腦膠質(zhì)瘤的表觀遺傳學(xué)研究：1.lrrc4在腦膠質(zhì)瘤中失活的表觀修飾的分子機制;2.腦膠質(zhì)瘤dna甲基化譜的初步構(gòu)建

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文腦膠質(zhì)瘤的表觀遺傳學(xué)研究：1.LRRC4在腦膠質(zhì)瘤中失活的表觀修飾的分子機制;2.腦膠質(zhì)瘤DNA甲基化譜的初步構(gòu)建姓名：張祖萍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：李桂源20091001博士學(xué)位論文 中文摘要制，我們開展了L R R C 4 基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制研究。采用高特異性的啟動子預(yù)測軟件P r o m o t e r l n s p e c t o r 和P r o m o t e r S c a

2、 n 對其啟動子進行了預(yù)測分析，同時采用C p G p l o t 軟件對L R R C 4 基因5 ’端調(diào)控區(qū)的C p G 島進行了分析，三者預(yù)測結(jié)果大部分重疊，綜合分析我們初步鎖定L R R C 4 基因啟動子區(qū)可能位于其翻譯起始位點上游2 1 5 1 b p 至1 0 1 b p 以內(nèi)，因此我們設(shè)計引物擴增L R R C 4 基因．2 4 7 5 A 1 0 1 的調(diào)控區(qū)片段，并構(gòu)建成熒光素酶報告載體p G L 3 —2 4 7

3、5 ／．1 0 1 。熒光素酶活性分析系統(tǒng)結(jié)果表明，p G L 3 —2 4 7 5 A 1 0 1 在C o s 7 和H e l a 細胞具有與p G L 3 ．c o n t r o l 幾乎同等活性，這一結(jié)果表明L R R C 4 基因．2 4 7 5 ／．1 0 1區(qū)域內(nèi)包含了L R R C 4 基因的啟動子片段。為了進一步定位L R R C 4基因的啟動子片段，以p G L 3 —2 4 7 5 ／．1 0 1 為模板，分別

4、在它的5 ’或3 ’端缺失部分序列，構(gòu)建了一系列缺失突變體熒光素酶的報告載體，并將它們分別轉(zhuǎn)染C o s 7 和H e l a 細胞中，發(fā)現(xiàn)．8 3 5 A 2 9 3 區(qū)域是L R R C 4基因發(fā)揮啟動子活性的必需序列，缺失這一區(qū)域L R R C 4 基因啟動子則喪失了全部的啟動活性。為了驗證該結(jié)果我們又構(gòu)建了p G L 3 ．8 3 5 ／．2 9 3 ／e G F P 報告載體，轉(zhuǎn)染C o s 7 和H e l a 細胞，發(fā)現(xiàn)L

5、 R R C 4基因的．8 3 5 ／- 2 9 3 區(qū)域能驅(qū)動e G F P 在C o s 7 和H e l a 細胞中的表達，從另一方面證明的一8 3 5 ／．2 9 3 區(qū)域的啟動活性?？傊?，通過以上研究我們成功地定位和克隆了L R R C 4 基因的啟動子。[ L R R C 4 基因啟動子在膠質(zhì)瘤中呈高甲基化狀態(tài)】生物信息學(xué)分析L R R C 4 基因的啟動子序列，發(fā)現(xiàn)該序列不含有T A T A 盒和C A A T 盒，G C