霉菌毒素的控制檢測(cè)方法以及解決方案

1、霉菌毒素的控制/檢測(cè)方法以及解決方案,控制飼料原料中霉菌毒素的辦法,農(nóng)作物的耕種:種植對(duì)霉菌有抵抗力的品種使用有效的昆蟲(chóng)控制方法維持好的灌溉系統(tǒng)實(shí)行良好的耕作, 農(nóng)作物輪換, 雜草控制收割時(shí):適當(dāng)?shù)氖崭顣r(shí)間迅速降低水份除去多余的雑質(zhì),收獲后及儲(chǔ)藏:保護(hù)儲(chǔ)藏的原料/產(chǎn)品不被水份, 昆蟲(chóng), 及其它環(huán)境因素的侵害保存原料/產(chǎn)品在干燥干凈的表面測(cè)試所有要使用的原料的霉菌毒素貯存桶及管路的定期清理先進(jìn)先出收獲后, 加工

2、, 制造:測(cè)試所有要使用的原料及成品的霉菌毒素監(jiān)控加工過(guò)程以維持高品質(zhì)的產(chǎn)品貯存桶及加工設(shè)備的定期清理依照GMP程序,,控制飼料原料中霉菌毒素的辦法,飼喂動(dòng)物:保存產(chǎn)品在干燥干凈的表面先進(jìn)先出貯存桶及飼喂系統(tǒng)的定期清理水槽的定期清理墊料,,控制飼料原料中霉菌毒素的辦法,,如何解決霉菌毒素的危害？,霉菌毒素的預(yù)防1,控制飼料原料的質(zhì)量。關(guān)鍵在于嚴(yán)格控制原料的含水量，一般要求玉米、高粱、稻谷等的含水量應(yīng)不超過(guò)14%；大豆及

3、其餅粕、麥類(lèi)、糠麩類(lèi)、甘薯干、木薯干等的含水量應(yīng)不超過(guò)13%；棉籽餅粕、菜籽餅粕、向日葵餅粕、亞麻仁餅粕、花生仁餅粕、魚(yú)粉、骨粉及肉骨粉等的含水量應(yīng)不超過(guò)12%。,霉菌毒素的預(yù)防2,預(yù)防： 使用優(yōu)質(zhì)防霉劑，預(yù)防原料或成品飼料霉變。飼料防霉劑種類(lèi)很多，目前使用最廣泛的是丙酸及其鹽類(lèi)（包括丙酸鈉、丙酸鈣、丙酸銨和二丙酸銨）、山梨醇及其鹽類(lèi)、雙乙酸鈉等是常用的防霉劑。飼料一旦污染應(yīng)使用有效的霉菌毒素吸附劑。,霉菌毒素的控制,物理、化學(xué)處理法

4、2）生物轉(zhuǎn)化法3）吸附法（霉菌毒素吸附劑）,霉菌毒素的脫毒,物理化學(xué)方法？方便性如何？適口性如何？,吸附劑法,為了減少損失， 很多學(xué)者采用一些物質(zhì)作為霉菌毒素的吸附劑來(lái)處理霉變飼料， 即在飼料中添加可以吸附霉菌毒素物質(zhì)， 使毒素在經(jīng)過(guò)動(dòng)物腸道時(shí)不被動(dòng)物所吸收， 直接排出體外。例如：甘露低聚糖，水合鋁硅酸鹽類(lèi)，膨潤(rùn)土，蒙脫石等。,,市場(chǎng)上霉菌毒素吸附劑產(chǎn)品主要類(lèi)型,黏土類(lèi)吸附劑；    酵母細(xì)胞壁提取物；

5、 酶解毒劑； 微生物解毒劑； 中草藥制劑；,粘土類(lèi)吸附劑,Silicon tetrahedron: SiO44-,Aluminum octahedron: AlO69-,硅及鋁 – 地球上最豐富的礦物質(zhì) 不同的硅及鋁組合造成不同的粘土類(lèi)粘土類(lèi)吸附劑是自然礦產(chǎn) 粘土類(lèi)吸附劑都帶負(fù)極,硅鋁酸鹽Aluminosilicates,高嶺土(1:1): 水合硅鋁酸鹽Al2(Si2O5)(OH)8延展性差, 帶負(fù)極沸石粉:水

6、合硅鋁酸鹽Na2Al2Si3O10.2H2O火山灰,可能污染許多礦物質(zhì)及重金屬結(jié)構(gòu)像蜂窩-分子篩, 可吸引大小適當(dāng)帶負(fù)極的分子最常用在濾水器的濾芯膨潤(rùn)土 (2:1):Montmorillonites, Sodium and calcium bentonites (Na,Ca)X(Al,Mg)2Si4O10(OH)2.nH2O火山灰類(lèi)的天然礦產(chǎn)水合鈣鈉硅鋁酸鹽延展性比較好,吸水后膨脹增加飼料流動(dòng)性,膨潤(rùn)土如何吸附黃曲霉

