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文檔簡介
1、廢水中重金屬污染日益嚴(yán)重,其中鉛是一種很普遍的污染物。鉛會對人和動物的生命組織體產(chǎn)生很強(qiáng)的毒性,因而對鉛污染的修復(fù)研究不容忽視。隨著對鉛污染的研究深入,其處理方法也在不斷的發(fā)展。微生物處理技術(shù)因其價(jià)格低廉、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)而受到廣泛的關(guān)注。白腐真菌是一種具有較強(qiáng)的有機(jī)物的降解能力的真菌,由于其具有較強(qiáng)的重金屬吸附能力而使其近幾年在重金屬廢水治理的應(yīng)用研究中受到很大的關(guān)注。白腐真菌在應(yīng)對有毒重金屬的脅迫時(shí)會形成有效的防御體系。這些防御體系是
2、基于菌體在胞內(nèi)和胞外所產(chǎn)生的具有螯合絡(luò)合重金屬能力的物質(zhì),胞外作為重金屬離子毒性鈍化的第一環(huán)境尤為重要。白腐真菌產(chǎn)生的胞外分泌物通過調(diào)節(jié)菌體生存環(huán)境中的pH值、螯合作用、沉淀、穩(wěn)定、固定等途徑改變重金屬的生物有效性和生物毒性,從而影響菌體對重金屬的吸收。為了進(jìn)一步探討黃孢原毛平革菌對鉛的生物去除機(jī)理,預(yù)測和控制重金屬在環(huán)境中的去向,我們有必要從菌體在和鉛離子接觸的過程中為應(yīng)對鉛毒性所產(chǎn)生的一系列的胞外應(yīng)答響應(yīng)機(jī)制進(jìn)行考察。
本
3、文將白腐真菌的模式菌種黃孢原毛平革菌應(yīng)用于含鉛廢水的處理,研究了菌體對鉛的吸附去除機(jī)理,系統(tǒng)地研究了黃孢原毛平革菌去除鉛的過程中分泌的胞外小分子有機(jī)酸、硫醇化合物、胞外聚合物的響應(yīng)特性及這些分泌物對鉛的去除的作用機(jī)理,并進(jìn)一步研究了這個(gè)過程中菌體去除的鉛的生物活性,從而發(fā)展了基于黃孢原毛平革菌的含鉛廢水處理和穩(wěn)定化技術(shù)和理論。本文的具體研究工作及成果包括以下4個(gè)部分的內(nèi)容:
第1部分為黃孢原毛平革菌對鉛離子的吸附機(jī)理的研究。實(shí)
4、驗(yàn)中采用的是培養(yǎng)成熟的菌體對廢水中鉛離子進(jìn)行吸附去除,考察了環(huán)境中的pH、鉛初始濃度、吸附時(shí)間和菌體的預(yù)處理對去除效果的影響,進(jìn)一步分析了成熟菌體吸附去除鉛的模式。研究中得到以下結(jié)果:(1)成熟菌體去除鉛離子最適合的pH條件為5.0,對50 mg/L的鉛的去除率可達(dá)64%。(2)隨著鉛離子的初始濃度逐漸增大,鉛的去除率均處于60%-70%之間。等量的菌體所吸附的鉛量逐漸增加,當(dāng)初始鉛離子濃度增大到200 mg/L時(shí),比在實(shí)驗(yàn)組100 m
5、g/L中的菌體吸附的鉛量高3倍,這說明菌體對高濃度的鉛離子啟動了更加快速有效的去除吸附機(jī)制。(3)菌體對低于100 mg/L的鉛離子的吸附可以在4h內(nèi)達(dá)到飽和,而對高于100 mg/L的鉛離子則需要更多的時(shí)間。這可能是由于前期進(jìn)行的是一個(gè)快速的表面吸附,而后進(jìn)行的是鉛離子向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移的過程,這一過程受細(xì)胞內(nèi)代謝、細(xì)胞擴(kuò)散過程的控制。(4)菌體對不同濃度的鉛離子的吸附符合Freundlich吸附等溫線方程,這說明成熟菌體吸附去除鉛離子的過
