高效苯胺降解細菌gxa7的篩選鑒定及其苯胺雙加氧酶基因簇的克隆

1、廣西大學碩士學位論文高效苯胺降解細菌GXA7的篩選鑒定及其苯胺雙加氧酶基因簇的克隆姓名：畢洪凱申請學位級別：碩士專業(yè)：微生物學指導教師：武波20040601I S O L A T I O N A N D I D E N T I F I C A T I o N o FA N I L I N E ．D E G R A D I N G S T R A I N G X A 7 A N D C L o N I N Go F I T S A N I

2、 L I N E D I o X Y G E N A S E G E N E C L U S T E RA B S T R A C TA b 吼c t e r i a ls t r a i nG X A 7 。w h i c hw a sa b l et og r o w o na n i l i n ea sas o l ec a r b o n ，n i t r o g e na n de n e r g ys o u r c e

3、s ，w a si s o l a t e df r o mt h ea c t i v a t e ds l u d g ed r a i n e df r o m t h ew a s t e w a t e r p o l l u t e db y a n i l i n ef o ra l o n g t i m e ．T h eo p t i m u mt e m p e r a t u r ea n d p H f o ri

4、 t sg r o w t h a n d a n i l i n ed e g r a d a t i o nw e r e3 2 “ C ～3 6 “ Ca n d 7 ．0 ，r e s p e c t i v e l y ．I ns u i t a b l ec o n d R i o n ss t r a i nG X A 7 c a nd e g r a d ea n i l i n ew i t h2 5 0 0 m g

5、／La tm o s t ．B a s e do np h e n o t y p i ci d e n t i f i c a t i o na n d16 Sr D N As e q u e n c ea n a l y s i s ，s t r a i nG X A 7 w a si d e n t i f i e da sD e l f t i as p ．．W i t hs p e c i f i cp r i m e r s

6、d e s i g n e d ，P C R p r o d u c t sa t d 7 8 8a n d a t d 7 6 2w e r ea m p l i f i e db y P C R ．T h e t w o f r a g m e n t sw e r es e q u e n c e d a n d c l o s e l y r e l a t e dt oa n i l i n ed i o x y g e n

7、a s eg e n eo f A c i n e t o b a c t e r s p ．( A c c e s s i o nn u m b e r ：D 8 6 0 8 0 ) w i t h 9 3 ％a n d 9 8 ％o v e r a l l s i m i l a r i t y r e s p e c t i v e l y ．A g e n o m i c l i b r a r y o fs t r a i n

8、 G X A 7W a sc o n s t r u c t e di nt h ec o s m i dv e c t o rp L A F R 3u s i n gE ．c o l iE P I 1 0 0a st h eh o s ts t r a i n ．T w or e c o m b i n a n t s ，p G X A 2 4 0a n d p G X A 3 1 0w e r ei d e n t i f i e

9、df r o mt h eg e n o m i c l i b r a r yu s i n g i ns i t uh y b r i d i z a t i o na n d S o u t h e m b l o t t i n gp r o b e dw i t ht h eP C R p r o d u c ta t d 7 8 8 ．B yt h ea n a l y s i so f s u b c l o n es e

10、 q u e n c i n g ，w em a d ec e r t a i nt h a tt h ea n i l i n e d i o x y g e n a s e g e n e c l u s t e ro f s t r a i nG X A 7 w a s c l o n e d ．K e yw o r d s ：a n i l i n e ；b i o d e g r a d a t i o n ；D e l f