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簡(jiǎn)介：1被稱為卵磷脂的磷脂分子是（）A磷脂酰膽堿B磷脂酰乙醇胺C磷脂酰絲氨酸D鞘氨醇2生物膜的各種成分中不屬于雙親性分子的是（）A磷脂B膽固醇C跨膜蛋白D膜周邊蛋白3最簡(jiǎn)單的糖脂分子是（）A腦苷脂B神經(jīng)節(jié)苷脂C單半乳糖基甘油二酯D三半乳糖基甘油二酯4人體中多數(shù)細(xì)胞膜，其脂類與蛋白質(zhì)含量相比A脂類含量高很多B蛋白質(zhì)含量高很多C脂類和蛋白質(zhì)含量大致相等D僅含有脂類，不含有蛋白質(zhì)5最簡(jiǎn)單的磷酸甘油酯是（）A磷脂酸B磷脂酰膽堿C磷脂酰乙醇胺D磷脂酰絲氨酸E鞘氨醇6生物膜是指（）A細(xì)胞膜的另一種說(shuō)法B除線粒體膜以外的各種膜的總稱C內(nèi)膜系統(tǒng)的膜D細(xì)胞膜、細(xì)胞內(nèi)膜和線粒體膜的總稱7下列生物膜中蛋白質(zhì)/脂類比值最大的是（）A神經(jīng)髓鞘B人紅細(xì)胞膜C內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜D線粒體外膜E線粒體內(nèi)膜8下列膜脂分子在膜中含量最多的是（）A磷脂酰膽堿B磷脂酰乙醇胺C磷脂酰絲氨酸D鞘磷脂9膜脂中最為重要的脂類是（）A脂肪酸（）A是雙親媒性分子B跨膜區(qū)是Α螺旋或Β筒C可跨膜一次或多次D因?yàn)榕c膜的疏水區(qū)非共價(jià)結(jié)合，因此較容易去除19關(guān)于細(xì)胞膜上糖類的不正確的敘述是（）A質(zhì)膜中糖類主要分布在膜的外表面B主要以糖蛋白和糖脂的形式存在C糖蛋白和糖脂上的低聚糖側(cè)鏈從膜的胞質(zhì)面伸出D糖蛋白中的糖鏈對(duì)蛋白質(zhì)及膜的性質(zhì)影響很大20脂錨定蛋白與脂雙層的結(jié)合是通過(guò)何種化學(xué)鍵實(shí)現(xiàn)的（）A共價(jià)鍵B離子鍵C氫鍵D靜電作用21紅細(xì)胞中的血影蛋白是一種（）A跨膜蛋白B膜周邊蛋白C脂錨定蛋白D以上都不是22膜周邊蛋白與脂雙層的結(jié)合通常不包括下列化學(xué)鍵中的（）A共價(jià)鍵B離子鍵C氫鍵D靜電作用23下列膜蛋白中通過(guò)改變離子強(qiáng)度等較溫和的條件就能從膜上溶解下來(lái)的是（）A跨膜蛋白B膜周邊蛋白C脂錨定蛋白D三種蛋白都很難從膜上去除24細(xì)胞膜有能量交換、物質(zhì)運(yùn)輸、信息傳遞三種主要功能，這些功能與組成膜的哪種物質(zhì)有直接關(guān)系（）A磷脂B糖類C蛋白質(zhì)D膽固醇25被稱為腦磷脂的磷脂分子是（）A磷脂酰膽堿B磷脂酰乙醇胺C磷脂酰絲氨酸D鞘氨醇26磷脂酰膽堿多分布在細(xì)胞膜的（）A在脂雙層的內(nèi)外兩層大致相當(dāng)B主要分布在脂雙層內(nèi)層C主要分布在脂雙層外層

簡(jiǎn)介：細(xì)胞生物學(xué)研究中的激活劑和抑制劑細(xì)胞生物學(xué)研究中的激活劑和抑制劑ANANDIKADHALIWALPHDANANDIKADOTDHALIWALATGMAILDOTCOMRUTGERSUNIVERSITY,NEWJERSEY,UNITEDSTATES譯者譯者王秀英博士王秀英博士MARYATLABOMEDOTCOM美國(guó)新澤西州普林斯頓合原研究有限責(zé)任公司SYNATOMRESEARCHDOIHTTP//DXDOIORG/1013070/MMCN3185日期日期更新20131019原始版20130427引用引用實(shí)驗(yàn)材料和方法20133185介紹介紹細(xì)胞生物學(xué)研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)、生理特性及細(xì)胞功能。它涉及到對(duì)細(xì)胞器、細(xì)胞與周圍環(huán)境間相互作用、生命周期、分化及死亡的研究。細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)和生物化學(xué)等其它生物學(xué)領(lǐng)域是密切相關(guān)的。圖1真核細(xì)胞骨架。肌動(dòng)蛋白纖維顯示為紅色，微管為綠色，核為藍(lán)色。肌動(dòng)蛋白染色使用的是羅丹明鬼筆環(huán)肽，微管使用的是連接有ALEXA488的抗Α微管蛋白著色劑，DNA則使用的是HOECHST染料。對(duì)于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的研究者而言，為了更加全面地理解細(xì)胞的功能、細(xì)胞的信號(hào)傳遞以及控制細(xì)胞命運(yùn)、功能及表型的胞內(nèi)機(jī)制，抑制劑與激活劑是至關(guān)重要的研究工具。許多抑制劑和激活劑都被廣泛用于研究細(xì)胞動(dòng)力學(xué)及功能。這里我們對(duì)真核細(xì)胞中各種細(xì)胞生物學(xué)研究如細(xì)胞內(nèi)吞、分泌、粘附、細(xì)胞骨架動(dòng)力學(xué)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體研究中常用的抑蛋白ALDRICH綜合癥蛋白（WASP）家族成員）并抑制ARP2/3復(fù)合物的活化。該分子阻斷肌動(dòng)蛋白絲的組裝。同樣抑制PIP2誘導(dǎo)的肌動(dòng)蛋白聚合反應(yīng)EC504ΜM。抑制依賴于肌動(dòng)蛋白的細(xì)胞功能（遷移、運(yùn)輸、吞噬、內(nèi)褶）。ALDRICH,TOCRISBIOSCIENCEMYCALOLIDEB（C52H74N4O17）肌動(dòng)蛋白它選擇性地將F肌動(dòng)蛋白徹底解聚成G肌動(dòng)蛋白。與肌動(dòng)蛋白以11的摩爾比進(jìn)行結(jié)合（KD1320NM）。溶于DMSO、甲醇或異丙醇。抑制肌動(dòng)球蛋白ATP酶。111213,SANTACRUZBIOTECHNOLOGY,ENZOLIFESCIENCENOCODAZOLE（C14H11N3O3S）微管抑制微管的動(dòng)態(tài)變化并促使微管解聚。與Β微管蛋白結(jié)合并阻止兩個(gè)鏈間二硫鍵中任意一個(gè)的形成。在DMSO的溶解度達(dá)10MG/ML。有絲分裂抑制劑。將細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。抑制各種癌癥相關(guān)的激酶，包括ABL、CKIT、BRAF、MEK1、MEK2和MET。14151617,SIGMAALDRICH,TOCRISBIOSCIENCE,CELLSIGNALINGTECHNOLOGY,EMD4BIOSCIENCES長(zhǎng)春堿（C46H58N4O9H2SO4）微管解聚微管。與微管蛋白結(jié)合并誘導(dǎo)其自締形成螺旋形聚合體，抑制微管組裝。溶于水和甲醇。通過(guò)阻斷有絲分裂紡錘體的形成將細(xì)胞周期阻滯于G2/M期。在一些腫瘤細(xì)胞系中誘導(dǎo)凋亡。抑制自噬體的成熟。181619,SIGMAALDRICH,TOCRISBIOSCIENCE,EMD4BIOSCIENCES,SANTACRUZBIOTECHNOLOGY。秋水仙堿（C22H25NO6）微管與微管蛋白結(jié)合并阻止其聚合在乙醇中溶解度達(dá)50MG/ML，在水中溶解度可達(dá)100MM，DMSO中溶解度可達(dá)100MM。有絲分裂抑制劑。在一些正常的及癌癥細(xì)胞系中誘導(dǎo)凋亡202122,SIGMAALDRICH,TOCRISBIOSCIENCE,EMD4BIOSCIENCES長(zhǎng)春新堿（C46H56N4O10微管能與微管蛋白結(jié)合并抑制微管形成的吲哚生物溶于甲醇和水。延遲細(xì)胞周期的進(jìn)232425,SIGMAALDRICH,TOCRISBIOSCIENCE,

