毛細(xì)管電泳光導(dǎo)纖維發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光檢測(cè)法在生物樣品分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、毛細(xì)管電泳因其分離效率高、分析速度快、樣品消耗少、分離裝置簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，迅速發(fā)展成為一種強(qiáng)有力的分離分析技術(shù)，在生命科學(xué)、生物工程、環(huán)境保護(hù)、食品和藥物監(jiān)測(cè)等相關(guān)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。尤其是激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)，由于其能夠滿足生物樣品中痕量組分的測(cè)定，甚至可以達(dá)到單分子、單細(xì)胞檢測(cè)水平，而成為毛細(xì)管電泳最靈敏的檢測(cè)技術(shù)。然而激光器的價(jià)格昂貴、使用壽命短、體積大、能耗高以及需要與其檢測(cè)波長(zhǎng)匹配的熒光衍生試劑，因而在很大程度上限制了毛細(xì)管電泳激光

2、誘導(dǎo)熒光法的推廣和應(yīng)用。近年來(lái)，發(fā)光二極管由于其光源穩(wěn)定，發(fā)光強(qiáng)度高和能提供從紫外到近紅外的寬的波長(zhǎng)范圍，并且發(fā)光二極管具有體積小、價(jià)格低廉、使用壽命長(zhǎng)等特點(diǎn)，作為毛細(xì)管電泳熒光檢測(cè)器的光源已引起人們的關(guān)注。但是，目前報(bào)道的各種發(fā)光二極管吸收型和熒光型檢測(cè)器與激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器相比仍存在靈敏度不夠高的問題，因此對(duì)其應(yīng)用于生物樣品中具有生理活性物質(zhì)的分離和檢測(cè)的報(bào)道也較少。 本文在前人研究工作的基礎(chǔ)上發(fā)展了一種新型的毛細(xì)管電泳光導(dǎo)

3、纖維發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光檢測(cè)裝置，并對(duì)其在復(fù)雜生物樣品分析的應(yīng)用方面進(jìn)行了研究。首先，在實(shí)驗(yàn)室自行設(shè)計(jì)、組裝了一套靈敏度高、儀器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉的毛細(xì)管電泳光導(dǎo)纖維發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光檢測(cè)裝置。然后，采用該裝置發(fā)展了一系列檢測(cè)生物樣品中痕量具有生理活性物質(zhì)的方法，并將這些方法應(yīng)用到人血漿、尿液和鼠腦、鼠胃等多種生物樣品中的D型氨基酸和胍基丁胺的測(cè)定。本論文的研究工作主要分為以下幾個(gè)部分： 1. 在總結(jié)前人工作的基礎(chǔ)上，自行設(shè)計(jì)、組

4、裝一套新型的毛細(xì)管電泳光導(dǎo)纖維發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光檢測(cè)裝置，并對(duì)此裝置的性能進(jìn)行了考察。結(jié)果表明該裝置具有儀器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、組裝費(fèi)用低、操作方便、能耗低、靈敏度高等特點(diǎn)。 2. 在自組裝毛細(xì)管電泳光導(dǎo)纖維發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光檢測(cè)裝置上，采用毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜分離模式，完成了D/L-丙氨酸的手性分離。并且考察了膠束濃度、環(huán)糊精濃度、緩沖溶液濃度及其pH值等各種影響D/L-丙氨酸手性分離的條件。在優(yōu)化的條件下，采用光導(dǎo)纖維發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光

5、檢測(cè)，D-丙氨酸和L-丙氨酸的檢出限分別達(dá)到了3.9×10-9 mol/L和3.2×10-9 mol/L。并將此體系應(yīng)用到正常人血漿中D-丙氨酸含量的測(cè)定，其結(jié)果在1.61-2.46 μmol/L范圍，與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果一致。 3. 建立了毛細(xì)管區(qū)帶電泳光導(dǎo)纖維發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光檢測(cè)胍基丁胺的新方法?？疾炝吮尘半娊赓|(zhì)溶液濃度及其pH值等條件對(duì)分離和熒光強(qiáng)度的影響。在確定的最佳條件下，胍基丁胺的檢出限為4.1×10-9 mol/L。

6、將該方法應(yīng)用于人血漿、尿液以及大鼠腦和胃組織中胍基丁胺含量的測(cè)定，其結(jié)果與報(bào)道的采用高效液相色譜法的測(cè)定結(jié)果一致。表明該方法具有分析速度快、測(cè)定靈敏度高的等特點(diǎn)。 4. 運(yùn)用毛細(xì)管電泳光導(dǎo)纖維發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光檢測(cè)裝置，建立了D/L-Glu和D/L-Asp手性分離測(cè)定的新方法。采用環(huán)糊精修飾的膠束電動(dòng)色譜分離模式，優(yōu)化了有機(jī)添加劑濃度、環(huán)糊精濃度、十二烷基硫酸鈉濃度、和背景電解質(zhì)溶液濃度等對(duì)分離的影響，在最佳條件下，兩對(duì)對(duì)映體同