人乳鐵蛋白基因在胡蘿卜(daucuscarotal.)中的表達及其功能研究

1、福建農林大學博士學位論文人乳鐵蛋白基因在胡蘿卜（Daucus carota L.）中的表達及其功能研究姓名：鄭回勇申請學位級別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導教師：鄭金貴2002.8.1一套高效的遺傳轉化體系，結果為：最適轉化受體為新鮮下胚軸及經預培養(yǎng)的下胚軸；共培養(yǎng)時，低濃度的乙酰丁香酮( 2 5 u M )對轉化具有促進作用：適宜的卡那霉素篩選濃度是1 0 0 m g ／L 。篩選時，卡那霉素濃度先低后高，植株再生時完全去除，有利于縮短

2、植株再生周期。3 ．入乳鐵蛋白基因在胡蘿p 中的轉化及分子檢測以p B I l 2 1 為中間載體，把人乳鐵蛋白基因替換N G U S 位置上，構建成表達載體p B I h L F 。在農桿菌L B A 4 4 0 4 介導下，把目的基因導入胡蘿h ，獲得了外表正常的抗性植株。P C R 檢測、S o u t h e r n 雜交證實了外源基因己整合到抗性植株基因組D N A 中。對轉基因植株進行R T ，P C R 檢驗，得到了陽性結

3、果，說明外源基因在胡蘿h 中能正常轉錄。4 ．轉基因植株抗菌能力加強，鐵含量得到提高提取轉基因植株葉片粗蛋白，以大腸桿菌D H 5n 和酵母菌A H l 0 9 為試驗靶標，測定了轉基因植株粗蛋白的抑菌活性。結果表明，轉基因植株葉片相蛋白對D H S ；Ⅱ有強烈的抑制作用( 當培養(yǎng)基中粗蛋白為l m g ／m l 時，每m 1 菌數為對照的1 ．4 7 ％) ，對A H l 0 9 的抑制作用較弱。按G B ／T1 3 8 8 3 —9