簡(jiǎn)介：本文格式為本文格式為WORD版，下載可任意編輯版，下載可任意編輯1細(xì)胞生物學(xué)和答案細(xì)胞生物學(xué)和答案安徽大學(xué)20062007學(xué)年第一學(xué)期細(xì)胞生物學(xué)考試試卷（A卷）一、名詞解釋題（每題3分，共30分）1．內(nèi)膜系統(tǒng)（ENDOMEMBRANESYSTEM）指在布局、功能及發(fā)生上緊密相關(guān)的，由膜圍繞的細(xì)胞器或細(xì)胞布局，主要包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體、過(guò)氧化物酶體、核膜、胞內(nèi)體和分泌泡等。2．驅(qū)動(dòng)蛋白KINESIN在神經(jīng)元突觸運(yùn)輸中，察覺(jué)兩種馬達(dá)蛋白，其中驅(qū)動(dòng)蛋白可利用ATP水解釋放的能量向（＋）極運(yùn)輸小泡；而胞質(zhì)動(dòng)力蛋白那么驅(qū)動(dòng)向（－）極的運(yùn)輸。3．CASPASE家族CASPASE活性位點(diǎn)是半胱氨酸CYSTEINE，裂解靶蛋白位點(diǎn)是天冬氨酸殘基后的肽鍵，因此稱為CYSTEINEASPARTICACICSPECIFICPROTEASE，即CASPASE4．受體是一種能夠識(shí)別和選擇性結(jié)合某種配體（信號(hào)分子）的糖蛋白，當(dāng)與配體結(jié)合后，通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用將胞外信號(hào)轉(zhuǎn)換為胞內(nèi)化學(xué)或物理的信號(hào)，以啟動(dòng)一系列過(guò)程，最終表現(xiàn)為生物學(xué)效應(yīng)。本文格式為本文格式為WORD版，下載可任意編輯版，下載可任意編輯3它彌漫整個(gè)細(xì)胞質(zhì)的空間，與外側(cè)的細(xì)胞膜和內(nèi)側(cè)的核膜存在確定的布局聯(lián)系，以保持細(xì)胞特有的外形，并與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)有關(guān)。也可以這樣回復(fù)從廣義上講，細(xì)胞骨架包括細(xì)胞質(zhì)骨架、細(xì)胞核骨架、細(xì)胞膜骨架和細(xì)胞外基質(zhì)。從狹義上講，細(xì)胞骨架即為細(xì)胞質(zhì)骨架，包括微管、纖絲兩大類纖維成分。細(xì)胞生物學(xué)試卷A卷共5頁(yè)第1頁(yè)二、填空題（每空1分，共20分）1．根據(jù)靶細(xì)胞上受體存在的部位，可將受體分為細(xì)胞內(nèi)受體和細(xì)胞外觀受體。前者受胞外親脂性信號(hào)分子激活，主要代表為甾類激素和甲狀激素；后者受胞外親水性，主要代表為神經(jīng)遞質(zhì)、生長(zhǎng)因子、局部化學(xué)遞質(zhì)和大多數(shù)激素。2．內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的特征酶是葡萄糖6磷酸酶、高爾基體的特征酶是糖基轉(zhuǎn)移酶、過(guò)氧化物酶的特征酶是尿酸氧化酶；3．細(xì)胞是由英國(guó)學(xué)者在1665年察覺(jué)的。細(xì)胞學(xué)說(shuō)是由德國(guó)的植物學(xué)家和動(dòng)物學(xué)家共同提出的。4．離子通道一般可分為電壓門通道；配體門通道；壓力激活通道3種類型期合成的。6．小分子物質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)主要有被動(dòng)運(yùn)輸和主動(dòng)運(yùn)

簡(jiǎn)介：細(xì)胞生物學(xué)課程論文題目線粒體通透性轉(zhuǎn)換與細(xì)胞凋亡線粒體通透性轉(zhuǎn)換與細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展的研究進(jìn)展班別學(xué)號(hào)姓名成績(jī)線粒體是細(xì)胞生命活動(dòng)控制中心，它不僅是細(xì)胞呼吸鏈和氧化磷酸化的中心，而且是細(xì)胞凋亡調(diào)控中心。研究表明細(xì)胞色素C從線粒體釋放是細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵步驟”1。釋放到細(xì)胞質(zhì)中的細(xì)胞色素C在DATP存在的條件下能與凋亡蛋白酶活化因子1APOPTOSISPROTEASEACTIVATINGFACTORL，APAF一1結(jié)合¨1，使其形成多聚體，并促使半胱天冬蛋白酶與其結(jié)合形成凋亡小體APOPTOSOME，現(xiàn)已能確定半胱天冬蛋白酶即CASPASE在凋亡過(guò)程中是起著必不可少的作用。細(xì)胞凋亡的過(guò)程實(shí)際上是CASPASE不可逆有限水解底物的級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)過(guò)程。目前，至少有10多種CASPASE被發(fā)現(xiàn)，CASPASE分子間的同源性很高，結(jié)構(gòu)相似，都是半胱氨酸家族蛋白酶，根據(jù)功能可把CASPASE基本分為2類一類參與細(xì)胞的JJNR；另一類參與細(xì)胞凋亡。CASPASE家族一般以酶原的形式存在，并具有半胱氨酸激活位點(diǎn)和底物裂解位點(diǎn)。細(xì)胞色素C在DATP存在的條件下與凋亡蛋白酶活化因子1APOPTOSISPROTEASEACTIVATINGFACTOR1，APAF一1結(jié)合形成的多聚體主要與CASPASE一9結(jié)合形成凋亡小體。其結(jié)果是CASPASE一9被激活，激活的CASPASE9能夠激活其他的CASPASE如CASPASE一3等，從而誘導(dǎo)凋亡。3．2線粒體釋放凋亡誘導(dǎo)因子凋亡誘導(dǎo)因子線粒體釋放凋亡誘導(dǎo)因子凋亡誘導(dǎo)因子AIFAPOPTOSISINDUCINGFACTOR，AIF是一種主要的凋亡效應(yīng)蛋白，在體外它可以誘導(dǎo)染色質(zhì)凝聚以及DNA大規(guī)模片段化的形成。激光共聚焦熒光顯微鏡和電子顯微鏡觀察顯示，在正常的細(xì)胞內(nèi)，AIF定位于線粒體，被線粒體外膜保留在膜間隙，并與熱休克蛋白60HEATSTOCKPROTEIN60，HSP60共同定位于線粒體，HSP60被線粒體內(nèi)膜保留于基質(zhì)。當(dāng)細(xì)胞受到誘導(dǎo)凋亡的刺激，如癌基因抑制藥物神經(jīng)酰胺等作用時(shí)，AIF而不是HSP60由線粒體轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核。這表明僅僅是線粒體外膜成為有通透性的蛋白。AIF由線粒體至細(xì)胞核的再分配，可以被BCL一2阻止，BCL一2特異性地保護(hù)線粒體膜穩(wěn)定性，從而阻止AIF由線粒體轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核。CASPASE的廣譜抑制物N一芐氧羰基一纈氨酸一丙氨酸一門冬氨酰氟甲基酮NBENZYLOXYCARBONYLVALALAASPFLUOROMETHYLKETONE，ZVAD．FMK不能阻止AIF的轉(zhuǎn)位。ATP的過(guò)度消耗可以引起AIF轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核，神經(jīng)酰胺加速AIF的轉(zhuǎn)位。3．3線粒體釋放線粒體釋放SMACSMAC／DIABLODIABLOSMACSMACTHESECONDMITOCHONDRIADERIVEDACTIVATOROFCASPASE又稱為DIABLODIRECTIAPBINDINGPROTEIN，是一種線粒體蛋白，能夠促進(jìn)細(xì)胞凋亡，它通過(guò)拮抗或中和一種或幾種凋亡抑制蛋白IAP家族成員而發(fā)揮其促凋亡作用¨0|。當(dāng)細(xì)胞受到紫外線或1一射線照射時(shí)，SMAC／DIABLO由線粒體進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，SMAC／DIABLO的這種位移可被BCL一2抑制?？梢?jiàn)，BCL一2除了通過(guò)抑制細(xì)胞色素C的釋放來(lái)抑制凋亡以外，還可以通過(guò)抑制SMAC／DIABLO的位移而抑制凋亡。SMAC／DIABLO由線粒體移位至細(xì)胞質(zhì)，依賴于細(xì)胞色素C的釋放，即首先細(xì)胞色素C從線粒體釋放至細(xì)胞質(zhì)。然后SMAC／DIABLO才從線粒體釋放，發(fā)生位移。與細(xì)胞色素

