簡(jiǎn)介：CHIPEHIP技術(shù)篩選胃癌相關(guān)抑制基因及其表遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制的研究RESEARCHOFSUPPRESSORGENESANDTHEIRRELATEDEPIGENETICREGULATORYMECHANISMBYCHIPCHIPINGASTRICCARCINOMA導(dǎo)二級(jí)學(xué)科肚疸堂論文課題起止時(shí)間2Q12生蘭旦二至Q壘生蘭旦中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧2014年5月目錄一、摘要中文論著摘要1英文論著摘要5二、英文縮略語(yǔ)9三、論文論文一前言10一日U茜材料和方法1L結(jié)果19討論21結(jié)論22論文二前言23日Ⅱ舌23材料和方法24結(jié)果31討論36結(jié)論39論文三前言40日U菁40材料和方法41結(jié)果52討論64結(jié)論67四、參考文獻(xiàn)68五、本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)74

簡(jiǎn)介：背景房顫是臨床最常見(jiàn)的心律失常，是導(dǎo)致腦卒中在內(nèi)的其他心血管并發(fā)癥的主要病因之一，對(duì)其發(fā)病機(jī)制的探索尚無(wú)定論。既往報(bào)道了多個(gè)基因和房顫的發(fā)病相關(guān)，如KCNQ1，KCNE2，KCNJ2，KCNH2，GJA5，ANP等。但由于房顫具有明顯的遺傳異質(zhì)性，不同患者可能具有不同的致病基因，因此有必要從孤立性房顫入手，研究房顫潛在的遺傳機(jī)制。目前人們認(rèn)為肺靜脈肌袖是引發(fā)和維持房顫的常見(jiàn)異位起源點(diǎn)。PITX2、NKX25是和心臟發(fā)育相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，同時(shí)也和肺靜脈肌袖發(fā)育相關(guān)。TBX5作為一個(gè)和心臟發(fā)育密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，其突變導(dǎo)致心手綜合征。但有研究發(fā)現(xiàn)在一個(gè)心手綜合征家系中，TBX5的突變多在伴有心手綜合征的房顫患者上發(fā)現(xiàn)。房顫群體關(guān)聯(lián)分析研究也提示TBX5和房顫的發(fā)病相關(guān)。故PITX2、NKX25和TBX5基因作為房顫的候選基因，可能在房顫的發(fā)病過(guò)程中起到了重要作用。目的尋找PITX2、NKX25、TBX5基因突變和房顫發(fā)病之間的關(guān)系，并研究其具體作用機(jī)制，為房顫的基因治療提供更充分的證據(jù)。方法收集187個(gè)孤立性房顫患者和200名無(wú)血緣關(guān)系的正常對(duì)照者靜脈血，并提取血液DNA。以PITX2、NKX25、和TBX5基因作為候選基因，采用聚合酶鏈反應(yīng)單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析并對(duì)發(fā)現(xiàn)異常者直接進(jìn)行測(cè)序，通過(guò)軟件對(duì)測(cè)序圖進(jìn)行分析。對(duì)發(fā)現(xiàn)的突變進(jìn)行保守性分析，并選擇保守性較好的突變R355C通過(guò)定點(diǎn)突變方法構(gòu)建突變型TBX5R355C質(zhì)粒，通過(guò)同源重組策略構(gòu)建野生型TBX5WT和突變型TBX5R355C腺病毒感染大鼠心房肌細(xì)胞，檢測(cè)突變型TBX5R355C是否調(diào)節(jié)其下游信號(hào)分子CX40和ANP的表達(dá)，并檢測(cè)是否影響心房結(jié)構(gòu)蛋白MHCΑ，MLC2A，MLC2V；并通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)得到突變型TBX5R355CRNA注射斑馬魚(yú)，觀察野生型TBX5WT和突變型TBX5R355C斑馬魚(yú)的表型，并通過(guò)多導(dǎo)電生理記錄儀采集斑馬魚(yú)的心電圖，觀察注射突變型TBX5R355C的斑馬魚(yú)是否有房顫等房性心律失常。結(jié)果對(duì)于PITX2基因，在2名房顫患者分別發(fā)現(xiàn)了位于內(nèi)含子區(qū)域的新改變G766CA和位于5’UTR區(qū)域的新改變G8310CTC150CT；對(duì)于NKX25基因，在1名合并有預(yù)激綜合癥A型的陣發(fā)性房顫患者發(fā)現(xiàn)編碼區(qū)第393位的C堿基被T堿基替代，從而導(dǎo)致氨基酸序列的131位谷氨酸變成賴氨酸（E131K），該位點(diǎn)在哺乳動(dòng)物中普遍保守；對(duì)于TBX5基因，在5個(gè)孤立性房顫患者上發(fā)現(xiàn)了4個(gè)錯(cuò)義突變C1063CTPR355CC1115CTPS372LC1127AGPQ376RC1283GTPA428S這4個(gè)錯(cuò)義突變?cè)诓溉閯?dòng)物中保守性較好。200名正常對(duì)照中未發(fā)現(xiàn)上述堿基改變。感染了突變型TBX5R355C腺病毒的大鼠心房肌細(xì)胞，其CX40和ANP蛋白表達(dá)明顯高于野生型TBX5WT，但心房結(jié)構(gòu)蛋白MHCΑ，MLC2A，MLC2V的表達(dá)未受到影響。而注射有突變型TBX5R355CRNA的斑馬魚(yú)也顯示出心房顫動(dòng)的表型，其心電圖也記錄到心房顫動(dòng)或房速等房性心律失常的波形，并且斑馬魚(yú)的心臟結(jié)構(gòu)正常。結(jié)論在中國(guó)孤立性房顫患者中發(fā)現(xiàn)影響肺靜脈肌袖發(fā)育基因PITX2的非編碼區(qū)改變、NKX25的編碼區(qū)改變、及心臟發(fā)育相關(guān)基因TBX5的編碼區(qū)突變。功能研究揭示心臟發(fā)育相關(guān)基因TBX5的突變可不影響心臟結(jié)構(gòu)，并引起心臟電生理的異常，導(dǎo)致孤立性房顫。從而為我們進(jìn)一步理解房顫的發(fā)病機(jī)制提供新的啟示。

