近海沉積物、懸浮顆粒物中脂溶性藻毒素檢測(cè)及藻體中毒素的純化.pdf

1、近十年來(lái)，海洋環(huán)境中的脂溶性藻毒素由于種類多、分布廣、影響大，逐漸成為環(huán)境化學(xué)家研究的熱點(diǎn)；然而，目前對(duì)海洋沉積物和懸浮顆粒物中脂溶性藻毒素的研究相對(duì)較少，缺乏有效的檢測(cè)方法。而對(duì)沉積物和懸浮顆粒物中脂溶性藻毒素的測(cè)定，對(duì)闡明海洋環(huán)境中脂溶性藻毒素的賦存狀態(tài)，揭示其環(huán)境行為具有重要意義。高純度毒素對(duì)照品是化學(xué)法檢測(cè)毒素的必需品，此外，開(kāi)展毒素環(huán)境化學(xué)行為、毒性效應(yīng)等相關(guān)研究也需要純度較高的毒素，因此，典型毒素純化技術(shù)的研究成為科研工作者

2、亟待解決的難題。本研究發(fā)展了高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLC-MS）聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)海洋沉積物和懸浮顆粒物中多種脂溶性藻毒素的方法，并對(duì)方法進(jìn)行了應(yīng)用；此外，以實(shí)驗(yàn)室內(nèi)培養(yǎng)的利瑪原甲藻為原料，對(duì)高速逆流色譜-質(zhì)譜（HSCCC-MS）聯(lián)用技術(shù)純化3種典型脂溶性藻毒素的可行性進(jìn)行了研究。本研究主要內(nèi)容包括：
　?、虐l(fā)展了一種適用于海洋沉積物中7種典型脂溶性藻毒素同步檢測(cè)的方法，并將該方法用于杭州灣、膠州灣以及萊州灣海域沉積物中脂溶性藻毒素的檢

3、測(cè)。采用加速溶劑萃取法（ASE）對(duì)沉積物中的脂溶性藻毒素進(jìn)行萃取，并對(duì)萃取條件進(jìn)行了系統(tǒng)優(yōu)化；采用高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-ESI-MS2）多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)（MRM）模式，對(duì)包括：大田軟海綿酸（OA）、蝦夷扇貝毒素（YTX）、鰭藻毒素-1（DTX1）、羅環(huán)內(nèi)酯毒素-1（SPX1）、原多甲藻酸-1（AZA1）、原多甲藻酸-2（AZA2）、扇貝毒素-2（PTX2）在內(nèi)的7種脂溶性藻毒素進(jìn)行檢測(cè)，采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線-外標(biāo)法對(duì)目標(biāo)

4、化合物進(jìn)行定量，以消除沉積物基質(zhì)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ASE法對(duì)沉積物中的7種脂溶性藻毒素萃取率高，檢測(cè)方法的專屬性強(qiáng)，精密度（RSD≤8.75％）、重復(fù)性（RSD≤14.76%）和穩(wěn)定性（RSD≤17.37%）良好；7種目標(biāo)化合物的檢出限介于34.4 pg/g?618.5 pg/g之間，回收率在78.0%?109.0%之間，表明方法的靈敏度和準(zhǔn)確度較好，能滿足海洋沉積物中7種脂溶性藻毒素同步檢測(cè)的要求。采用該方法從杭州灣、膠州灣以及萊

5、州灣海域沉積物中檢出不同濃度的OA和PTX2：杭州灣樣品中主要檢出OA，其濃度從186.0到280.7 pg/g；萊州灣的沉積物樣品中主要檢出 PTX2，其濃度從256.4到944.9 pg/g；膠州灣的沉積物樣品中檢出OA和PTX2，但其濃度均低于定量限；檢測(cè)結(jié)果表明杭州灣、萊州灣和膠州灣的沉積物都受到一定程度的脂溶性藻毒素污染。
　　⑵建立了海水懸浮顆粒物中8種典型脂溶性藻毒素同步測(cè)定的超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC

6、-ESI-MS2）聯(lián)用分析方法。海水懸浮顆粒物樣品經(jīng)甲醇超聲輔助提取后，以5 mmoL/L乙酸銨水和乙腈為流動(dòng)相，經(jīng)亞2微米C18色譜柱分離，采用電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜（ESI-MS2）多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式檢測(cè)，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，包括：OA、YTX、DTX1、SPX1、AZA1、AZA2、PTX2、米氏裸甲藻毒素（GYM）8種目標(biāo)物在5 min內(nèi)分離良好，加標(biāo)回收率在83.8%?98.3%之間，并且方法具有良好的重復(fù)性

7、（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）≤14.13%）和靈敏度（檢出限介于2.9?103.1 pg/g之間），在線性范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.996，能滿足海水懸浮顆粒物中8種脂溶性藻毒素同步檢測(cè)的要求。采用本方法初步分析了青島沿岸海域海水懸浮顆粒物中的脂溶性藻毒素，其中PTX2在石老人和第三海水浴場(chǎng)被檢出，含量分別為717.2和790.6 pg/g（干重）。
　　⑶采用高速逆流色譜-質(zhì)譜（HSCCC-MS）聯(lián)用技術(shù)，結(jié)合大孔吸附樹(shù)脂和半

8、制備HPLC純化技術(shù)，發(fā)展了以利瑪原甲藻為原料分離、純化3種脂溶性藻毒素的新方法。利瑪原甲藻干藻粉中3種脂溶性藻毒素經(jīng)90%甲醇水溶液超聲提取后，利用大孔吸附樹(shù)脂法進(jìn)行初步純化；隨后對(duì)HSCCC分離條件進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化，采用最佳 HSCCC分離條件對(duì)經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂初步純化后的毒素粗提物進(jìn)行分離，最后利用半制備HPLC對(duì)3種毒素分別進(jìn)一步純化。結(jié)果表明，HSCCC分離的最佳溶劑體系為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-1%甲酸水溶液（1∶1.75∶1.2