簡(jiǎn)介：第一章1細(xì)胞生物學(xué)在生命科學(xué)中所處的地位，以及它與其他學(xué)科的關(guān)系1）地位以細(xì)胞作為生命活動(dòng)的基本單位，探索生命活動(dòng)規(guī)律，核心問(wèn)題是將遺傳與發(fā)育在細(xì)胞水平上的結(jié)合。2）關(guān)系應(yīng)用現(xiàn)代物理學(xué)與化學(xué)的技術(shù)成就和分子生物學(xué)的概念與方法，研究生命現(xiàn)象及其規(guī)律。1．根據(jù)細(xì)胞生物學(xué)研究的內(nèi)容與你所掌握的生命科學(xué)知識(shí)，客觀、恰當(dāng)?shù)卦u(píng)價(jià)細(xì)胞生物學(xué)在生命科學(xué)中所處的地位，以及它與其他學(xué)科的關(guān)系。答細(xì)胞生物學(xué)是一門從細(xì)胞的顯微結(jié)構(gòu)、超微結(jié)構(gòu)和分子結(jié)構(gòu)的各級(jí)水平研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系，從而探索細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、分化、繁殖、遺傳、變異、代謝、衰亡及進(jìn)化等各種生命現(xiàn)象規(guī)律的科學(xué)。生命體是多層次、非線性、多側(cè)面的復(fù)雜結(jié)構(gòu)體系，而細(xì)胞是生命體的結(jié)構(gòu)與生命活動(dòng)的基本單位，有了細(xì)胞才有完整的生命，一切生命現(xiàn)象的奧秘都要從細(xì)胞中尋找答案。許多高等學(xué)校在生命科學(xué)的教學(xué)中，將細(xì)胞生物學(xué)確定為基礎(chǔ)課程。細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)和生態(tài)學(xué)并列為生命科學(xué)的四大基礎(chǔ)學(xué)科。細(xì)胞生物學(xué)與其他學(xué)科之間的交叉滲透日益明顯。2．通過(guò)學(xué)習(xí)細(xì)胞學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史，你如何認(rèn)識(shí)細(xì)胞學(xué)說(shuō)的重要性答18381839年，德國(guó)植物學(xué)家施萊登和德國(guó)動(dòng)物學(xué)家施旺提出一切動(dòng)植物都由細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，并由細(xì)胞和細(xì)胞產(chǎn)物所構(gòu)成；每個(gè)細(xì)胞作為相對(duì)獨(dú)立的單位，但也與其他細(xì)胞相互影響。1858年VIRCHOW對(duì)細(xì)胞學(xué)說(shuō)做了重要的補(bǔ)充，強(qiáng)調(diào)細(xì)胞只能來(lái)自細(xì)胞。細(xì)胞學(xué)說(shuō)的提出對(duì)于生物科學(xué)的發(fā)展具有重大意義。細(xì)胞學(xué)說(shuō)、進(jìn)化論、孟德?tīng)栠z傳學(xué)稱為現(xiàn)代生物學(xué)的三大基石，而細(xì)胞學(xué)說(shuō)又是后二者的基石。對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的了解是生物科學(xué)和醫(yī)學(xué)分支進(jìn)一步發(fā)展所不可缺少的。3．試簡(jiǎn)明扼要地分析細(xì)胞生物學(xué)學(xué)科形成的客觀條件，以及它今后發(fā)展的主要趨勢(shì)。答（1）細(xì)胞生物學(xué)學(xué)科形成的客觀條件細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)（16651674）1665年，胡克發(fā)表了顯微圖譜（MICROGRAPHIA）一書(shū)，描述了用自制的顯微鏡（30倍）觀察櫟樹(shù)軟木塞切片時(shí)發(fā)現(xiàn)其中有許多小室，狀如蜂窩，稱為“CELLAR”。1674年，荷蘭布商列文虎克自制了高倍顯微鏡（300倍左右），觀察到血細(xì)胞、池塘水滴中的原生動(dòng)物、人類和其他哺乳動(dòng)物的精子。細(xì)胞學(xué)說(shuō)的建立（18381858）18381839年，德國(guó)植物學(xué)家施萊登和德國(guó)動(dòng)物學(xué)家施旺兩人共同提出細(xì)胞學(xué)說(shuō)，1858年VIRCHOW對(duì)細(xì)胞學(xué)說(shuō)進(jìn)行了補(bǔ)充。細(xì)胞學(xué)的經(jīng)典時(shí)期各種主要的細(xì)胞分裂形式和細(xì)胞器被相繼發(fā)現(xiàn)，構(gòu)成了細(xì)胞學(xué)的經(jīng)典時(shí)期。（2）細(xì)胞生物學(xué)與分子生物學(xué)包括分子遺傳學(xué)與生物化學(xué)相互滲透與交融是總的發(fā)展趨勢(shì)。4當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究的熱點(diǎn)課題中你最感興趣的是哪些為什么染色體DNA與非組蛋白的相互作用關(guān)系細(xì)胞增殖、分化、凋亡的相互關(guān)系及其調(diào)控細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)體系的裝配第二章RNA在核中合成和加工蛋白質(zhì)在細(xì)胞質(zhì)中合成細(xì)胞分裂二分或出芽有絲分裂或減數(shù)分裂內(nèi)膜無(wú)獨(dú)立的內(nèi)膜有,分化成細(xì)胞器細(xì)胞骨架無(wú)普遍存在呼吸作用和光合作用酶的分部質(zhì)膜線粒體和葉綠體（植物）核糖體70S（50S＋30S）80S（60S＋40S）5細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)是細(xì)胞生物學(xué)的一個(gè)基本原則，你能否提出更多的論據(jù)來(lái)說(shuō)明之答成熟紅細(xì)胞喪失了細(xì)胞核，卻含有很多血紅蛋白，細(xì)胞呈雙面凹的圓餅狀，它不需分裂﹑分化，所以可以無(wú)細(xì)胞核；血紅蛋白多及其圓餅狀形狀（相對(duì)表面積大，有助于物質(zhì)交換）能更好地執(zhí)行氣體交換功能。第三章1舉例說(shuō)明電子顯微鏡技術(shù)與細(xì)胞分子生物學(xué)技術(shù)的結(jié)合在現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)研究中的應(yīng)用。超薄切片技術(shù)（固定包埋切片染色）一般用于細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察負(fù)染色技術(shù)觀察亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，甚至病毒，具有一定的背景清除效果冷凍蝕刻技術(shù)形成斷面，便于觀察胞質(zhì)中的細(xì)胞骨架纖維及其結(jié)合蛋白電鏡三維重構(gòu)技術(shù)前提是能形成蛋白質(zhì)衍射晶體易構(gòu)建三維結(jié)構(gòu)掃描電鏡技術(shù)通常在觀察前鍍一層金膜，立體感強(qiáng)但局限于觀察物體表面應(yīng)用舉例見(jiàn)基因的分子生物學(xué)2光學(xué)顯微鏡技術(shù)有哪些新發(fā)展它們各有哪些突出優(yōu)點(diǎn)為什么電子顯微鏡不能完全代替光學(xué)顯微鏡相差微分干涉顯微鏡技術(shù)觀察活細(xì)胞成為可能，增加的光程差使圖像立體感更強(qiáng)熒光顯微技術(shù)其特異性檢測(cè)所需的觀察物質(zhì)，能排除其他環(huán)境干擾，精確定位激光掃描共焦顯微鏡技術(shù)改變縱向分辨率，不同切面構(gòu)成的圖像，經(jīng)疊加形成三維結(jié)構(gòu)熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)主要用于觀測(cè)兩種蛋白是否直接作用及作用的強(qiáng)弱不可取代的原因觀察非超微結(jié)構(gòu)的需要，觀察活細(xì)胞及其正常生理反應(yīng)的需要，對(duì)一般