簡(jiǎn)介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文先天性眼球震顫家系與先天性腎病綜合征家系的遺傳學(xué)分析姓名胡珺潔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)遺傳學(xué)指導(dǎo)教師鄔玲仟；梁德生；潘乾20110608碩士學(xué)位論文中文摘要第二部分先天性腎病綜合征家系的遺傳學(xué)分析背景患有先天性腎病綜合征CONGENITAJNEPHROTICSYNDROME，CNS的嬰兒約40％由舢』突變引起。由腳J『突變導(dǎo)致芬蘭型先天性腎病綜合征FIRULISHCONGENITALNEPHROTIC，CNF，是一種常見(jiàn)的CNS。CNF發(fā)病早，多于3個(gè)月內(nèi)發(fā)病，病程重，主要表現(xiàn)為蛋白尿等。在芬蘭，其發(fā)病率為1／8200新生活嬰，其它國(guó)家發(fā)病率較’低，國(guó)內(nèi)尚無(wú)此病發(fā)病率的報(bào)道。CNF目前除腎移植外尚無(wú)有效治療方法，因此有必要進(jìn)行基因診斷和產(chǎn)前診斷以預(yù)防患兒的出生。目的對(duì)曾生育2例先天性腎病綜合征患兒的夫婦進(jìn)行相關(guān)基因突變分析，并對(duì)高危胎兒進(jìn)行產(chǎn)前診斷。方法應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)PCR和DNA測(cè)序的方法，對(duì)該夫婦的腳，和M％∞進(jìn)行突變檢測(cè)；對(duì)測(cè)序發(fā)現(xiàn)的性質(zhì)未知的堿基改變?cè)谔杭罢Ｈ巳褐羞M(jìn)行進(jìn)一步檢查。結(jié)果檢測(cè)到孕婦腳J7基因在17號(hào)外顯子上存在1個(gè)未見(jiàn)報(bào)道的錯(cuò)義突變C2225CT；丈夫刪J7基因在20號(hào)外顯子也存在一個(gè)未見(jiàn)報(bào)道的無(wú)義突變C2783CA；胎兒與50例家系外正常人均未發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)突變。朋喟磁基因未發(fā)現(xiàn)致病突變。結(jié)論錯(cuò)義突變C2225CT和無(wú)義突變C2783CA是嗍SJ基因的兩個(gè)新發(fā)致病突變胎兒未遺傳這兩個(gè)突變位點(diǎn)，出生后不會(huì)患與這兩個(gè)突變相關(guān)的先天性腎病綜合征。關(guān)鍵詞芬蘭型先天性腎病綜合征，腳J『，基因突變，產(chǎn)前診斷Ⅱ

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多一個(gè)特發(fā)性Brugada綜合征心電圖征家系的分子遺傳學(xué)分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：第一部分新型多發(fā)性骨性連接綜合征致病基因的定位與功能研究多發(fā)性骨性連接綜合征SYNS是一類罕見(jiàn)的骨關(guān)節(jié)發(fā)育不全綜合征呈常染色體顯性遺傳表現(xiàn)為多處關(guān)節(jié)強(qiáng)直或融合多發(fā)性骨性連接綜合征存在遺傳異質(zhì)性迄今已報(bào)道的多發(fā)性骨性連接綜合征有二種類型均為常染色體顯性遺傳病分別為由17號(hào)染色體的NOG基因突變引起的SYNS1MIM186500型和20號(hào)染色體的生長(zhǎng)分化因子5基因突變引起的SYNS2MIM610017型本研究報(bào)道的家系來(lái)自青海省一個(gè)由五代共58人組成的SYNS大家系呈顯性遺傳具有與以往國(guó)內(nèi)外報(bào)道相同的臨床表型本研究對(duì)這一SYNS大家系進(jìn)行了候選基因連鎖分析和測(cè)序分析排除了由NOG基因和GDF5基因致病的可能性為此提出SYNS存在第三種遺傳異質(zhì)性并命名為SYNS3型經(jīng)全基因組掃描和單倍型分析將致病基因定位在13Q11Q12并通過(guò)精細(xì)定位將范圍縮小至D13S175D13S221之間約86MB其中D13S1236的LOD值最高為370Θ00這一范圍包括22個(gè)己知的候選基因通過(guò)文獻(xiàn)檢索候選基因的功能發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9FIBROBLASTGROWCHFACT9FGF9參與骨發(fā)育過(guò)程對(duì)家系成員的FGF9基因進(jìn)行突變檢測(cè)在所有病人中發(fā)現(xiàn)了該基因的突變而在正常家系成員中未發(fā)現(xiàn)在100個(gè)無(wú)血緣關(guān)系的人群中也未發(fā)現(xiàn)FGF9基因突變因此這一家系的SYNS是由FGF9基因突變導(dǎo)致這是首次在人類中發(fā)現(xiàn)該基因突變也是第一次發(fā)現(xiàn)FGF9是第三個(gè)與SYNS有關(guān)的基因FGF9基因是成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族的成員之一共有3個(gè)外顯子組成產(chǎn)生一種含208個(gè)氨基酸的分泌性糖蛋白突變發(fā)生在FGF9蛋白的一個(gè)保守的氨基酸基序上EFISIA該基序?qū)GF9蛋白的分泌及與受體結(jié)合具有重要作用在COS7細(xì)胞中轉(zhuǎn)染正常及突變FGF9CDNA培養(yǎng)上清中檢測(cè)到突變FGF9蛋白的表達(dá)證實(shí)突變并未阻礙FGF9蛋白的分泌蛋白質(zhì)三維模擬MOLPROGRAM顯示突變后的FGF9蛋白與其受體FGFR3IIIC的結(jié)合更為緊密用正常及