藤黃微球菌AD3的阿特拉津降解基因分析與降解特性研究.pdf

1、阿特拉津是一種三嗪類除草劑，用于闊葉類雜草的防除，其生物毒性來(lái)自于其分子中的一個(gè)氯原子。將阿特拉津完全降解成二氧化碳和水需要六步降解反應(yīng)，其中降解途徑中第一個(gè)酶為阿特拉津氯水解酶(AtzA)或三嗪水解酶(TrzN)，其用途是催化阿特拉津水解脫氯，生成無(wú)毒的羥基阿特拉津。 本研究從河北省宣化農(nóng)藥廠的阿特拉津工業(yè)廢水中分離出一株阿特拉津降解細(xì)菌藤黃微球菌(Micrococcus luteus)AD3，在前人研究的基礎(chǔ)上，通過(guò)AD3

2、菌株的分子雜交，核苷酸序列測(cè)定，質(zhì)粒檢測(cè)，生物修復(fù)等方法對(duì)它的降解特性等進(jìn)行了研究，首先以AD3菌株總DNA為模板，進(jìn)行分子雜交，結(jié)果顯示AD3不具有通常大多數(shù)降解菌株含有的atzA，但具有atzD，說(shuō)明AD3可能具有trzN和降解途徑的后三個(gè)基因。因此，我們以節(jié)桿菌TC1的trzN的基因?yàn)閰⒖夹蛄校O(shè)計(jì)PCR引物，通過(guò)PCR擴(kuò)增，得到trzN基因中心區(qū)片段，并將PCR產(chǎn)物直接測(cè)序，通過(guò)與TC1菌株的trzN基因中心區(qū)片段做同源性比較，

3、發(fā)現(xiàn)AD3菌株和TC1菌株的trzN核心區(qū)的同源性達(dá)到100％，同時(shí)還參照ADP菌株的atzB,atzC，atzD，atzE, atzF設(shè)計(jì)引物，通過(guò)對(duì)atzB,atzC的序列結(jié)果和atzD，atzE,atzF的PCR結(jié)果分析表明，AD3具有降解阿特拉津的全套基因，能夠完全降解阿特拉津。通過(guò)對(duì)其生長(zhǎng)特性的試驗(yàn)表明，它的降解性能大大超過(guò)文獻(xiàn)報(bào)道的假單胞菌ADP，并且AD3菌株利用碳源和氮源的物質(zhì)廣泛，具有較好的應(yīng)用價(jià)值。質(zhì)粒分析顯示AD3