簡(jiǎn)介：目錄索引目錄索引第一章第一章細(xì)胞生物學(xué)概述細(xì)胞生物學(xué)概述第二章第二章細(xì)胞概述細(xì)胞概述第三章第三章細(xì)胞的分子基礎(chǔ)細(xì)胞的分子基礎(chǔ)第四章第四章細(xì)胞膜細(xì)胞膜第五章第五章細(xì)胞連接與細(xì)胞外基質(zhì)細(xì)胞連接與細(xì)胞外基質(zhì)第六章第六章內(nèi)膜系統(tǒng)內(nèi)膜系統(tǒng)第七章第七章線粒體線粒體第八章第八章核糖體核糖體第九章第九章細(xì)胞骨架細(xì)胞骨架第十章第十章細(xì)胞核細(xì)胞核第十一章第十一章細(xì)胞的分裂細(xì)胞的分裂第十二章第十二章細(xì)胞周期細(xì)胞周期第十三章第十三章細(xì)胞分化細(xì)胞分化第十四章第十四章細(xì)胞的衰老和死亡細(xì)胞的衰老和死亡第十五章第十五章個(gè)體發(fā)育中的細(xì)胞個(gè)體發(fā)育中的細(xì)胞附錄附錄名詞解釋名詞解釋第二節(jié)第二節(jié)原核細(xì)胞和真核細(xì)胞原核細(xì)胞和真核細(xì)胞原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的比較特征原核細(xì)胞真核細(xì)胞細(xì)胞大小較小，1ΜM～10ΜM較大，10ΜM～100ΜM細(xì)胞核根本區(qū)別）無(wú)核膜、核仁（擬核）有核膜、核仁（真核）DNA環(huán)狀雙鏈，不與組蛋白結(jié)合線狀雙鏈，與組蛋白結(jié)合成染色質(zhì)細(xì)胞壁不含纖維素、主要由肽聚糖組成不含肽聚糖，主要由纖維素組成細(xì)胞器無(wú)（除核糖體外）有核糖體70S80S內(nèi)膜系統(tǒng)無(wú)復(fù)雜細(xì)胞骨架無(wú)有轉(zhuǎn)錄與翻譯轉(zhuǎn)錄與翻譯同時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄在核內(nèi)，翻譯在胞質(zhì)中進(jìn)行細(xì)胞分裂無(wú)絲分裂有絲分裂，減數(shù)分裂第三章第三章細(xì)胞的分子基礎(chǔ)細(xì)胞的分子基礎(chǔ)概述1．原生質(zhì)細(xì)胞中的生命物質(zhì)，由細(xì)胞質(zhì)（包括質(zhì)膜）和細(xì)胞核組成。2．元素組成主要元素CHON4種少量元素SPNAKCACLMGFE8種微量元素CUZNMNCOIBRFSISRBA10種3．分子組成無(wú)機(jī)化合物水、無(wú)機(jī)鹽有機(jī)化合物糖、脂、維生素、蛋白質(zhì)（酶）、核酸。細(xì)胞的小分子物質(zhì)細(xì)胞的小分子物質(zhì)一、水水是細(xì)胞內(nèi)最重要的無(wú)機(jī)小分子，占細(xì)胞總重量的70。大多數(shù)代謝過(guò)程都需要水參與。二、無(wú)機(jī)鹽占細(xì)胞總重量的19左右，以離子形式存在。維持細(xì)胞內(nèi)的滲透壓和酸堿平衡。作為酶的輔助因子。三、有機(jī)小分子是細(xì)胞代謝過(guò)程中的中間產(chǎn)物，也是構(gòu)成生物大分子的基本單位。主要包括單糖、脂肪酸、氨基酸、核苷酸。單糖脂肪酸功能1、構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分。2、能量

簡(jiǎn)介：智慧樹(shù)知到醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)章節(jié)測(cè)試答案第一章1、構(gòu)成生物體的基本結(jié)構(gòu)和功能單位是。A細(xì)胞膜B細(xì)胞器C細(xì)胞核D細(xì)胞E細(xì)胞質(zhì)正確答案細(xì)胞2、醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)的研究對(duì)象是（）。A生物體細(xì)胞B人體細(xì)胞C人體組織D人體器官E人體系統(tǒng)正確答案人體細(xì)胞3、（）為細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的認(rèn)識(shí)奠定了良好的基礎(chǔ)。A組織培養(yǎng)技術(shù)B高速離心裝置C光學(xué)顯微鏡的應(yīng)用D電子顯微鏡的應(yīng)用E免疫標(biāo)記技術(shù)正確答案氨基酸2、DNA分子是由（）組成的。A磷酸B核糖C脫氧核糖D堿基E己糖正確答案磷酸,脫氧核糖,堿基3、關(guān)于細(xì)胞中無(wú)機(jī)鹽的功能，描述有誤的是（）。A是細(xì)胞含量最多的物質(zhì)B維持細(xì)胞內(nèi)外滲透壓C維持細(xì)胞酸堿平衡D是細(xì)胞的主要能量來(lái)源E不能與蛋白質(zhì)結(jié)合正確答案是細(xì)胞含量最多的物質(zhì),是細(xì)胞的主要能量來(lái)源,不能與蛋白質(zhì)結(jié)合4、關(guān)于細(xì)胞大小和形態(tài)，描述正確的是（）。A人體最大的細(xì)胞是卵細(xì)胞B人卵細(xì)胞是已知最大的細(xì)胞C不同種類的細(xì)胞，其大小有差異D細(xì)胞的大小形態(tài)與細(xì)胞的功能有關(guān)E真核細(xì)胞一般比原核細(xì)胞大正確答案人體最大的細(xì)胞是卵細(xì)胞,不同種類的細(xì)胞，其大小有差異,細(xì)胞的大小形態(tài)與細(xì)胞的功能有關(guān),真核細(xì)胞一般比原核細(xì)胞大

簡(jiǎn)介：21春學(xué)期（1709、1803、1809、1903、1909、2003、2009、2103）細(xì)胞生物學(xué)在線作業(yè)試卷總分100得分100一、單選題共25道試題,共50分1下列（）不屬于真核生物基因表達(dá)調(diào)控的范疇。A復(fù)制水平的調(diào)控B轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控CRNA加工水平的調(diào)控D翻譯水平的調(diào)控答案A2在下列細(xì)胞結(jié)構(gòu)中不存在CA2ATPASE的是（）。A線粒體膜B內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜C細(xì)胞膜D核膜答案D3動(dòng)物細(xì)胞中CAMP的主要生物學(xué)功能是活化（）。A蛋白激酶CB蛋白激酶AC蛋白激酶KDCA2激酶答案A4正常細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基中常需加入血清，主要是因?yàn)檠逯泻校ǎ?。A氨基酸B核酸C生長(zhǎng)因子D維生素答案C5下面有關(guān)核仁的描述錯(cuò)誤的是（）。A核仁的主要功能之一是參與核糖體的生物合成BRDNA定位于核仁區(qū)內(nèi)C細(xì)胞在M期末和S期重新組織核仁D細(xì)胞在G2期，核仁消失答案D6下列沒(méi)有細(xì)胞壁的細(xì)胞是（）A支原體B細(xì)菌C藍(lán)藻D植物細(xì)胞13細(xì)胞學(xué)的經(jīng)典時(shí)期是指（）。A1665年以后的25年B18381858細(xì)胞學(xué)說(shuō)的建立C19世紀(jì)的最后25年D20世紀(jì)50年代電子顯微鏡的發(fā)明答案C14在下列激酶中，除（）外，都能使靶蛋白的絲氨酸或蘇氨酸磷酸化。A酪氨酸蛋白激酶B蛋白激酶KC蛋白激酶CD都不對(duì)答案A15在第一次減數(shù)分裂中（）。A同源染色體不分離B著絲粒不分離C染色單體分離D不出現(xiàn)交叉答案B16在英國(guó)引起瘋牛病的病原體是（）。A朊病毒（PRION）B病毒（VIRUS）C立克次體D支原體答案A17關(guān)于細(xì)胞周期限制點(diǎn)的表述，錯(cuò)誤的是（）。A限制點(diǎn)對(duì)正常細(xì)胞周期運(yùn)轉(zhuǎn)并不是必需的B它的作用是細(xì)胞遇到環(huán)境壓力或DNA受到損傷時(shí)使細(xì)胞周期停止的“剎車“作用，對(duì)細(xì)胞進(jìn)入下一期之前進(jìn)行“檢查”。C細(xì)胞周期有四個(gè)限制點(diǎn)G1/S、S/G2、G2/M和M/G1限制點(diǎn)D最重要的是G1/S限制點(diǎn)答案A18下列由奢侈基因編碼的蛋白是（）。A肌動(dòng)蛋白B膜蛋白C組蛋白D血紅蛋白答案D19目前認(rèn)為支原體是最小的細(xì)胞，其直徑約為（）