突變FGF9作用大鼠顱骨問(wèn)充質(zhì)細(xì)胞株RCJ31C518軟骨細(xì)胞前體和新生小鼠肋軟骨細(xì)胞顯示在軟骨增殖階段突變FGF9促進(jìn)軟骨的增殖能力弱于正常FGF9阿利辛蘭ALCIANBLUE染色也證實(shí)突變FGF9作用的軟骨細(xì)胞的染色低于正常對(duì)照這些結(jié)果提示FGF9的突變可能減少了成熟軟骨細(xì)胞的數(shù)量檢測(cè)小鼠關(guān)節(jié)FGF9的表達(dá)顯示FGF9在生長(zhǎng)板的增殖區(qū)和肥大區(qū)軟骨中表達(dá)因此突變FGF9可能通過(guò)影響軟骨細(xì)胞的增殖及終末分化進(jìn)而影響了軟骨內(nèi)骨化的過(guò)程最終導(dǎo)致骨關(guān)節(jié)融合為進(jìn)一步研究FGF9在SYNS3型發(fā)生中的作用本研究建立了在軟骨組織中特異性表達(dá)正常及突變FGF9CDNA的轉(zhuǎn)基因小鼠為在體研究提供實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷诙糠秩N單基因遺傳病的遺傳學(xué)分析一、COLLA1基因新的剪接突變導(dǎo)致I型成骨不全成骨不全OSTEOGENESISIMPERFECTAOI是一種常染色體顯性遺傳病以骨脆性增加及結(jié)締組織異常為特點(diǎn)90﹪的病人是由編碼I型膠原鏈的COLLA1和COLLA2基因突變所引起的兩個(gè)基因分別由51個(gè)和52個(gè)外顯子組成本研究對(duì)國(guó)內(nèi)一個(gè)成骨不全家系進(jìn)行基因突變檢測(cè)及突變效應(yīng)分析為研究中國(guó)人群成骨不全基因突變的特點(diǎn)提供線索通過(guò)對(duì)成骨不全I(xiàn)型膠原基因COLLA1和COLLA2所在的17號(hào)染色體和7號(hào)染色體分別進(jìn)行連鎖分析對(duì)致病基因做初步判斷由于OI基因突變位點(diǎn)與臨床表型有一定相關(guān)根據(jù)家系病人臨床表現(xiàn)選擇部分致病基因外顯子進(jìn)行初步突變篩選發(fā)現(xiàn)該家系所有患者在COL1A1基因的第8個(gè)內(nèi)含子剪切受體位點(diǎn)處發(fā)生AG→GGIVS82AG對(duì)比人類Ⅰ型和Ⅲ型膠原突變數(shù)據(jù)庫(kù)HUMANTYPETYPECOLLAGENMUTATIONSDATABASE和人類基因組突變數(shù)據(jù)庫(kù)HUMANGENOMEMUTATIONSDATABASE以及文獻(xiàn)檢索未發(fā)現(xiàn)關(guān)于該突變的報(bào)道本研究結(jié)合病人臨床表型首先選取部分外顯子進(jìn)行突變篩查這種策略為OI的致病基因突變篩查提供了一個(gè)新的思路表現(xiàn)型與突變類型的相關(guān)性研究對(duì)產(chǎn)前診斷及基因治療具有一定參考價(jià)值二、Ⅰ型糖原累積癥家系的分子遺傳學(xué)分析Ⅰ型糖原累積癥GSDIA；MIM232200是常染色體隱性遺傳病是由葡萄糖6磷酸酶GLUCOSE6PHOSPHATASEG6PASE缺陷引起目前已有80多種突變類型被報(bào)道不同種族有不同的突變熱點(diǎn)G6PASE基因第5外顯子是突變高發(fā)區(qū)域本研究在一個(gè)GSDIA家系發(fā)現(xiàn)一新的突變提取病人及其父母和家系中其他正常人的外周血基因組DNA擴(kuò)增G6PASE基因編碼區(qū)并直接測(cè)序結(jié)果顯示病人為第5外顯子發(fā)生復(fù)合性突變第727位核苷酸發(fā)生GT顛換727GT同時(shí)第1071位核苷酸發(fā)生CA顛換使第331位氨基酸由丙氨酸突變?yōu)楣劝彼酇331E第5外顯子727GT是中國(guó)人中常見(jiàn)的突變類型而A331E突變?yōu)槭状螆?bào)道這一復(fù)合基因突變的發(fā)現(xiàn)豐富了中國(guó)人G6PASE基因突變譜并又一次證實(shí)中國(guó)人的突變熱點(diǎn)區(qū)域在第5外顯子為縮小G6PASE基因突變篩查范圍提供了依據(jù)三、老年高膽固醇血癥人群中PCSK9基因序列變異的研究高膽固醇血癥是常見(jiàn)的復(fù)雜性疾病其中一部分是由單基因突變所致而大多數(shù)是多個(gè)基因和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果本研究使用PCR產(chǎn)物測(cè)序方法對(duì)PCSK9基因外顯子、外顯子一內(nèi)含子交界區(qū)及5UTR區(qū)、3UTR區(qū)進(jìn)行測(cè)序綜合正反向測(cè)序結(jié)果以識(shí)別和鑒定基因內(nèi)的各種序列變異所測(cè)PCSK9基因片段總長(zhǎng)度5548個(gè)堿基有22個(gè)SNP其中有5個(gè)SNP為首次報(bào)道在首次報(bào)道的SNP中發(fā)生氨基酸改變的有2個(gè)R93C、A168V另外已報(bào)道與LDLC水平有相關(guān)性的1474V及E670G在該群體中也有發(fā)現(xiàn)此次篩查為進(jìn)一步研究這些變異在中國(guó)老年高膽固醇血癥群體中與LDLC水平的相關(guān)性提供了線索

