馬伊氏錐蟲(chóng)酶聯(lián)免疫分析elisa

1、1馬伊氏錐蟲(chóng)馬伊氏錐蟲(chóng)酶聯(lián)免疫分析（酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說(shuō)明書(shū)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用。藥品名稱(chēng)：藥品名稱(chēng)：通用名：馬伊氏錐蟲(chóng)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的：使用目的：本試劑盒用于定性測(cè)定馬血清，血漿及相關(guān)液體樣本中伊氏錐蟲(chóng)。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用間接法測(cè)定標(biāo)本中馬伊氏錐蟲(chóng)。用純化的伊氏錐蟲(chóng)抗體包被微孔板，制成固相抗體，與樣品中伊氏錐蟲(chóng)溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素HRP結(jié)合，形成免疫

2、復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中馬伊氏錐蟲(chóng)的存在與否。，試劑盒組成試劑盒組成120倍濃縮洗滌液50ml1瓶8樣品稀釋液6ml1瓶2鏈霉親和素HRP6ml1瓶9陰性對(duì)照0.5ml1瓶3酶標(biāo)包被板12孔8條10陽(yáng)性對(duì)照0.5ml1瓶4生物素標(biāo)記的抗IgG抗體6ml1瓶11密封袋1個(gè)

3、5顯色劑A液6ml1瓶12封板膜3張6顯色劑B液6ml1瓶13說(shuō)明書(shū)1份7終止液6ml1瓶標(biāo)本要求標(biāo)本要求1不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。2標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融操作步驟操作步驟1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照（不加樣品，生物素標(biāo)記的抗IgG抗體，

4、鏈霉親和素HRP，其余操作相同）1孔2.加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，37℃溫育45分鐘。3.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次，拍干。5.加生物素標(biāo)記的抗IgG抗體：每孔加入生物素標(biāo)

5、記的抗IgG抗體50μl（空白孔除外）。237℃溫育30分鐘6.洗滌：操作同4。7.加鏈霉親和素HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素HRP（空白孔除外），輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。8.洗滌：操作同4。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值

6、）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。結(jié)果判定：結(jié)果判定：試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00陰性對(duì)照平均值≤0.10臨界值（CUTOFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值0.15陰性判定：樣品OD值臨界值（CUTOFF）者為馬伊氏錐蟲(chóng)陰性陽(yáng)性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為馬伊氏錐蟲(chóng)陽(yáng)性注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。2試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標(biāo)包