馬伊氏錐蟲酶聯(lián)免疫分析elisa

1、1馬伊氏錐蟲馬伊氏錐蟲酶聯(lián)免疫分析（酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。藥品名稱：藥品名稱：通用名：馬伊氏錐蟲酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的：使用目的：本試劑盒用于定性測定馬血清，血漿及相關液體樣本中伊氏錐蟲。實驗原理實驗原理本試劑盒采用間接法測定標本中馬伊氏錐蟲。用純化的伊氏錐蟲抗體包被微孔板，制成固相抗體，與樣品中伊氏錐蟲溫育后，加入生物素標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素HRP結(jié)合，形成免疫

2、復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中馬伊氏錐蟲的存在與否。，試劑盒組成試劑盒組成120倍濃縮洗滌液50ml1瓶8樣品稀釋液6ml1瓶2鏈霉親和素HRP6ml1瓶9陰性對照0.5ml1瓶3酶標包被板12孔8條10陽性對照0.5ml1瓶4生物素標記的抗IgG抗體6ml1瓶11密封袋1個

3、5顯色劑A液6ml1瓶12封板膜3張6顯色劑B液6ml1瓶13說明書1份7終止液6ml1瓶標本要求標本要求1不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。2標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于20℃保存，但應避免反復凍融操作步驟操作步驟1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照（不加樣品，生物素標記的抗IgG抗體，

4、鏈霉親和素HRP，其余操作相同）1孔2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，37℃溫育45分鐘。3.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復4次，拍干。5.加生物素標記的抗IgG抗體：每孔加入生物素標

5、記的抗IgG抗體50μl（空白孔除外）。237℃溫育30分鐘6.洗滌：操作同4。7.加鏈霉親和素HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素HRP（空白孔除外），輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。8.洗滌：操作同4。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值

6、）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。結(jié)果判定：結(jié)果判定：試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00陰性對照平均值≤0.10臨界值（CUTOFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值0.15陰性判定：樣品OD值臨界值（CUTOFF）者為馬伊氏錐蟲陰性陽性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為馬伊氏錐蟲陽性注意事項注意事項1操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。2試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標包