簡(jiǎn)介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文一繞核性白內(nèi)障家系的遺傳學(xué)研究姓名金怡萍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)眼科臨床指導(dǎo)教師褚仁遠(yuǎn)200151ABSTRUCTOBJECTTOINVESTIGATETHEHEREDITARYANDCLINICALCHARACTERISTICOFHEREDITARYLAMELLARCATARACT，THENTRYTOMAKECLEARTHEPATHOGENYOFTHISCONGENITALDISEASEBASEDTHEMOLECULEGENETICSMETHODWEENCOUNTEREDAFIVEGENERATIONCHINESEFAMILYWITHLAMELLARCATARACTINTHISFAMILY1I3MEMBERSWEREAFFECTEDWEPERFORMEDTHEELINICALEXAMINATIONNCLUDEVISNALACUITYSLIT1APEXAMINATIONOCULARFUDUSEXAMINATIONANDASCANCALIBRATIONTWOOPAQUELENSWEREEXTRACTEDFORTHEPATHOLOGICALOBSERVATIONUSEDTHEPEDIGREEANALYSISANDSEGREGATIONANALYSISTOCONFIRMTHEHEREDITARYMODEOFTHISCATARACTPEDIGREEATIEREXTRACTTHEGENOMICDNAWEDIDTHELINKAGEANALYSISBYSEVERALMICROSATELLITEMARKERSTOIDENTIFYTTLECHROMOSOMELOCATIONFINALLYWESCREENEDTHECANDIDATEGENESINAREAWEIDENTIFIEDTHROUGHTHEPCRSSCPANDDNASEQUENCEBYCAPILLARYELETROPHORESISRESULTTHELENSOPACITYINTHISPEDIGREEWASTHETYPICALCHANGEOFLAMELLARSHOWEDPERINUCLEARSHAPEDWITHATRANSPARENTEMBRYONICNUCLEUS，WITHOUTGENERALANDOTHEROCULARDISORDERSTHEVISUALACUITYINFLUENCEWASMIDDIETHEPATHOLOGYSTUDYSHOWEDTHEREALESEVERALBASOPHILICGRANULESEPARATEDINTHEOPACITYAREAWHICHSUGGESTEDTHECHANGEMAYHAPPENINCERTAINPERIODDURINGTHEEMBRYODEVELOPMENTFROMTHELINKAGEANALYSIS，WEMAPPEDTHISCATARACTTOA511CMRE西ONBETWEENM8M14ONCHROMOSOME16Q22DURINGTHEGENESCREENSTUDY1WEEXCLUDEDTHE8GENESEXPRESSEDINTHEEYEINTHISAREAHOWEVERATTHESAMETIMEWEALSOFOUND4SNPSEQUENCEIN3OFTHESEGENESCONCLUSIONFROMOURVARIOUSSTUDIES，WECONFIRMTHECLINICALANDHEREDITARYCHARACTERISTICOFHEREDITARYLAMELLARCATARACTANDMAKEGREATPROGRESSONTHEPATHOLOGYSTUDYBASEDONMOLECULEGENETICSTHEFURTHERSTUDYWILLIDENTIFYTHEDEFECTEDGENEOFTHELAMELLARCATARACT，ANDMAKEITPOSSIBLEFORGENEDIAGNOSISANDGENETHERAPYKEYWORDSCONGENTICALCATARACTGENETICS，LINKAGE，PATHOLOGYSEGREGATIONANALYSIS

簡(jiǎn)介：研究背景多種?；o酶A脫氫酶缺乏癥MULTIPLEACYLCOADEHYDROGENASEDEFICIENCYMADD，OMIM＃231680，又稱戊二酸尿癥Ⅱ型（GLUTARICACIDURIATYPEⅡ，GAⅡ），屬常染色體隱性遺傳，該病以脂肪酸、氨基酸及膽堿的代謝紊亂為特征，主要是由于編碼線粒體中電子傳遞黃素蛋白（ELECTRONTRANSFERFLAVOPROTEIN，ETF）的ETFAOMIM＃608053、ETFBOMIM＃130410基因或編碼電子傳遞黃素蛋白泛醌氧化還原酶ETFUBIQUINONEOXIDEDUCTASE，ETF∶QO的電子傳遞黃素蛋白脫氫酶ELECTRONTRANSFERFLAVOPROTEINDEHYDROGENASE，ETFDH，OMIM＃231675基因發(fā)生突變所致。其臨床表現(xiàn)高度異質(zhì)，多數(shù)以近端肌無(wú)力起病，并伴有消化道癥狀及代謝酸中毒。部分MADD患者核黃素治療有顯著療效，稱為核黃素反應(yīng)性MADDRIBOFLAVINRESPONSIVEMADD，RRMADD。最近研究發(fā)現(xiàn)，幾乎所有的RRMADD患者的責(zé)任突變均出現(xiàn)在ETFDH基因。在此，我們對(duì)兩晚發(fā)型RRMADD家系的臨床、病理及分子生物特征進(jìn)行研究。目的探討多種酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥兩家系的臨床、病理、分子遺傳學(xué)及治療預(yù)后的特征，并對(duì)其臨床表現(xiàn)型及基因型關(guān)系進(jìn)行分析。對(duì)象與方法該項(xiàng)研究中涉及的3位MADD患者分別來(lái)自兩個(gè)獨(dú)立家系，均為山東大學(xué)附屬千佛山醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科臨床病例。通過(guò)臨床表現(xiàn)及病理初步診斷，并對(duì)其中患者1和3（不同家系）進(jìn)行了血?；鈮A及尿有機(jī)酸分析。后提取患者肌肉組織基因組DNA，PCR擴(kuò)增后，分別對(duì)ETFA、ETFB和ETFDH基因進(jìn)行突變檢測(cè)，得知測(cè)序結(jié)果后，隨訪采集兩個(gè)家系的血液標(biāo)本，對(duì)家系1中3代7人、家系2中3代5人進(jìn)行相應(yīng)基因突變檢測(cè)，同時(shí)檢測(cè)75位健康對(duì)照者的相關(guān)基因，以探討基因突變型和臨床表現(xiàn)型間的關(guān)系。