藥學(xué)本科分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

1、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目一：總RNA的提?。ū刈觯┮弧?shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：6學(xué)時(shí)二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)總RNA的提取和分析方法。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容利用勻漿裂解細(xì)胞，采用TRilzol試劑盒抽提RNA去除蛋白質(zhì)和DNA。四、實(shí)驗(yàn)要求學(xué)會(huì)提取基因組RNA的方法和操作過程提取RNA時(shí)，要特別注意防止RNase的污染，所用玻璃器皿均應(yīng)用0.1％的二乙基焦碳酸鹽(diethylpyrocarbonate，DEPC)處理。塑料器材均使用一次性用品，并高壓滅菌處理，必要時(shí)，也可

2、用0.1%DEPC處理。五、實(shí)驗(yàn)所需儀器設(shè)備與試劑儀器：移液器及吸頭，電泳儀臺(tái)式高速離心機(jī)恒溫水浴鍋微量移液槍等試劑：TRIzol試劑、氯仿、異丙醇、75%乙醇（DEPCH2O配制）、DEPCH2O六、實(shí)驗(yàn)原理TRIzol試劑適用于從細(xì)胞和組織中快速分離RNA。最大特點(diǎn)是可同時(shí)分離一個(gè)樣品的RNADNA蛋白質(zhì).TRIzol使樣品勻漿化，細(xì)14.去上清夜，加入2030uLDEPC水，55℃10min，以完全溶解RNA。15.70度保存提取

3、的總RNA。八、注意事項(xiàng)1RNA酶是一類生物活性非常穩(wěn)定的酶類，除了細(xì)胞內(nèi)源RNA酶外，外界環(huán)境中均存在RNA酶，所以操作時(shí)應(yīng)戴手套。2RNA提取用品準(zhǔn)備：1）普通的玻璃器皿：180℃烘干8小時(shí)（玻璃），研缽，小勺，試劑瓶若干個(gè)。2）一次性使用的塑料制品：槍頭、EP管等先用DEPC水處理然后高壓滅菌，烘干。3）用烘烤過的藥勺稱取試劑。4）用DEPC水配制試劑：0.1%DEPC水：37℃至少處理12小時(shí)，高壓滅菌15min。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:成功