7、菌毒素,+,+,-,H2O: 高極性,螃蟹眼狀的結(jié)構(gòu),黃曲霉菌毒素: 唯一帶有極性的霉菌毒素,膨潤(rùn)土如何吸附黃曲霉菌毒素,Divalent Interlayercations,,or,粘土類(lèi)吸附劑的局限性,添加劑量高 (1-3%)吸附力取決于分子大小及帶正價(jià)的分子只能吸附帶極性的黃曲霉毒素但是也吸附礦物質(zhì), 例如錳, 鋅, 鎂 (Chestnut et al. 1992), 銅及鈉 (Kramer 1993), 尤其是使用量

8、> 0.5%對(duì)吸附嘔吐毒素, T-2毒素, 玉米赤霉烯酮 (Orr et al. 1988; Kubena et al. 1998), 赭曲霉毒素A (Huff et al. 1992), 蛇形菌毒素 (Kubena et al. 1993), 高羊茅毒素 (Chestnut et al. 1992)無(wú)效可能有二惡英(dioxins)及重金屬的污染對(duì)環(huán)保有負(fù)面的影響,吸附劑法的缺陷,酶法分解霉菌毒素,黃曲霉毒素 B1,黃曲霉

9、毒素 B2,黃曲霉毒素 G1,黃曲霉毒素 G2,黃曲霉毒素的結(jié)構(gòu)非常相似, 一種酶就可以分解所有的黃曲霉毒素,使用酶分解黃曲霉毒素,一種酶可能可以分解所有的單端孢霉烯類(lèi)毒素,單端孢霉烯類(lèi)毒素(Trichothecenes),需要同時(shí)含有多種的酶,但是還有其他的霉菌毒素,黃曲霉毒素萎蔫酸Penicillic AcidAlternariolFusariocinPenitremCitreoviridinFusari

10、nsPhomopsin桔霉素IslanditoxinRoridins環(huán)匹克尼酸LuteoskyrinRubratoxin嘔吐毒素串珠鐮刀菌毒素Slaframine蛇形菌毒素MonoacetoxyscirpenolDicoumarolNeosolaniolSlaframineStachbotryotoxinsErgotamine赭曲霉毒素SterigmatocystinErg

11、o ToxinsOosporeinT-2毒素FumitremorgenPaspalitremsTremorgens煙曲霉毒素Patulin玉米赤霉烯酮,還有其他300多種, 可能還有數(shù)千種未知的霉菌毒素…..,酶分解霉菌毒素的局限性,酶也是蛋白質(zhì), 活力可受pH, 溫度, 及受質(zhì)(霉菌毒素)的影響酶對(duì)受質(zhì)的選擇非常專(zhuān)一性, 而且專(zhuān)一性的程度非常高, 有時(shí)是絕對(duì)性的是否適合該種酶的作用條件，酶解后的次級(jí)產(chǎn)

12、物是否能保證沒(méi)有毒性。,酵母細(xì)胞壁提取物,,,有效成份:改性的葡聚糖,利用酵母細(xì)胞壁內(nèi)的葡萄糖甘露聚糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)與同樣屬于有機(jī)類(lèi)的霉菌毒素的親和性，吸附霉菌毒素。類(lèi)似于肥皂去油的原理，為表面親和吸附。,改性的葡聚糖的三維螺旋結(jié)構(gòu),改性甘露聚糖-黃曲霉毒素,黃曲霉毒素,甘露聚糖,,,,其他毒素與它的吸附方式,T2,嘔吐毒素,赭曲霉毒素,煙曲霉毒素,乳酸菌對(duì)于霉菌毒素的作用,乳酸菌對(duì)于霉菌毒素的去除的作用是目前在食品和人類(lèi)營(yíng)養(yǎng)方面一個(gè)嶄新的

13、課題。目前主要集中在黃曲霉毒素AFb1上。已經(jīng)有大量研究證實(shí)了一些乳酸菌能夠很好去除黃曲霉毒素，可能還有其他毒素（參見(jiàn)隨附的參考文獻(xiàn)）。,霉菌毒素檢測(cè)方法,飼料中霉菌及霉菌毒素的檢測(cè)方法主要有目測(cè)法、 薄層色譜法(T LC) 、 高效液相色譜法(HP LC) 、 酶聯(lián)免疫法(E LISA) 、 放射免疫法(KIA)及氣相色譜法等?？焖僭嚰垯z測(cè)法,薄層層析法(TLC),T LC法是我國(guó)測(cè)定食品及飼料中霉菌毒素的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法之一 ,其原