另采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法分別分析患者及正常對(duì)照者的肌肉細(xì)胞及外周血淋巴細(xì)胞中的ETF∶QO蛋白含量，分析其治療前后目的蛋白變化，對(duì)核黃素作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。結(jié)果1該研究中兩家系3位患者，發(fā)病年齡分別為45歲（患者1）、19歲（患者2）和17歲（患者3）。均以雙下肢無(wú)力起病，后肌無(wú)力逐漸加重且累及范圍逐漸加大，以肢帶肌、脊旁肌、頸肌、頭面肌及四肢近端肌為主，均伴有明顯肌萎縮，伴或不伴有肌肉疼痛。三位患者均不喜食肉。肌酶譜明顯增高，其中三者均有LDH增高，另外分別伴有CK、AST或HBDH增高。肌電圖示肌源性損害或正常。對(duì)單一核黃素治療有顯著療效。2肌活檢病理結(jié)果顯示，HE染色肌纖維大小不等，異常纖維呈空泡和或篩狀改變，ORO染色見(jiàn)大小不等、密集程度不一的紅染脂滴，NADH染色可見(jiàn)深藍(lán)色顆粒不均勻沉積，上述改變均以Ⅰ型肌纖維為主。3患者1和3尿有機(jī)酸及血?；鈮A分析結(jié)果分別提示符合戊二酸尿癥Ⅱ型和多種?；o酶A脫氫酶缺乏癥的診斷。43位患者均存在ETFDH基因的復(fù)合雜合突變。本研究發(fā)現(xiàn)4個(gè)新突變患者1分別為一雜合錯(cuò)義突變C1522C＞APP508T及一雜合移碼突變C1583_1584INSAPN528KFSX3患者2、3為一雜合錯(cuò)義突變C242T＞CPL81P及一剪切突變CIVS57A＞G。上述突變?cè)?5位對(duì)照者的150個(gè)等位基因中未被發(fā)現(xiàn)。ETFA及ETFB基因未發(fā)現(xiàn)突變。5ELISA檢測(cè)結(jié)果示發(fā)病期間，患者肌肉細(xì)胞中ETF∶QO含量比正常對(duì)照低50％左右P＜001而治愈后患者外周血淋巴細(xì)胞中ETF∶QO含量略高于正常對(duì)照者P＜001。結(jié)論本研究?jī)杉蚁祷颊吲R床表現(xiàn)主要為肌無(wú)力，可累及肢帶肌、脊旁肌、頸肌、頭面肌及四肢近端肌肌肉病理示脂滴沉積血尿生化分析可初步診斷該病基因測(cè)序檢出ETFDH基因的4個(gè)新發(fā)突變，支持RRMADD突變位于ETFDH基因論點(diǎn)ELISA結(jié)果提示核黃素治療可一定程度增加患者ETF∶QO蛋白穩(wěn)定性。單一核黃素治療對(duì)該病有顯著療效。

簡(jiǎn)介：本文探索RH新生兒溶血病和脆性X綜合征兩種單基因疾病在胚胎植入前的遺傳學(xué)檢測(cè)方法。方法1RH新生兒溶血病1采用PCR方法檢測(cè)表型為RH和RH的重慶人的基因型；2采用巢式PCR方法檢測(cè)單個(gè)淋巴細(xì)胞和單個(gè)卵裂球細(xì)胞RH基因型，以建立適當(dāng)?shù)腞H新生兒溶血病植入前遺傳學(xué)檢測(cè)方法。2脆性X綜合征1采用PCR方法檢測(cè)智力正常的重慶人FMR1基因CGGN拷貝數(shù)；2采用巢式PCR方法檢測(cè)單個(gè)淋巴細(xì)胞和單個(gè)卵裂球細(xì)胞FMR1基因CGGN拷貝數(shù)。研究表明本課題所建立的兩種巢式PCR方法靈敏、特異、簡(jiǎn)單、迅速，可用于RH新生兒溶血病和脆性X綜合征等疾病的植入前遺傳學(xué)檢測(cè)。

簡(jiǎn)介：結(jié)核菌藥物依賴現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)，給結(jié)核病的防治又提出新的挑戰(zhàn)。結(jié)核菌藥物依賴，則意味著臨床繼續(xù)使用該藥不但治療無(wú)效，而且在一定條件下可能促進(jìn)病原菌生長(zhǎng)繁殖，使病情加重。因此對(duì)結(jié)核菌藥物依賴現(xiàn)象進(jìn)行研究已刻不容緩。目前藥物依賴現(xiàn)象研究的瓶頸在于這種依賴性在體外不能穩(wěn)定傳代，因此本研究挑選依賴?yán)Ｆ浇Y(jié)核菌進(jìn)行體外連續(xù)傳代實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明其藥物依賴性可穩(wěn)定遺傳約30代。將經(jīng)傳代依賴性完全消失的結(jié)核菌懸液尾靜脈注射感染小鼠，以不同頻率給予利福平灌胃，觀察到部分結(jié)核菌恢復(fù)依賴性。依賴菌所致肺結(jié)核以病情重、耐多藥、化療效果差和預(yù)后不良為主要臨床特征，遠(yuǎn)比一般耐藥病例危害大。已知結(jié)核分枝桿菌利福平依賴株和耐受株的RPOB基因突變高發(fā)位點(diǎn)基本相同，DNA指紋類型及分布亦無(wú)明顯特殊性，表明前者的變異主要為表型變異。因此，依賴現(xiàn)象的獨(dú)特表現(xiàn)可能僅源于基因表達(dá)差異。本研究從蛋白水平著手，優(yōu)化了結(jié)核分枝桿菌的蛋白質(zhì)組分析中的二維凝膠電泳技術(shù)，并用于分析利福平依賴株和耐受株總蛋白質(zhì)的差異，獲得了利福平依賴株和耐受株總蛋白質(zhì)表達(dá)譜，鑒定8個(gè)顯著差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，獲得7種蛋白質(zhì)3氧酰基?；d體蛋白合酶3OXOACYLACPSYNTHASE、抗原85BA鏈CHAINA，AG85B、烯醇基輔酶A水解酶ECH、跨膜絲蘇氨酸蛋白激酶DSTPKD、假想轉(zhuǎn)移酶PUTATIVETRANSFERASE、3酮酸輔酶A轉(zhuǎn)移酶Β亞單位ΒSUBUNIT，SCOB、熱休克蛋白HSPX，初步討論了藥物依賴現(xiàn)象的分子機(jī)制。運(yùn)用比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法有助于研究藥物依賴結(jié)核菌的蛋白質(zhì)表達(dá)譜及差異表達(dá)的蛋白質(zhì)分子，為進(jìn)一步探尋結(jié)核菌藥物依賴性的發(fā)生發(fā)展奠定基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文急性髓細(xì)胞白血病的遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)機(jī)制研究姓名施靜藝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（血液?。