掌葉半夏脫毒及快繁體系建立.pdf

1、掌葉半夏，又名虎掌南星，天南星科半夏屬多年生草本植物，是天南星藥材的主要栽培種，生產(chǎn)上極易感染病毒，不利于保持和提高藥材的品質(zhì)和產(chǎn)量。本文對掌葉半夏田間病毒發(fā)生情況進行了調(diào)查，利用RT-PCR法對病株的病毒種類進行了檢測。以掌葉半夏微莖尖為外植體，研究了莖尖大小、激素濃度、培養(yǎng)基成分對掌葉半夏脫毒效果的影響以及影響無病毒苗快速繁殖的因素等。建立了掌葉半夏脫毒快繁體系，在短期內(nèi)繁殖一定量的脫毒苗用于生產(chǎn)，以確保掌葉半夏種植的穩(wěn)定性和效益。

2、主要研究結(jié)果如下:
　　1、DsMV和CMV是侵染安國地區(qū)掌葉半夏栽培品種的主要病毒，檢出率分別為72％、38％，其中CMV和DsMV復(fù)合侵染率高達38％。
　　2、莖尖大小是影響莖尖成活和脫毒效果的主要因素。0.1～0.2 mm大小的莖尖在MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L培養(yǎng)基上培養(yǎng)25 d可恢復(fù)生長，DsMV、CMV脫除率均可達100％，但成活率只有26.7％;0.7～0.9 mm大小的莖尖，成活率

3、為80.0％，但病毒脫除率降低，DsMV、CMV脫除率分別為60.0％、73.3％。綜合莖尖成活率和脫毒率的負相關(guān)關(guān)系，選擇0.2～0.5 mm大小的莖尖是進行掌葉半夏脫毒快繁的最適外植體，成活率為53.3％，DsMV、CMV脫除率分別為76.7％、100％。
　　3、培養(yǎng)基成分是影響莖尖成活的另一重要因素。提高MS基本培養(yǎng)基中NH4+、K+含量對掌葉半夏莖尖成活有較大的促進作用，附加247 mg/L NH4+或391 mg/L

4、K+可分別提高0.2～0.5 mm大小的莖尖成活率至86.7％、73.3％。
　　4、MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L為掌葉半夏莖尖愈傷組織誘導(dǎo)最適宜激素組合，誘導(dǎo)率為46.7％，同種培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，可誘導(dǎo)不定芽分化（分化系數(shù)為6.93），不定根形成，一次性成功誘導(dǎo)形成試管苗，移栽成活率高達100％。
　　5、激素濃度、蔗糖濃度、多效唑濃度和溫度對離體塊莖的形成及膨大有較大影響。正交試驗結(jié)果表明，MS

5、+6-BA2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+GA30.5 mg/L組合最有利于離體塊莖的形成和發(fā)育，誘導(dǎo)率最高，為86.7％，每株鮮重增加量為2.8g，芽數(shù)為9.0個;促進塊莖膨大的最適宜蔗糖濃度為60 g/L，培養(yǎng)60 d，離體塊莖鮮重增加量為0.50 g;最適宜的多效唑濃度為6 mg/L，培養(yǎng)60 d，離體塊莖鮮重增加量為0.40 g;最適宜的溫度為20℃;培養(yǎng)4周，離體塊莖鮮重增加量為0.73 g。
　　本研究明確了

6、掌葉半夏田間病毒類型和感病率，建立了“一站式”微莖尖培養(yǎng)脫毒體系為:以0.2～0.5 mm莖尖為外植體，于MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L培養(yǎng)基上接種和再生，可有效脫除DsMV和CMV。添加247mg/L NH4+或391mg/LK+有助于莖尖成活。同時建立了掌葉半夏脫毒苗快速繁殖體系:將脫毒試管苗在MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5 mg/L+ GA30.5 mg/L+蔗糖60 g/L+多效唑6 mg/L