簡(jiǎn)介：細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)以細(xì)胞為研究對(duì)象，應(yīng)用近代物理學(xué)、化學(xué)、實(shí)驗(yàn)生物學(xué)及分子生物學(xué)的技術(shù)和方法，從細(xì)胞整體水平、亞顯微水平和分子水平三個(gè)層面來(lái)研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)及其生命活動(dòng)規(guī)律的科學(xué)。醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)以細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)為基礎(chǔ)，研究和探討人體細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能、發(fā)生、發(fā)展、成長(zhǎng)、衰老、死亡的生命活動(dòng)規(guī)律及其發(fā)病機(jī)理和防治的科學(xué)。膜內(nèi)在蛋白膜內(nèi)在蛋白又稱膜整合蛋白質(zhì)或鑲嵌蛋白。占膜蛋白總量的7080，其部分鑲嵌于膜中，以非極性氨基酸與脂雙層膜脂疏水區(qū)共價(jià)緊密結(jié)合，不易從膜上分離下來(lái)，跨膜蛋白也屬此列。膜外在蛋白膜外在蛋白他們不直接與脂雙層疏水部分直接相連，而通過(guò)靜電作用、離子鍵、氫鍵與脂分子極性頭部或膜整合蛋白質(zhì)分子親水部分相互作用間接結(jié)合。主要分布在膜的內(nèi)在表面，為水溶性蛋白質(zhì)。細(xì)胞外被細(xì)胞外被存在于細(xì)胞表面的覆蓋物，富含糖類，也稱糖萼。一般指與質(zhì)膜相連的糖類物質(zhì)，是質(zhì)膜中糖蛋白和糖脂向外延伸的寡糖部分。脂筏模型脂筏模型脂筏是指質(zhì)膜外層富含膽固醇和鞘磷脂，富集而形成有序脂相的微結(jié)構(gòu)域，是一種動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)。脂筏像一個(gè)蛋白質(zhì)停泊的平臺(tái)，其上載有蛋白質(zhì)，與膜信號(hào)轉(zhuǎn)到有密切關(guān)系。①許多蛋白質(zhì)聚集于脂筏，便于相互作用②脂筏提供蛋白質(zhì)一個(gè)有利于構(gòu)象變化的環(huán)境，形成有效構(gòu)象。通道蛋白通道蛋白由A螺旋構(gòu)成的介導(dǎo)被動(dòng)運(yùn)輸?shù)目缒さ鞍?，其形成親水G蛋白蛋白一種鳥(niǎo)嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白，是由Α、Β、Γ三個(gè)亞基組成的異三聚體的可溶性的膜蛋白。是一種具有GTP酶活性，在細(xì)胞信號(hào)通路中起信號(hào)轉(zhuǎn)換器或分子開(kāi)關(guān)作用的蛋白質(zhì)NONO信號(hào)信號(hào)NO合成酶NOS催化精氨酸生成NO和瓜氨酸的信號(hào)。NOS活性受CA2/鈣調(diào)蛋白調(diào)控。NO是脂溶性的，血管內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞是NO主要生成細(xì)胞。NO功能,激活可溶性GC，刺激CGMP合成，引發(fā)多種生物學(xué)效應(yīng)。受體酪氨酸蛋白激酶受體酪氨酸蛋白激酶本身具有激酶活性，是單次跨膜蛋白，配體與受體結(jié)合導(dǎo)致受體二聚化，二聚體內(nèi)彼此相互磷酸化胞內(nèi)斷落氨酸殘基。內(nèi)膜系統(tǒng)內(nèi)膜系統(tǒng)指位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)在結(jié)構(gòu)、功能、乃至發(fā)生上相聯(lián)系的膜性細(xì)胞結(jié)構(gòu)的總稱。包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基復(fù)合體，溶酶體等細(xì)胞器和胞質(zhì)內(nèi)膜性轉(zhuǎn)運(yùn)小泡。信號(hào)肽信號(hào)肽指新合成的蛋白質(zhì)端帶有的由1530個(gè)疏水氨基酸組成的肽段，能被SRP識(shí)別并引導(dǎo)蛋白質(zhì)在合成過(guò)程中轉(zhuǎn)移至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，最后被信號(hào)肽酶水解。蛋白質(zhì)糖基化蛋白質(zhì)糖基化指單糖或寡糖與蛋白質(zhì)共價(jià)結(jié)合成糖蛋白的過(guò)程。包括N連接的糖基化和O連接的糖基化。起始轉(zhuǎn)移序列起始轉(zhuǎn)移序列位于多肽鏈內(nèi)的一段疏水區(qū)段，具有與N端信號(hào)肽同樣的功能，只是不能被信號(hào)肽酶切除，從而成為膜蛋白的Α螺旋跨膜結(jié)構(gòu)。終止轉(zhuǎn)移序列終止轉(zhuǎn)移序列肽鏈上的一段特殊序列，與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的親和力很

簡(jiǎn)介：國(guó)外醫(yī)學(xué)輸血及血液學(xué)分冊(cè)2004年第27卷第5期NK細(xì)胞的免疫生物學(xué)特性王荷花綜述韓明哲審?！菊咳祟怤K細(xì)胞是機(jī)體抗腫瘤和抗病毒感染的天然免疫細(xì)胞，有自發(fā)的細(xì)胞毒功能，近1O年來(lái)人們發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞的識(shí)別也具有特異性。NK細(xì)胞表達(dá)多種受體，按受體識(shí)別的分子可分為HLAI類分子特異性受體、非HLAI類分子特異性受體和共受體三大類，功能上劃分為活化性受體和抑制性受體兩類，這些受體對(duì)NK細(xì)胞的功能有重要的調(diào)節(jié)作用。本文就NK細(xì)胞受體的特點(diǎn)和功能作一綜述，并探討開(kāi)發(fā)NK細(xì)胞新型潛在細(xì)胞免疫治療的價(jià)值。【關(guān)鍵詞】自然殺傷細(xì)胞；受體；細(xì)胞免疫治療人類NK細(xì)胞由骨髓造血干細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，約占外周血淋巴細(xì)胞的10～15，免疫表型特點(diǎn)為CD3一CD56，因細(xì)胞胞體大、胞漿量多、電鏡下觀察胞內(nèi)含有致密顆粒，故又稱為大顆粒淋巴細(xì)胞。NK細(xì)胞的發(fā)育成熟非胸腺依賴性，也無(wú)抗原特異性受體的表達(dá)，因此最初被認(rèn)為是一種天然免疫細(xì)胞，具有天然的和淋巴細(xì)胞因子活化的細(xì)胞毒活性、分泌有免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子以及抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒活性。早期人們發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞殺傷的靶細(xì)胞常有HLAI類分子表達(dá)水平的下調(diào)I1，另外NK細(xì)胞也能介導(dǎo)排斥同種異體的正常骨髓細(xì)胞_2。近來(lái)隨著NK細(xì)胞受作者單位300020天津，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)血液學(xué)研究所血液病醫(yī)院433綜述體的不斷發(fā)現(xiàn)及其對(duì)NK細(xì)胞功能調(diào)節(jié)的研究，使人們認(rèn)識(shí)到NK細(xì)胞識(shí)別功能的特異性，有利于開(kāi)發(fā)新的細(xì)胞免疫治療。1NK細(xì)胞受體NK細(xì)胞表達(dá)多種不同的受體，按其識(shí)別的配體可分為三大類3HLAI類分子特異性受體、非HLAI類分子特異性受體和其他受體，根據(jù)受體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)又可劃分為免疫球蛋白樣超家族受體和C型凝集素超家族受體兩大家族I4。