(fā)揮巨大的作用。 PCR技術、核酸分子雜交技術等。,大腸桿菌病實驗室診斷方案,病料中細菌的形態(tài)學檢查,病料中細菌的分離培養(yǎng),18小時后,動物致病性試驗,涂片革蘭氏染色,生化試驗,H2S試驗,糖發(fā)酵試驗,MR試驗,10日齡小雞，皮下注