┲笇?dǎo)教師陳賽娟陳竺20080501失。取8例正常對(duì)照CDNA進(jìn)行測(cè)序比對(duì)，發(fā)現(xiàn)正常個(gè)體中也存在高頻的VDR基因堿基缺失，MLL基因第8和第LO外顯子的缺失。雖然缺失所導(dǎo)致的功能變化還有待進(jìn)一步探討，但猜測(cè)這些堿基缺失所致的編碼改變可能來(lái)自基因不同的選擇性剪切轉(zhuǎn)錄本。NPML突變?cè)贏ML中的發(fā)生頻率為235％，在核型正?；颊咧械念l率為36％，突變中的90％來(lái)自于M4和M5患者，提示NPML突變?cè)谶@些類型白血病的發(fā)生機(jī)制中有著重要作用。多數(shù)人類白血病，包括急性髓系白血病具有染色體基因組不穩(wěn)定的特征，如染色體易位、缺失、倒位等，與白血病的發(fā)生、分類、治療和預(yù)后具有密切的聯(lián)系。DNA雙鏈斷裂的產(chǎn)生和不正確修復(fù)是導(dǎo)致DNA重組和變異的原因之一，DNA修復(fù)功能的異常還可以使腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物產(chǎn)生耐藥性。論文的第二部分針對(duì)修復(fù)途徑中的一些重要基因，結(jié)合SNP數(shù)據(jù)庫(kù)和突變報(bào)道，對(duì)16個(gè)基因總共44個(gè)SNP或突變?cè)?80例血液腫瘤標(biāo)本和500例正常對(duì)照組間通過(guò)MASSARRAY質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行基因型分析。病例一對(duì)照組間雖未找到與疾病發(fā)生相關(guān)的SNP，但在患者預(yù)后數(shù)據(jù)分析中發(fā)現(xiàn)ATMH1380Y基因型與化療療效具有相關(guān)性P005，ATM4138CT基因型患者療效較差，總體生存期也較ATM4138CC基因型患者明顯縮短P0028。AML的分子發(fā)病機(jī)制，通常認(rèn)為由兩類突變或基因重排共同作用引起，最終通過(guò)抑癌基因的失活，癌基因的激活等途徑導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。目

簡(jiǎn)介：目的本課題通過(guò)在胰島素基因特異性啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下在胰島Β細(xì)胞表達(dá)硝基還原酶融合性綠色熒光蛋白（INSGFPNTR），利用細(xì)菌硝基還原酶NITREDUCTASENTRENZYME將甲硝唑METRONIDAZOLEMTZ轉(zhuǎn)變成細(xì)胞毒素DNA交聯(lián)劑，從而特異性介導(dǎo)胰島Β細(xì)胞破壞，并在此基礎(chǔ)上建立活體內(nèi)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)甲硝唑?qū)D(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)胰島Β細(xì)胞破壞的定量分析體系。方法選用AB系INSGFPNTR轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)的F1或F2代的胚胎，在受精后24小時(shí)（24HPF）、36小時(shí)（36HPF）和48小時(shí)（48HPF）分別在5MM、75MM、10MM和15MM濃度的甲硝唑溶液中孵育24、36和48小時(shí)，利用熒光顯微鏡觀察胰島Β細(xì)胞熒光表達(dá)的情況，同時(shí)應(yīng)用全胚胎原位雜交方法進(jìn)一步在分子水平上證實(shí)并定量胰島Β細(xì)胞破壞的程度。結(jié)果與正常對(duì)照組相比，在5MM、75MM、10MM和15MM濃度的甲硝唑中孵育的斑馬魚(yú)胰島Β細(xì)胞熒光表達(dá)均有減弱甚至消失，其中在受精后36小時(shí)（36HPF）加10MM濃度的甲硝唑并孵育36小時(shí)導(dǎo)致熒光明顯消失，并且畸形率和死亡率較低，相對(duì)于其他組效果明顯；受精后24小時(shí)（24HPF）、36小時(shí)（36HPF）和48小時(shí)（48HPF）分別在5MM、75MM、10MM和15MM濃度的甲硝唑中孵育24小時(shí)熒光減弱不明顯；孵育48小時(shí)雖然熒光基本消失但死亡率和畸形率較高；原位雜交結(jié)果基本上與GFP熒光表達(dá)相符合。結(jié)論（1）硝基還原酶甲硝唑NTRMET系統(tǒng)可以特異性地破壞轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)體內(nèi)的胰島Β細(xì)胞（2）與其它受精后時(shí)間和甲硝唑孵育時(shí)間相比，轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)胚胎在受精后36小時(shí)（36HPF）10MM濃度的甲硝唑中孵育36小時(shí)熒光減弱明顯甚至消失，并且畸形率和死亡率較低；（3）受精后36小時(shí)（36HPF）10MM濃度的甲硝唑中孵育36小時(shí)這一條件是創(chuàng)造胰島Β細(xì)胞破壞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)模型的理想條件（4）可示蹤轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)胰島Β細(xì)胞破壞模型的建立使高通量篩選具有胰島保護(hù)和再生作用藥物成為可能。