1．1HLAI類分子特異性受體這一大類受體識(shí)別的配體是HLAI類分子，它包括免疫球蛋白樣超家族受體殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體KILLERCELLIMMUNOGLOBULINLIKERECEPTORS，KIR23DRUKERBJ。SAWYERSCL，KANTARJIANH，ETA1．ACTIVITYOFASPECI．CINHIBITOROFTHEBETABLTYROSINEKINASEINTHEBLASTCRISISOFCHRONICMYELOIDLEUKEMIAANDACUTELYMPHOBLASTICLEUKEMIAWITHTHEPHILADELPHIACHROMOSOME．NENGLJMED，2001，34410381042．24KANTARJIANH，SAWYERSC，HOCHHAUSA，ETA1．HEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESTOIMATINIBMESYLATEINCHRONICMYELOGENOUSLEUKEMIA．NENGLJMED，2002，346645652．25TALPAZM，SILVERRT，DRUKERBJ，ETA1．IMATINIBINDUCESDURABLEHEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESINPATIENTSWITHACCELERATEDPHASECHRONICMYELOIDLEUKEMIA；RESULTSOFAPHASE2STUDY．BLOOD，2002，9919281937．26SAWYERSCL。HOCHHAUSA，F(xiàn)ELDMANE。ETA1．IMATINIBINDUCESHEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESINPATIENTSWITHCHRONICMYELOIDLEUKEMIAINMYELOIDBLASTCRISISRESULTSOFAPHASE1STUDY．BLOOD，2002，9935303539．27KANTARJIANHJORGEC，O’BRIENS，ETA1．HIGHRATESOFEARLYMAJORANDCOMPLETECYTOGENETICRESPONSESWITHIMATINIBMESYLATETHERAPYGIVENAT400MGOR800MGORALLYDAILYINPATIENTSWITHNEWLYDIAGNOSEDPHILADELPHIACHROMOSOMEPOSITIVECHRONICMYELOIDLEUKEMIAINCHRONICPHASE．PROCAMSOCCLINONCO1．2002。21261AABSTR．28DRUKERBJ，F(xiàn)ORTHEIRISINTERNATIONALRANDOMIZEDIFNVS．STI571STUDYGROUPSTI571GLEEVEC／GLIVECIMATINIBVERSUSINTERFERONIFN一CYTARABINEASINITIALTHERAPYFORPATIENTSWITHCMLRESULTSOFARANDOMIZEDSTUDY．PROCAMSOCCLIN0NC。2002，21LAABSTR．29DRUKERBJ。SAWYERSCL，CAPDEVILLER，ETA1．CHRONICMYELOGENOUSLEUKEMIA．HEMATOLOGY，AMSOCHEMATOLEDUCPROGRAM2001，87112．3O0’BRIENSG，VALLANCESE，CRADDOCKC．ETA1．PEGINTRONANDST1571COMBINATIONEVALUATIONSTUDYPISCESINCHRONICPHASECHRONICMYELOIDLEUKAEMIA．BLOOD，2001。98846ASUPPL1，ABSTR．31DRUKERB，KANTARJIANH，TALPAZM，ETA1．APHASEISTUDYOFTHECOMBINATIONOFGLEEVECIMATINIBMESYLATEWITHLOWDOSEARAC．BLOOD，2001，98845ASUPPL1，ABSTR．32BRIANJ．DRUKER．IMATINIBALONEANDINCOMBINATIONFORCHRONIEMYELOIDLEUKEMIA．SEMINARSINHEMATOLOGY，2003，4015058．收稿日期2004一O4一O1本文編輯羅幼平IL￡}}維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM國(guó)外醫(yī)學(xué)輸血及血液學(xué)分冊(cè)2004年第27卷第5期HLAI類分子特異性活化性受體KIR和CD94／NKG2C、E、H的結(jié)構(gòu)共同點(diǎn)是受體胞質(zhì)尾短，無(wú)ITIM基序，受體活化信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)需DAP12_1。DAP12胞質(zhì)尾含有由YXXL／I氨基酸序列組成的2個(gè)ITAMIMMUNORECEPTORTYROSINEACTINGMOTIF基序。NK細(xì)胞活化性受體的集結(jié)導(dǎo)致YXXL序列中酪氨酸快速而短暫的磷酸化，隨后募集并活化蛋白酪氨酸激酶SYK或ZAP70轉(zhuǎn)導(dǎo)活化信號(hào)，使NK細(xì)胞活化。雖然NCR目前尚未明確配體，但與單克隆抗作用的研究發(fā)現(xiàn)其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)類似于上述途徑，其中NKP46和NKP30的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通過(guò)含經(jīng)典ITAM的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)肽CD3鏈，NKP44則與DAP12結(jié)合。NKG2D活化信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)由DAP10介導(dǎo)，與DAP12不同，DAP10分子胞質(zhì)尾無(wú)ITAM結(jié)構(gòu)，但含有一個(gè)YXXM氨基酸序列，其酪氨酸磷酸化后與PI一3亞單位P85結(jié)合，啟動(dòng)活化信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)口。因此，NKG2D活化信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑完全不同于NK細(xì)胞HLAI類分子特異性活化性受體。3NK細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)很顯然，NK細(xì)胞的功能受其表達(dá)的抑制性受體和活化性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)性信號(hào)和活化信號(hào)之間平衡機(jī)制調(diào)節(jié)。NK細(xì)胞表達(dá)的受體中，HLAI類分子特異的抑制性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制NK細(xì)胞活化的負(fù)性信號(hào)，NCR、NKG2D和HLAI類分子特異的活化性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)活化信號(hào)，共受體則協(xié)同NK細(xì)胞功能的活化。對(duì)同一NK細(xì)胞表達(dá)的HIAI類分子特異性受體而言，雖然識(shí)別相同或相似HIAI類分子的KIR和CD94／NKG2抑制性受體和活化性受體都能與相應(yīng)的配體結(jié)合，但通常抑制性受體與HLAI類分子結(jié)合的親和力顯著高于活化性受體N。另外，僅少數(shù)NK細(xì)胞克隆同時(shí)表達(dá)識(shí)別相同HLAI類分子同種型的活化性受體和抑制性受體，通常大多數(shù)NK細(xì)胞克隆表達(dá)的是不同HLA1分子同種型的抑制性受體。