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文檔簡介
1、1小鼠胰蛋白酶原激活肽小鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)(TAP)酶聯(lián)免疫分析(酶聯(lián)免疫分析(ELISAELISA)試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測小鼠血清,血漿及相關液體樣本中胰蛋白酶原激活肽(TAP)的含量。實驗原理:實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)水平。用純化的小鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入胰蛋白酶原
2、激活肽(TAP),再與HRP標記的胰蛋白酶原激活肽(TAP)抗體結合,形成抗體抗原酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰蛋白酶原激活肽(TAP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)濃度。試劑盒組成試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片
3、(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板14819628℃保存標準品:2700ngL0.5ml1瓶0.5ml1瓶28℃保存標準品稀釋液1.5ml1瓶1.5ml1瓶28℃保存酶標試劑3ml1瓶6ml1瓶28℃保存樣品稀釋液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存顯色劑A液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存顯色劑B液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存終止液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存濃縮洗滌液(20ml20倍)1瓶(20ml30倍)1瓶28℃保存注意事
4、項:注意事項:1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡1530分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。3各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品
5、稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(n5)。3分鐘左右(20003000轉分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(20003000轉分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標
6、本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于20℃保存,但應避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。計算:計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以
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