6、程是基于在不同表面間的吸附,各個(gè)吸附位點(diǎn)并不是等同的或者相互間不是獨(dú)立的。通過紅外光譜分析發(fā)現(xiàn)菌體表面的羥基、氨基、羧基、巰基官能團(tuán)對鉛的吸附起了重要的作用。各種菌體預(yù)處理會影響這些功能性官能團(tuán)的數(shù)量和種類,并進(jìn)一步影響菌體對鉛離子的去除效果。
第2部分著重研究了黃孢原毛平革菌分泌的胞外功能性分泌物應(yīng)對鉛離子毒性的響應(yīng)特性。這些功能性物質(zhì)是指含有羥基、氨基、羧基、巰基官能團(tuán)的物質(zhì),包括低分子有機(jī)酸、硫醇化合物及胞外聚合物。研究
7、中使用經(jīng)預(yù)培養(yǎng)的黃孢原毛平革菌接觸濃度范圍為25-400 mg/L的鉛離子。在菌體生長過程中對這些功能性物質(zhì)在水體環(huán)境中的含量變化進(jìn)行了監(jiān)測,并結(jié)合鉛濃度的變化進(jìn)行進(jìn)一步分析。研究中得到以下結(jié)果:(1)菌體生長過程中各濃度的鉛均得到了有效的去除。在菌體在生長到121 h時(shí),各實(shí)驗(yàn)組中的鉛均被去除75%以上。與使用成熟菌體的去除效率對比要好得多,尤其有利于低濃度鉛離子的去除。(2)胞外檸檬酸的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于草酸和蘋果酸的含量。鉛誘導(dǎo)菌體快速
8、分泌更多的草酸并推遲環(huán)境中檸檬酸的分,解,抑制蘋果酸的分泌。這說明當(dāng)黃孢原毛平革菌面對鉛離子毒性的脅迫時(shí),菌體分泌的草酸是主動應(yīng)對鉛離子毒性,而蘋果酸和檸檬酸都是被動地響應(yīng)。(3)環(huán)境中有機(jī)酸的蓄積會導(dǎo)致pH值的下降,但這個(gè)變化并未減緩菌體對鉛的去除。這說明在生長中的菌體去除鉛的過程中,當(dāng)pH處于4-6范圍內(nèi)時(shí)它并不是一個(gè)嚴(yán)格的限制因素。(4)更高濃度的鉛離子誘導(dǎo)菌體分泌更多的硫醇物質(zhì),其中大部分是屬于蛋白類硫醇化合物。隨著鉛濃度的增大
9、,蛋白硫醇所占的比例越大。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明并不是所有的胞外硫醇類物質(zhì)都是發(fā)揮著同樣的防御作用,蛋白類硫醇是黃孢原毛平革菌對鉛毒性采取的一個(gè)主要胞外防御機(jī)制。(5)環(huán)境中過高的鉛離子會減緩菌體在某一時(shí)段內(nèi)對糖類相對的代謝速率,但是并不影響菌體整個(gè)生長進(jìn)程中的代謝速率變化。更大鉛離子毒性誘導(dǎo)菌體分泌更多蛋白質(zhì)到培養(yǎng)液中,蛋白質(zhì)最高含量均出現(xiàn)在第5天。
第3部分研究了黃孢原毛平革菌分泌的胞外功能性物質(zhì)在鉛去除過程中發(fā)揮的作用。這些功