所以，在正常情況下，NK細(xì)胞的抑制性受體與自身正常細(xì)胞表達(dá)的HLAI類分子結(jié)合后，轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制該NK細(xì)胞活化的負(fù)性信號(hào)，導(dǎo)致啟動(dòng)NK細(xì)胞活化的早期階段分子失活，從而阻止NK細(xì)胞的活化，即NK細(xì)胞以轉(zhuǎn)導(dǎo)負(fù)性信號(hào)占優(yōu)勢(shì)。這也就阻止了NK細(xì)胞對(duì)宿主自身正常細(xì)胞的殺傷作用，避免自身免疫反應(yīng)的發(fā)生。病理情況下，當(dāng)NK細(xì)胞識(shí)別自身HIAI類分子水平下調(diào)或丟失的腫瘤細(xì)胞、病原體感染的細(xì)胞時(shí)，抑制性受體與HIAI類分子作用水平減低或不能與之結(jié)合，導(dǎo)致抑制NK細(xì)胞活化的信號(hào)減弱或缺乏，則啟動(dòng)活化性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)的活化信號(hào)，使該NK細(xì)胞活化，發(fā)揮細(xì)胞毒功能，裂解靶細(xì)胞。若該靶細(xì)胞同時(shí)表達(dá)MLCA／MLCB分子，可激活不同信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的活化性受體NKG2D，進(jìn)一步增強(qiáng)NK細(xì)胞的活化信號(hào)，提高宿主的疾病防御能力。綜上所述，NK細(xì)胞通過(guò)表達(dá)多種受體的調(diào)節(jié)方式，整合抑制性受體和活化性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)性信號(hào)和活化信號(hào)，使機(jī)體能夠區(qū)分自身正常細(xì)胞和HLA1分子水平下調(diào)或丟失的異常細(xì)胞，從而闡明了NK細(xì)胞免疫監(jiān)視“丟失自我”MISSINGSELF假說(shuō)的機(jī)制。4NK細(xì)胞的免疫治療應(yīng)用NK細(xì)胞識(shí)別“自己”和“非己”的特性，調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的活性，可能為免疫治療提供新的途徑。理論上阻斷抑制性受體與MHCI類分子的相互作用，解除對(duì)NK細(xì)胞活化的抑制，能夠有效增強(qiáng)NK細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)。KOH等N實(shí)驗(yàn)研究證明，采用單克隆抗體封閉同基因小鼠NK細(xì)胞抑制性受體或者過(guò)繼性MHCI不相合異基因NK細(xì)胞凈化骨髓和自體骨髓移植后的維持治療，有效提高了白血病小鼠長(zhǎng)期無(wú)白血病復(fù)發(fā)存活率，同時(shí)對(duì)造血重建無(wú)明顯影響。這一效應(yīng)同樣能在病毒感染如巨細(xì)胞病毒感染時(shí)巨細(xì)胞病毒能夠編碼MHCI類分子樣類似物以逃逸免疫系統(tǒng)的殺傷發(fā)揮作用。在異基因造血干細(xì)胞移植中ALLOSCT，供一受者問(wèn)NK細(xì)胞識(shí)別的特異性主要指抑制性受體識(shí)別的特異性，即兩者抑制性受體識(shí)別的配體是否相合，另外由于移植預(yù)處理的作用使受者NK細(xì)胞基本被清除，所以移植后主要存在的是供者NK細(xì)胞的同種反應(yīng)性，即指受者M(jìn)HCI類基因不編碼供者所有NK細(xì)胞抑制性受體識(shí)別的MHCI類分子。因此，此NK細(xì)胞亞群KIR抑制性受體不能與受者M(jìn)HCI類分子結(jié)合，從而阻斷抑制信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，有利于供者NK細(xì)胞的活化，增強(qiáng)移植后抗殘留腫瘤細(xì)胞的功能。RUGGERI等發(fā)現(xiàn)在白血病患者HLA半相合干細(xì)胞移植后，供一受者方向KIR一配體不相合的受者體內(nèi)可檢測(cè)到供者同種反應(yīng)性NK細(xì)胞克隆，并證明供一受者方向KIR一配體不相合有利于患者的長(zhǎng)期無(wú)病生存，同時(shí)防止急性移植物抗宿主病GVHD的發(fā)生。小鼠移植模型證明供者同種反應(yīng)性NK細(xì)胞不僅能夠有效清除殘留白血病細(xì)胞，而且分別通過(guò)進(jìn)一步清除受者預(yù)處理殘留的T細(xì)胞和抗原遞呈細(xì)胞，促進(jìn)植入以及阻止AGVHD。后來(lái)GIEBEL等223在白血病患者無(wú)關(guān)供者造血干細(xì)胞移植中也證明供一受者方向KIR表位不相合有助于患者的無(wú)病生存，減少Ⅲ～Ⅳ度AGVHD的發(fā)生。實(shí)際上，同種反應(yīng)性NK細(xì)胞主要攻擊受者造血細(xì)維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM

簡(jiǎn)介：午曉群等NKG2D真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)YT細(xì)胞生物學(xué)功能的影響第L2期分子與細(xì)胞免疫學(xué)NKG2D真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)YT細(xì)胞生物學(xué)功能的影響①許曉群張建⑦④張彩游力張建華劉金生王郡甫高春義田志剛⑦山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，濟(jì)南250062885中國(guó)圖書(shū)分類號(hào)92．12文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)100X20O5120885．04摘要目的建立NK細(xì)胞受體NKG2D真核表達(dá)載體，通過(guò)轉(zhuǎn)染NK細(xì)胞系YT，初步探討NKG2D分子對(duì)YT細(xì)胞系殺傷功能的增強(qiáng)作用。方法用RTPCR方法從NK92細(xì)胞中調(diào)取NKG2D基因片段，克隆到PGEM．TEASY載體并對(duì)克隆的DNA片段進(jìn)行序列分析。用限制內(nèi)切酶EEORI和BAMHI消化PCEM．TEASY／NKG2D重組質(zhì)粒，分離NKG2D片段，并插入真核表達(dá)質(zhì)粒PEGFPN1的相應(yīng)限制酶位點(diǎn)，酶譜分析鑒定重組表達(dá)載體PEGFPN1／NKG2D。然后經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞和YT細(xì)胞。應(yīng)用熒光顯微鏡觀測(cè)、WESTERNBLOT方法和免疫組化染色對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)PEGFPNI／NKG2D的表達(dá)進(jìn)行鑒定，MTR方法觀察YT細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷功能。結(jié)果RTPCR擴(kuò)增獲得650BP基因片段，經(jīng)DNA序列分析證明所獲得的DNA序列與文獻(xiàn)報(bào)道的NKG2D序列一致。轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞在熒光顯微鏡下發(fā)出強(qiáng)綠色熒光，WESTERNBLOT分析顯示重組蛋白能特異地與抗人NKG2D單克隆抗體結(jié)合；免疫組化檢測(cè)顯示，轉(zhuǎn)染的CHO中有棕色顆粒，證明所構(gòu)建的NKG2D真核表達(dá)載體可以在細(xì)胞中表達(dá)；轉(zhuǎn)染NKG2D真核表達(dá)載體的YT細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的殺傷效果。結(jié)論所獲得的表達(dá)NKG2D分子的真核表達(dá)載體，通過(guò)轉(zhuǎn)染YT細(xì)胞，初步鑒定所表達(dá)NKG2D分子具有生物學(xué)功能，可以提高NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性。