簡(jiǎn)介：人類胚胎干細(xì)胞來(lái)源于體外受精剩余的卵子，如果直接應(yīng)用于病人體內(nèi)屬于異體移植，不可避免的存在免疫排斥問(wèn)題。自體體細(xì)胞克隆獲得的干細(xì)胞治療性克隆，可解決免疫排斥問(wèn)題，且靈長(zhǎng)類已經(jīng)獲得成功。然而，克隆的人胚胎與受精人胚胎一樣具有發(fā)育為個(gè)體的潛力，殺死這種囊胚而獲得胚胎干細(xì)胞被部分人認(rèn)為是殺死人生命，同時(shí)這種可發(fā)展成為克隆人的技術(shù)受到民眾的普遍反對(duì)，一些國(guó)家如美國(guó)通過(guò)立法來(lái)禁止任何人胚胎的克隆研究，包括治療性克隆。而且，治療性克隆的高成本、低效率，使得迄今未有真正成功建系的報(bào)道。自體的成體干細(xì)胞既可避免免疫排斥問(wèn)題，又不存在倫理問(wèn)題，但是成體干細(xì)胞不如胚胎干細(xì)胞那樣具有無(wú)限增殖性及多能性，使其應(yīng)用范圍受到限制。這種孤雌胚胎干細(xì)胞因其可來(lái)自病人自體而不存在免疫排斥，具有治療性克隆的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)又因?yàn)楣麓瓢l(fā)育胚胎不存在自然發(fā)育為人生命個(gè)體的潛力，所以不存在如治療性克隆所面臨的倫理道德沖突。在當(dāng)前治療性克隆迄今未成并具嚴(yán)重倫理問(wèn)題的情況下，這種可避倫理問(wèn)題的人孤雌胚胎干細(xì)胞作為新型醫(yī)療干細(xì)胞受到極大關(guān)注。經(jīng)過(guò)卵母細(xì)胞孤雌激活的囊胚卻可以建立胚胎干細(xì)胞，已有報(bào)道利用這種囊胚建立了小鼠、非靈長(zhǎng)類猴子和人孤雌發(fā)育孤雌胚胎干細(xì)胞系。但是由于哺乳動(dòng)物印記基因表達(dá)的差異性，我們還不確定應(yīng)用這種單親來(lái)源的細(xì)胞能否有效地分化形成有功能的組織或器官，而且印記基因部分表達(dá)缺失、倍增甚至紊亂與人類許多遺傳疾病和腫瘤發(fā)生密切相關(guān)，所以孤雌胚胎干細(xì)胞在臨床應(yīng)用上的問(wèn)題還不容忽視。而孤雌胚胎干細(xì)胞的多能性與父本來(lái)源的印記基因的表達(dá)還很少有充分詳細(xì)的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)建立了多株孤雌胚胎干細(xì)胞系，其具有正常胚胎干細(xì)胞的特征，如核質(zhì)比較高，長(zhǎng)期傳代仍保持未分化狀態(tài)，且染色體核型正常，并表達(dá)ES細(xì)胞各種特異性標(biāo)志如OCT4和SSEA1，能致裸鼠畸胎瘤，且已通過(guò)嵌合體胚胎實(shí)驗(yàn)得到嵌合體小鼠。目前國(guó)內(nèi)外尚沒(méi)有印記基因與孤雌胚胎干細(xì)胞體內(nèi)分化效率相關(guān)關(guān)系的研究報(bào)道，我們通過(guò)RTPCR和亞硫酸氫鹽基因組測(cè)序的方法檢測(cè)了父母雙親來(lái)源的印記基因的表觀遺傳狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)父系來(lái)源的印記基因在孤雌胚胎干細(xì)胞中被激活，而母系來(lái)源的印記基因仍維持其正常狀態(tài)。這是由于孤雌胚胎干細(xì)胞存在兩條活躍的X染色體，降低了基因組整體甲基化水平。低甲基化又影響了印記基因的差異甲基化區(qū)，使沉默的父系來(lái)源印記基因激活，并隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增高。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，父系表達(dá)的印記基因與體內(nèi)分化效率存在著比較明顯的相關(guān)關(guān)系，即父系來(lái)源的印記基因的甲基化水平越低，其基因表達(dá)水平就越高，嵌合比例也越高。而母系表達(dá)的印記基因沒(méi)有這種明顯的相關(guān)關(guān)系。說(shuō)明孤雌胚胎干細(xì)胞的組織和器官的分化需要眾多父系來(lái)源印記基因的參與，盡管這在孤雌胚胎干細(xì)胞建立時(shí)不是必需的。小鼠孤雌胚胎干細(xì)胞系的建立為印記基因的表觀遺傳學(xué)研究提供了理想的模型，研究小鼠印記基因在孤雌胚胎干細(xì)胞分化中的相關(guān)關(guān)系及分子機(jī)制，對(duì)人類孤雌胚胎干細(xì)胞的臨床應(yīng)用具有重要理論和實(shí)踐意義。

簡(jiǎn)介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文甲狀腺乳頭狀癌形態(tài)學(xué)、免疫表型和分子遺傳學(xué)特征及其診斷價(jià)值的研究姓名朱曉麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師朱雄增20050401復(fù)日大學(xué)攻讀博士學(xué)位研究生畢業(yè)論文中文摘要甲狀腺乳頭狀癌形態(tài)學(xué)、免疫表型和分子遺傳學(xué)特征及其診斷價(jià)值的研究研究生朱曉麗導(dǎo)師朱雄增教授目的研究甲狀腺乳頭狀癌的形態(tài)學(xué)、免疫表型和分子遺傳學(xué)特征，并探討其對(duì)甲狀腺乳頭狀癌的診斷價(jià)值。方法收集155例甲狀腺乳頭狀癌PAP1LARYTHYROIDCARCINOMA，PTC和83例對(duì)照組濾泡性癌1L例、髓樣癌10例、未分化癌4例、濾泡性腺瘤21例、橋本甲狀腺炎20例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫17例病例的新鮮和石蠟包埋組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和CKL9，RET，GALECTIN～3和HB～I(xiàn)E一1等抗體的免疫組織化學(xué)染色。選其中66例PTC和36例對(duì)照組病例的新鮮和石蠟包埋組織，采用嵌套式RTPCR和DNA測(cè)序技術(shù)檢測(cè)野生型RET基因WTRET和RET／PTCL、3融合基因MRNA的表達(dá)，以看家基因PGK作為內(nèi)對(duì)照檢測(cè)RNA質(zhì)量。