蛋白質(zhì)的定量測(cè)定實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)名稱(TitleofExperimetn)蛋白質(zhì)的定量測(cè)定（Folin酚試劑法）實(shí)驗(yàn)日期實(shí)驗(yàn)日期(DateofExperiment)XXXX實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)(LabNo.)XXXX合作者合作者(Partner)XXXX指導(dǎo)老師指導(dǎo)老師(Instruct)XXXX總分總分(Total(TotalSce)Sce)教師簽名教師簽名(Signature)批改日期批改日期(Date)一、實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)1.0實(shí)驗(yàn)?zāi)康?初步了解各種蛋白質(zhì)含量測(cè)

2、定的常用方法。?掌握Folin酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理及熟悉和掌握實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)。?掌握用excel制作標(biāo)準(zhǔn)曲線和通過標(biāo)準(zhǔn)曲線及標(biāo)準(zhǔn)管方法求樣品溶液中待測(cè)定物質(zhì)含量。1.1實(shí)驗(yàn)原理1.1.1總體概述Folin酚試劑法是經(jīng)過科學(xué)家改進(jìn)的測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法，F(xiàn)olin首創(chuàng)這種方法：利用蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基（酚基）還原酚試劑（磷鎢酸磷鉬酸）起藍(lán)色反應(yīng)。而后，Lowry對(duì)此法進(jìn)行了改進(jìn)，先于標(biāo)本中加堿性銅試劑，再與酚試劑反應(yīng)，提高

3、了靈敏度，靈敏度的范圍為：，故使得實(shí)驗(yàn)的精確度大大提20250g?:高，但同時(shí)也存在著干擾物質(zhì)多、費(fèi)時(shí)、操作嚴(yán)格計(jì)時(shí)等問題。1.1.2雙縮脲反應(yīng)在堿性溶液中，雙縮脲（）能和作用，發(fā)生配位22HNOCNHCONH??2Cu?反應(yīng)，形成紫色或紫紅色的絡(luò)合物，即為雙縮脲反應(yīng)。1.2.3實(shí)驗(yàn)儀器及器材①V1100可見光分光光度計(jì)；②恒溫水浴箱；③試管6支、試管架；④加樣槍、加樣槍架。1.3實(shí)驗(yàn)步驟1.3.1實(shí)驗(yàn)流程1.3.2實(shí)驗(yàn)步驟步驟操作（1

4、）反應(yīng)體系設(shè)置取6只潔凈的試管，利用加樣槍按要求量取相應(yīng)量的溶液，混合均勻（各試管的需加入的試劑和量見下表）：空白管空白管標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管樣品管樣品管試劑試劑123456牛血清蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液牛血清蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液00.20.40.60.80樣品液樣品液000000.5蒸餾水蒸餾水1.00.80.60.40.20.5（2）雙縮脲反應(yīng)每隔一分鐘，依次往1號(hào)試管到6號(hào)試管中加入2mL的堿性硫酸銅溶液，搖勻并記錄每支試管的加入硫酸銅時(shí)間，室溫靜置10mi