大鼠克拉拉細胞蛋白cc16酶聯(lián)免疫分析

1、大鼠克拉拉細胞蛋白（大鼠克拉拉細胞蛋白（CC16）酶聯(lián)免疫分析）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：檢測范圍：96T0.4ngL25ngL使用目的：使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中克拉拉細胞蛋白（CC16）含量。實驗原理實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠克拉拉細胞蛋白（CC16）水平。用純化的大鼠克拉拉細胞蛋白（CC16）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗

2、的微孔中依次加入克拉拉細胞蛋白（CC16），再與HRP標記的克拉拉細胞蛋白（CC16）抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的克拉拉細胞蛋白（CC16）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠克拉拉細胞蛋白（CC16）濃度。試劑盒組成試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml1瓶7終

3、止液6ml1瓶2酶標試劑6ml1瓶8標準品（40ngL）0.5ml1瓶3酶標包被板12孔8條9標準品稀釋液1.5ml1瓶4樣品稀釋液6ml1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml1瓶12密封袋1個標本要求標本要求1標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）

4、活性。操作步驟操作步驟1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。20ngL5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液10ngL4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液5ngL3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液2.5ngL2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液1.25ngL1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標

5、準品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板注意事項注意事項1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響

6、結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時做標準曲線，最好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準