從PTC新鮮組織中提取DNA，利用長(zhǎng)距離PCR10NGDISTANCEPCR擴(kuò)增RET／PTC融合基因融合點(diǎn)附近的DNA片斷，進(jìn)行DNA測(cè)序并分析融合點(diǎn)附近的DNA序列特征。利用PCR擴(kuò)增BRAF基因的15號(hào)外顯子，并進(jìn)行DNA測(cè)序，檢測(cè)BRAF7“突變。以看家基因BACTIN作為內(nèi)對(duì)照檢測(cè)DNA質(zhì)量。結(jié)果1PTC與臨床病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系不伴淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎的PTC中164％18／110的病例發(fā)生局部浸潤(rùn)，高于伴有淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎的PTC中局部浸潤(rùn)發(fā)生率44％2／45PO05。2155例PTC中典型PTC74例47。7％，濾泡型7例45％，嗜酸細(xì)胞型9例58％，彌漫硬化型8例52％，高細(xì)胞型9例58％，實(shí)體型7例45％，透明細(xì)胞型L例06％，微癌40例258％。在典型PTC中年齡≥40歲的病例占77％57／74，明顯高于濾泡型PTC286％2／7和嗜酸細(xì)胞型PTC333％3／9P005。典型PTC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率554％41／74，明顯高于乳頭狀微癌275％11／40，但明顯低于高細(xì)胞型PTC100％9／9PO005。對(duì)134例PTC隨訪8一12年，回訪率313％42／134，5年生存率為100％13／13，10年生存率為966％28／29，死亡率為34％／29。2采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，CKL9，RET，GALECTIN一3和TTBMEL在PTC中的陽(yáng)性率分別為871％135／155，71O％1IO／155，91696142／155和955％148／155。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示PTC中四種標(biāo)記物的陽(yáng)性率和／或陽(yáng)性級(jí)別強(qiáng)中弱陽(yáng)性分級(jí)明顯高于對(duì)照組中的其他甲狀腺良惡性病變PO05。CKL9，RET和GALECTIN一3在橋本甲狀腺炎中的陽(yáng)性率高于濾

簡(jiǎn)介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文湖南鼻咽癌遺傳及環(huán)境危險(xiǎn)因素的流行病學(xué)研究姓名王浩申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)指導(dǎo)教師李碩頎20050501水果是鼻咽癌的保護(hù)性因素，OR值為0564，而有鼻咽癌家族史、主動(dòng)吸煙、被動(dòng)吸煙、嗜好醬辣椒、咸魚(yú)是鼻咽癌的危險(xiǎn)因素，OR值依次為11124、4703、2492、1556、1480。2病例組中16例有鼻咽癌家族史，對(duì)照組中2例有鼻咽癌家族史，OR值為800OR95％CI為23542728。病例組家族鼻咽癌發(fā)生率1103％，對(duì)照組家族鼻咽癌發(fā)生率138％，兩組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義X21089，P0000。3病例先證者一級(jí)，二及三級(jí)親屬和對(duì)照組親屬的鼻咽癌發(fā)生率分別為12705％、00627％和O0269％，表現(xiàn)為一級(jí)親屬二級(jí)親屬對(duì)照親屬的趨勢(shì)X2趨勢(shì)63393，P0OOO。4鼻咽癌的分離比為O0213～00465，一級(jí)親屬遺傳度為7074％士472％，二級(jí)親屬遺傳度為24690／社1531％，一、二級(jí)親屬聯(lián)合遺傳度加權(quán)平均值為6701％士472％。結(jié)論湖南鼻咽癌高發(fā)病因除與遺傳因素有關(guān)外，吸煙及生活飲食習(xí)慣在鼻咽癌的發(fā)生中也起一定的作用。鼻咽癌的遺傳模式遵循多基因遺傳，它的發(fā)生是由遺傳因素和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果，遺傳因素在鼻咽癌中的作用較大6701％472％，環(huán)境因素的作用較小。關(guān)鍵詞鼻咽癌，危險(xiǎn)因素，條件LOGISTIC回歸，分離比，遺傳度

簡(jiǎn)介：MRKH綜合征的病因分子遺傳學(xué)研究學(xué)校代碼10023學(xué)號(hào)200501020專業(yè)年級(jí)北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)2005級(jí)姓名孫之星導(dǎo)師朱蘭教授北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科聯(lián)合導(dǎo)師張學(xué)教授北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)所醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)系完成日期2013年6月52致病性分析415215個(gè)基因分別的結(jié)構(gòu)及功能41522最可能的3個(gè)基因4853展望48第6章小結(jié)49第7章參考文獻(xiàn)。5L綜述MRKH綜合征的病因?qū)W研究進(jìn)展55附錄知情同意書(shū)樣本、倫理審核同意書(shū)61個(gè)人簡(jiǎn)歷65致謝67II