14、理是針對(duì)不同的樣品 ,用適宜的提取溶劑將霉菌毒素從樣品中提取出來(lái) ,經(jīng)柱層析凈化 ,再在薄層板上層析展開(kāi)、 分離 ,利用霉菌毒素的熒光性 ,根據(jù)熒光斑點(diǎn)的強(qiáng)弱與標(biāo)準(zhǔn)比較測(cè)定其最低含量。T LC法由于設(shè)備簡(jiǎn)單 ,易于普及 ,所以國(guó)內(nèi)外仍在使用 ,但該法樣品前處理繁瑣 ,且提取和凈化效果不夠理想 ,提取液中雜質(zhì)較多 ,在展開(kāi)時(shí)影響斑點(diǎn)的熒光強(qiáng)度 ,而雙向展開(kāi)雖避免了雜質(zhì)干擾，但增加了操作步驟和時(shí)間(葉雪珠 ,2003) 。,液相色譜法(

15、HPLC),HPLC法是近幾年發(fā)展起來(lái)的檢測(cè)霉菌毒素的方法，主要是用熒光檢測(cè)器檢測(cè) 。在適宜的流動(dòng)相條件下，采用反相C18柱 ，使霉菌毒素同時(shí)分離。用 HPLC 法檢測(cè)，最低檢出量0. 08 ng ，回收率為 92. 87 % 。該法快速而準(zhǔn)確 ,但需要昂貴的儀器設(shè)備 。,酶聯(lián)免疫法(ELISA),ELISA 法是1971年提出的?；驹硎窃诤线m的載體上 ,酶標(biāo)記抗體或抗原與相應(yīng)的抗原或抗體形成酶標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物 ,在酶底物參與下

16、 ,復(fù)合物上的酶催化底物使其水解 ,氧化或還原成為另一種帶色物質(zhì)?？捎梅止夤舛扔?jì)進(jìn)行測(cè)定 ,從而可計(jì)算出參與反應(yīng)的抗原和抗體的含量(楊利國(guó) ,1998) 。該免疫學(xué)方法更實(shí)際 ,其靈敏度與 TLC 或 HPLC 法相當(dāng)或更高 ,因而具有更廣闊的應(yīng)用前景。該法由于快速、 靈敏、 準(zhǔn)確、 可定量、 操作簡(jiǎn)便、 無(wú)需貴重儀器設(shè)備 ,且對(duì)樣品純度要求不高等特性 ,特別適用于大批量樣品的檢測(cè)。,金標(biāo)快速試紙條檢測(cè)原理,試劑含有被事先固定于膜上

17、測(cè)試區(qū)（T）的AFB1-BSA偶聯(lián)物和被膠體金標(biāo)記的抗AFB1特異性抗體。測(cè)試時(shí)，樣品滴入試劑盒孔內(nèi)，如AFB1在樣品中濃度低于5ng/ml時(shí)，膠體金抗體不能與AFB1全部結(jié)合。這樣，膠體金抗體在層析過(guò)程中會(huì)被固定在膜上的AFB1-BSA偶聯(lián)物結(jié)合，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)會(huì)出現(xiàn)一條紫紅色條帶。如果AFB1在樣品中濃度高于5ng/ml時(shí)，膠體金抗體與AFB1全部結(jié)合，從而在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)因?yàn)楦?jìng)爭(zhēng)反應(yīng)不會(huì)與AFB1-BSA偶聯(lián)物結(jié)合而不出現(xiàn)紫

18、紅色條帶。,檢測(cè)時(shí)間短，從樣品處理到檢測(cè)不到半小時(shí)。采用無(wú)毒無(wú)害的乙酸乙酯為霉毒素提取劑，提取時(shí)短、溶劑易于去除，改變了傳統(tǒng)脫溶劑長(zhǎng)且污染環(huán)境和危害操作人員的健康等缺點(diǎn)。不需紫外光源、專(zhuān)用檢測(cè)儀和專(zhuān)業(yè)人員，適用于現(xiàn)場(chǎng)和基層單位。操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確，可逐份檢測(cè)，故成本低。 試劑穩(wěn)定，室溫保存，有效期長(zhǎng)（至少一年半）。,金標(biāo)試紙法快速檢測(cè)的優(yōu)勢(shì),理想的霉菌毒素吸附劑,具有吸附不同種類(lèi)霉菌毒素的能力；在飼料中使用量低且有效；