10、能性物質(zhì)螯合了鉛離子后會粘附在菌體胞外聚合物層中從而達(dá)到將鉛從水體中分離的目的。研究中將菌體周圍吸附的胞外聚合物層分離并對其中的低分子有機(jī)酸、硫醇化合物、胞外聚合物及鉛含量進(jìn)行檢測,并進(jìn)一步分析各種功能性物質(zhì)含量對菌體吸附的鉛量的影響。研究得到以下結(jié)果:(1)環(huán)境中更高的鉛離子誘導(dǎo)菌體吸附更多的草酸。胞外聚合物層中草酸的降解伴隨著培養(yǎng)液中鉛的濃度出現(xiàn)的一定程度的增大,這種影響在高濃度鉛實(shí)驗(yàn)組中更大。胞外聚合物層中草酸含量和鉛含量有較明顯
11、的相關(guān)性。以上結(jié)果說明當(dāng)黃孢原毛平革菌面臨高濃度的鉛離子毒性時(shí),草酸在去除和鈍化鉛離子方面發(fā)揮著很重要的作用。
(2)鉛誘導(dǎo)菌體吸附更多的蛋白類硫醇化合物,減少了對非蛋白類硫醇化合物的吸附。菌體吸附的硫醇含量和鉛含量相關(guān)性不明顯,這可能和硫醇化合物含量較小有關(guān)。(3)菌體周圍吸附的胞外聚合物主要是由糖類組成,蛋白質(zhì)含量較小。鉛誘導(dǎo)菌體吸附更多胞外聚合物并推遲其中成分含量的減小,這些響應(yīng)特性有利于菌體吸附更多的鉛離子并保護(hù)菌體細(xì)
12、胞免受外界侵害。胞外聚合物中鉛含量與培養(yǎng)液中初始鉛離子濃度呈正相關(guān),胞外聚合物中鉛量占菌體去除總鉛量的比例不斷減小,以上結(jié)果說明在菌體去除鉛的前期胞外聚合物起到了最主要的作用。(4)隨著鉛濃度的增大,草酸含量和胞外聚合物含量的相關(guān)性逐漸增強(qiáng),而硫醇化合物含量和胞外聚合物含量的相關(guān)性卻逐漸減弱,這說明胞外聚合物含量的增加有助于固定吸附更多的草酸。
第4部分為黃孢原毛平革菌吸附去除的鉛的穩(wěn)定性的研究。EDTA可以提取菌體吸附去除的
13、所有具有生物可利用性的鉛,研究中利用EDTA對菌體去除的鉛進(jìn)行提取研究鉛的生物穩(wěn)定性。(1)成熟菌體去除的鉛的穩(wěn)定性受到環(huán)境中pH、菌體預(yù)處理及初始鉛離子濃度的影響。在pH高于6.0環(huán)境中菌體去除的鉛較容易被解吸,pH5.0的環(huán)境最適宜成熟菌體對鉛離子的穩(wěn)定。菌體預(yù)處理不利于其對鉛的穩(wěn)定化,活性菌體吸附的鉛的解吸率均比滅活菌體吸附的鉛的解吸率要低。這說明活菌的生長代謝活動對于鉛離子的穩(wěn)定化具有非常重要的意義。活菌體對初始濃度越低的鉛離子
14、穩(wěn)定化效果越好。(2)菌體生長過程中對鉛的去除和穩(wěn)定化過程幾乎同時(shí)進(jìn)行,在121 h之后菌體去除的鉛保持在20%左右的提取率,處于較穩(wěn)定的狀態(tài),也是對環(huán)境危害較小的狀態(tài)。經(jīng)ESEM-EDAX分析發(fā)現(xiàn)經(jīng)EDTA提取之后菌體表面吸附鉛類物質(zhì)減少,但是提取前后菌體表面鉛類物質(zhì)元素組成成分類似。經(jīng)過XRD進(jìn)一步對提取后的菌體進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)剩余的鉛類物質(zhì)是草酸鉛和磷氯鉛類物質(zhì)。
本論文研究揭示了黃孢原毛平革菌去除和穩(wěn)定化鉛的機(jī)理,探究了菌
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