關(guān)鍵詞NKG2D受體；NK細(xì)胞；基因轉(zhuǎn)染；真核表達(dá)CONSTRUCTIONOFNKG2DEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORANDEFECTONYTCELLBIOLOGICALFUNCTIONXU‰，ZHANGJ／AN，ZHANGCAI，YOU12，ZHANGANHNA，刪J／NSHENG，WANGJUNFU，GAOCHUNYI，TIANZHIGANG．INSTITUEOFBASICMEDICINE，SHANDONGACADEMYOFMEDICALSCIENCE，J／NAN250062，CHINAABSTRACTOBJECTIVETOESTABLISHNKCELLRECEPTORNKG2DEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORANDINVESTIGATEONTHECYT0CITYOFNKCELLFINYTTRAECTEDWITHNKG2D．METHODSANKG2DGENEFRAGMENT，WITHALENGTH0FABOUT650BP，WASAMPLIFIEDFROMTHENK一92CEILLINEBYRTPCRANDWASSEQUENCEDBYCLONEDTOPNIDPGEMTEASY．THERECOMBINANTPLMIDPCTEASY／NKG2DWASDIGESTEDWITHECOR工ANDBAMH工，THENNKG2DFRAGMENTWASISOLATEDANDINSERTEDINTOTHECORRESPONDINGRESTRICTIONSITEONEUKARYOFIEEXPRESSIONVECTORPEGFPN1．THELIPOFECTINWASUSEDTOTRANSECTMCOMBIMNTEUKARYO6EEXPRESSIONPLASMIDINTOTHECHOANDYRCELLS．THEEXPRESSIONLEVELOFNKG2DGENEINTMECTEDCHOCEILSWASDETECTEDBYFLUORESCENCEMICROSCOPY，WESTERNBLOTANDIMMUNOHISTOEHOMICALSTAINING．RESULTSTHENGTHOFEDNAFRAGMENTAMPLIFIEDBYRTPCRWASCONSISTENTWITHTHAT0FNKG2D．DNASEQUENCING0FPGEMTEASY／NKG2DREVEALEDTHATTHECLONEDDNASQUENCEWASIDENTICALTOTHAT0FREPORTEDNKG2D．THEEENFLUORESCENCECOULDBESEENINTRANSFECTEDCHOCELLSUNDERFLUORESCCNEEMICROSCOPE．WESTERNBLOTANDIMMUNOHISTOCHEMICALSTAI,DETECTIONSHOWEDTHATNKG2DEXPRESSEDINTRANSFECTEDCELLS．TRANSFECTEDYTCELLSHAVESTRONGEREYTOTOXICITYAGAINSTTUMORCEIL．CONDUSIONNKG2DEUKARYOAEEXPRESSIONVECTORSHOWEDBIOLOGICALFUNCTIONBYTRANSFEETEDINTONKCEILLINEYTANDCOULDINCREASEYTCYTOLYFIEACTIVITY．KEYWORDSNKG2DRECEPTOR；NKCEIL；GENETRANSFECFION；EUKARYOFICEXPRESSIONNKG2D是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的表達(dá)于NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、7KI細(xì)胞及CD8細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞表面的NK細(xì)胞受體，是NK細(xì)胞識(shí)別靶細(xì)胞的一種主要結(jié)構(gòu)“。由于腫瘤細(xì)胞不表達(dá)或低表達(dá)MHC．I①本文受國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目30371302、3047152和山東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目YMCZ4資助②山東大學(xué)藥學(xué)院，濟(jì)南250012③通訊作者作者簡(jiǎn)介許曉群1975年一，男，碩士，助理研究員，主要從事基因工程和分子免疫學(xué)研究。類分子，使得腫瘤特異性MHC限制性細(xì)胞毒性T細(xì)胞CTL不能發(fā)揮作用。在這種情況下，識(shí)別非MHC．I類分子的NKG2D在介導(dǎo)NK細(xì)胞識(shí)別并溶解腫瘤細(xì)胞及感染細(xì)胞的免疫應(yīng)答中可能發(fā)揮關(guān)鍵作用L2】。近年來(lái)，對(duì)于NK細(xì)胞的分化發(fā)育、識(shí)別殺傷和功能調(diào)節(jié)的分子機(jī)制的研究日益引起重視。我們旨在構(gòu)建NKG2D基因的真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染NK細(xì)胞系，為進(jìn)一步研究NKG2D如何在NK細(xì)胞中發(fā)揮效應(yīng)功能及其腫瘤生物治療的應(yīng)用提供一種研究工具。維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM午曉群等NKG2D真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)YR細(xì)胞生物學(xué)功能的影響第12期ECORLBAMHLIECORLIBAMHLECORI_PG．FPNN／NKG2D535BPIFEGFP／KANNEOR／／HIE．1?1D川R圖1重組質(zhì)粒PEGFP．N1／NKG2D構(gòu)建示意圖№．1SCHEMATICCONSTRUCTIONOFPLASMIDPEGFPN1／NKG2D圖2重組質(zhì)粒PEGFPN1／NKG2D的酶切鑒定№．2RESTRICTIVEENZYMEDIGESTIONANALYSISOFRECOMBINANTPLASMIDPEGFP．N1／NKG2DNOTE1．NKG2DGENEFR,TNONT；2．PEGFPNI／NKG2DDIGESTEDWITHECORIANDBANLHI3．PCEM．TEASY／NKG2DDIGESTEDTHECORIANDBAMHI；4．1KBDNAMARKER．圖3GFP在CHO中的表達(dá)200№．3EXPRESSIONOFGFPINCHOS200NOTECHOSTRANSFECTEDBYPEGFPNI／NKG2DAFTER24HOURS．KDA6050402520一L5一88728圖4WESTERNBLOT鑒定NKG2D重組蛋白№．4ANALYSISOFRECOMBINANTPROTEINNKG2DBYWESTERNBLOTNOTE1．PRESTAINEDPROTEINLADDER；2．NONTRANDECTEDCHOS；3．CHOSTLDBFTEDBYPEGFPNI／NKG2D．AB圖5免疫組化染色檢測(cè)NKG2D在CHO中表達(dá)200№．5DETECTIONOFNKG2DEXPRESSIONINCHOSBYILI,DNUNOHISTOCHEMICALSTALG200NOTEA．CHOTRANSFECTEDBYEMPTYPLASMID；B．CHOTRANDECTEDBYPEG}3NI／NKG2D．圖6NKG2D對(duì)YT細(xì)胞殺傷OMDA231乳腺癌細(xì)胞的影響№．6INFLUENCEOFNKG2DONYT曲AGAINSTOMDA231CELLS2．3NKG2D真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞中NKG2D表達(dá)水平的鑒定①綠色熒光鑒定將重組質(zhì)粒PEGFPN1／NKG2D轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24、．旌一譬鬻辨。踟∞鯽加加一O／0一魯I3L蓉；U維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM