簡(jiǎn)介：微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)（副高、高級(jí)）病例分析題一個(gè)23歲男子因尿痛、尿頻，尿道有黃綠色膿性排出物或分泌物而入院。膿性分泌物涂片鏡檢顯示有大量多形核白細(xì)胞，其內(nèi)有革蘭染色陰性雙球菌。1病人最可能感染的病原體是A腦膜炎球菌B杜克嗜血桿菌C溶脲脲原體D淋病奈瑟菌E性病淋巴肉芽腫衣原體2治療首選藥物是A青霉素B頭孢曲松與強(qiáng)力霉素聯(lián)用C強(qiáng)力霉素D磺胺增效劑磺胺甲基異噁唑E萬(wàn)古霉素3該病原體在缺乏特異性抗體的情況下具有抗吞噬作用，這主要是由哪種抗原所致A莢膜B菌毛C外膜蛋白DIGA蛋白酶E脂多糖4如果在患者膿性分泌物中查不到病原菌，你人認(rèn)為尿道炎最常是由哪種病原體引起的A溶脲脲原體B梅毒螺旋體C單純皰疹病毒D沙眼衣原體血清型D～KE沙眼衣原體血清型L1、L2或L3一個(gè)患鐮狀細(xì)胞性貧血的5歲男童入院治療。他母親訴說(shuō)兒子發(fā)病3天，發(fā)熱、惡心、嘔吐和各種疼痛，包括頭痛。病人目前蒼白無(wú)力，病情在加重。他母親說(shuō)她女兒曾患此病10天，但與她兒子不同的是，女兒全身有花斑樣紅疹，面頰通紅。她女兒無(wú)鐮狀細(xì)胞性貧血，恢復(fù)很快。檢查結(jié)果顯示，該男孩血紅蛋白水平極低，血中未檢測(cè)到網(wǎng)狀細(xì)胞，常規(guī)血培養(yǎng)為陰性結(jié)果。9引起該男孩再生障礙性貧血危象的最可能的病原體是A流感嗜血桿菌B伯氏疏螺旋體C麻疹病毒DA族溶血性鏈球菌E微小病毒B1910男孩的姐姐可能患有A萊姆病B猩紅熱C麻疹D傳染性紅斑E幼兒急疹一個(gè)27歲婦女手臂上有一個(gè)淺藍(lán)色潰瘍，查體發(fā)現(xiàn)傷口周?chē)性S多小水泡，感染部位的軟組織出現(xiàn)膿腫、水腫，并有發(fā)熱和全身中毒癥狀。問(wèn)及近期活動(dòng)時(shí)，患者說(shuō)剛從墨西哥和美國(guó)中部旅游回來(lái)，她買(mǎi)了許多紀(jì)念品，包括一些皮革制品和一件羊皮夾克衫。11患者最有可能感染了哪種病原體A產(chǎn)氣莢膜梭菌B布魯菌C炭疽芽胞桿菌D鼠疫耶氏菌E單純皰疹病毒12患者是通過(guò)什么途徑感染的

簡(jiǎn)介：顯微鏡的使用操作流程及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容分值扣分標(biāo)準(zhǔn)扣分目的掌握顯微鏡的使用方法及注意事項(xiàng)用物準(zhǔn)備光學(xué)顯微鏡、載玻片、擦鏡紙、香柏油、脫油劑素質(zhì)要求讓學(xué)生能夠熟練使用顯微鏡操作步驟1安放把顯微鏡放在自己前面略偏左的桌面上，這樣便于用左眼觀察物像，用右眼看著畫(huà)圖。安放時(shí)鏡筒向前，鏡臂向后。2對(duì)光轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡正對(duì)通光孔，并使物鏡前端與載物臺(tái)有兩厘米左右的距離。然后把反光鏡對(duì)著光源，但是反光鏡不能直接對(duì)著太陽(yáng)。只要視野的光亮程度合適，光就對(duì)好了。3觀察對(duì)好光后，把顯微鏡玻片標(biāo)本放在載物臺(tái)上，并使玻片上的標(biāo)本對(duì)著通光孔的中心，再用壓片夾夾住。然后慢慢地轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦螺旋，直到接近玻片為止。接著，用左眼向目鏡內(nèi)注視，同時(shí)反方向轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦螺旋，直到看清物像為止。4再放大選好一個(gè)放大目標(biāo)，再把要放大的部分移到視野正中心，如果物像不清楚，再轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦螺旋。如果還觀察不清楚，就必須換用高倍物鏡。用高倍物鏡觀察時(shí)，高倍物鏡頂端離玻片很近，稍不小心，鏡頭就會(huì)壓到玻片，所以要特別小心。5在顯微鏡里看到的物像是倒像，因此，要使物像向上移動(dòng)，就要向下移動(dòng)玻片；要使物像向左移動(dòng)，就要向右移動(dòng)玻片。注意事項(xiàng)1先用低倍鏡觀察，用低倍鏡能看清的，就不再用高倍鏡。2必須保護(hù)好鏡頭。3載物臺(tái)要保持清潔干燥。4轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦螺旋不要用力過(guò)猛，以防損傷機(jī)件。5取用顯微鏡要輕拿輕放，要用右手握鏡臂，左手托鏡座。6使用完畢，要把顯微鏡外表擦干凈，并把鏡筒旋下至最低注意事項(xiàng)1革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色時(shí)間。2染色過(guò)程中勿使染色液干涸。3選用幼齡的細(xì)菌。G菌培養(yǎng)12H16H，ECOLI培養(yǎng)24H?；A(chǔ)培養(yǎng)基的制備與滅菌操作流程及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容分值扣分標(biāo)準(zhǔn)扣分目的掌握基礎(chǔ)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制流程、滅菌的方法及注意事項(xiàng)用物準(zhǔn)備牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉、1MOL/LNAOH、1MOL/LHCL試管、吸管、平皿、錐形瓶、量筒、吸管、精密PH試紙、天平、濾紙素質(zhì)要求要求熟練操作培養(yǎng)基的配制和滅菌操作步驟一、培養(yǎng)基的配制1配制溶液2調(diào)節(jié)PH值3過(guò)濾4分裝二、培養(yǎng)基的滅菌1開(kāi)蓋2通電3加水4放樣5設(shè)定溫度和時(shí)間

簡(jiǎn)介：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案11一、一、SOUTHERNSOUTHERN雜交雜交問(wèn)題問(wèn)題1電泳后發(fā)現(xiàn)凝膠中DNA擴(kuò)散，導(dǎo)致結(jié)果難以確定，如何解決這一問(wèn)題解決方案解決方案（1）在操作上電泳時(shí)隔孔上樣，電泳后要對(duì)凝膠及時(shí)處理使凝膠干燥；（2）瓊脂糖的質(zhì)量應(yīng)該較好，尤其是不應(yīng)含有內(nèi)切酶，否則有時(shí)將使低拷貝數(shù)基因的雜交結(jié)果難以解釋。問(wèn)題問(wèn)題2傳統(tǒng)方法中轉(zhuǎn)膜不完全的問(wèn)題如何克服解決方案解決方案經(jīng)典的向上轉(zhuǎn)移法會(huì)使凝膠短時(shí)間內(nèi)變薄,此時(shí)即使延長(zhǎng)轉(zhuǎn)移時(shí)間至24小時(shí)以上,也不能使大分子DNA良好地轉(zhuǎn)移出去,因此,轉(zhuǎn)膜不完全。向下轉(zhuǎn)膜法由于不需在吸水紙上增加重量,凝膠基本不變形；加之吸水紙的吸力與水受到的重力方向一致,故可以良好地完成DNA的轉(zhuǎn)移,它不需要特殊的儀器,轉(zhuǎn)移速度較快,轉(zhuǎn)移效率高。利用地高辛標(biāo)記探針進(jìn)行SOUTHERN雜交時(shí)，對(duì)于大于15KB的DNA片斷，轉(zhuǎn)膜之前用鹽酸進(jìn)行脫嘌呤可以促進(jìn)轉(zhuǎn)膜效率,但脫嘌呤過(guò)度可導(dǎo)致分子量相對(duì)較小的DNA被打斷成過(guò)小的片段而難以和尼龍膜結(jié)合。如果實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)膜過(guò)程中同時(shí)含有大于15KB的DNA通常為基因組和小片段DNA通常是基因組酶切產(chǎn)物，那么在轉(zhuǎn)移的過(guò)程中傾斜容器，僅使凝膠上半部分浸泡于鹽酸，這樣既可以提高大片斷DNA的轉(zhuǎn)移效率，又不會(huì)打碎小片段DNA。另外，等采用瓊指糖凝膠直接雜交的方法，來(lái)解決這一難題以轉(zhuǎn)基因鼠的檢測(cè)為例，實(shí)驗(yàn)步驟如下1轉(zhuǎn)基因鼠的建立以鼠乳清酸蛋白WAP基因5’調(diào)控區(qū)指導(dǎo)人GCSF基因?yàn)闃?gòu)件，建立轉(zhuǎn)基因小鼠。轉(zhuǎn)基因小鼠的檢測(cè)采用剪取鼠尾DNA做SOUTHERN進(jìn)行鑒定。2瓊脂糖凝膠直接雜交L用BANHI150U對(duì)由假孕鼠產(chǎn)生的仔鼠剪尾提取基因組DNA10ΜG酶切過(guò)液，取少量電泳檢查酶切完全后，上樣電泳8小時(shí)，2將電泳槽板連同凝膠置50℃放置3小時(shí)，用鑷子輕輕揭起凝膠，放于變性液05MNAOH，05MNACL20分鐘，轉(zhuǎn)置中和液05MTRISHCL，015MNACL20分鐘，將膠放于玻璃板上瀝干液體，室溫放置30分鐘。3干膠應(yīng)立即雜交。先將膠在水中泡一下，以利于操作。4將膠放人解決方案解決方案將煮沸的5G/LSDS溶液倒在膜上,待溶液自然冷卻至室溫,可除去膜上已雜交的DNA探針。洗脫后的尼龍膜,可反復(fù)用于其他探針的雜交至少可耐5輪雜交與洗脫。問(wèn)題問(wèn)題6SOUTHERN雜交中，探針的背景高，應(yīng)如何解決解決方案解決方案用隨機(jī)引物法標(biāo)記的探針要想得到最低的背景，在向尼龍膜上加PROBDIGEASYHYB混合物前,要用045ΜM醋酸纖維素膜過(guò)濾，勿用硝酸纖維素濾膜過(guò)濾。對(duì)每一個(gè)探針和目的片段，總是要根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定最合適的雜交條件，探針濃度很關(guān)鍵，如果太高，將會(huì)非特異性結(jié)合到膜上；太低，敏感性會(huì)降低。利用地高辛標(biāo)記探針進(jìn)行SOUTHERN雜交時(shí)，以下2種措施可降低背景1適當(dāng)延長(zhǎng)梯度洗膜的時(shí)間和提高洗膜溫度；2控制地高辛抗體的濃度。使用足夠量的地高辛抗體可以獲得較好的雜交信號(hào),但過(guò)量的地高辛抗體會(huì)在膜上產(chǎn)生非特異結(jié)合斑點(diǎn)。問(wèn)題問(wèn)題7SOUTHERN雜交沒(méi)有檢測(cè)出出雜交信號(hào)的原因，如何解決解決方案解決方案（1）目的DNA在總DNA中所占的比例，一般需要10ΜGDNA樣品,如果樣品中目的基因含量較高,可以按比例減少DNA用量。如果基因組中目的基因的拷貝數(shù)較低,致使常規(guī)的基因組用量不能滿足SOUTHERN雜交的需要,此時(shí)可加大基因組的用量；（2）探針的濃度和比活性在雜交袋中雜交需要02ML/CM2的雜交液；使用圓筒狀瓶子進(jìn)行雜交可以使用較小的體積，約01ML/CM2。（3）轉(zhuǎn)移到濾膜上的DNA量以及探針與目的DNA間的配對(duì)（見(jiàn)問(wèn)題2，3）二、藍(lán)白斑篩選二、藍(lán)白斑篩選問(wèn)題問(wèn)題1做藍(lán)白斑篩選只見(jiàn)白斑，不見(jiàn)藍(lán)斑，該如何做解決方案解決方案（1）做空白對(duì)照，將沒(méi)有進(jìn)行重組的宿主菌直接接入含有IPTG和XGALLB瓊脂糖平板在37℃下培養(yǎng)17小時(shí)以上以便顯色。顯色后將平板置于4

簡(jiǎn)介：臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案1試管凝集法檢測(cè)軍團(tuán)菌時(shí)，凝集結(jié)果的判定，“－”現(xiàn)象為A、上清完全透明，菌體于管底呈傘狀沉淀B、上清幾乎完全透明，管底有傘狀沉淀C、上清稍透明，管底有傘狀沉淀D、液體有勉強(qiáng)透明度，管底有稍微沉淀E、液體均勻渾濁，管底無(wú)沉淀答案E2保存免疫血清最佳方法是A、4℃保存B、冰箱冰盒中保存C、－20℃D、冷凍干燥保存E、－40℃保存答案D3說(shuō)明普通冰箱的溫度A、4℃B、4℃（18）℃C、0℃D、10℃E、20℃以下正確答案B4說(shuō)明低溫冰箱的溫度A、4℃B、48℃C、0℃D、10℃E、20℃以下正確答案EA、徒手B、專用鑷子C、墊紙D、帶手套E、普通鑷子正確答案B10常用于皮膚消毒的乙醇溶液一般常用濃度是多少A、2035B、5065C、7075D、8085E、9095答案C11對(duì)于霍亂弧菌兩類菌株（流行株與非流行株）噬菌體－生物分型試驗(yàn)，最少可用來(lái)完成A、一平皿三試管B、兩平皿三試管C、兩平皿兩試管D、三平皿三試管E、三平皿兩試管答案C12用異丙醇沉淀核酸與用乙醇沉淀相比，最顯著的優(yōu)點(diǎn)是A、揮發(fā)快B、可減少溶液體積C、可增大溶液體積D、容易去除E、蔗糖或氯化鈉更易與DNA共沉淀答案B13用乙醇沉淀溶于SDS的RNA時(shí)，應(yīng)避免使用的鹽類是A、乙酸銨

簡(jiǎn)介：臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案相關(guān)專業(yè)知識(shí)部分A1題型1、人類ABO血型抗原包括A、A抗原B、B抗原C、O抗原D、AB抗原E、A抗原和B抗原答案E2、ABO血型物質(zhì)在人體中可引起哪幾種AB產(chǎn)生A、抗B抗體B、抗AB抗體C、抗A抗體D、抗O抗體E、抗A和抗B抗體答案E3、免疫耐受就是A、非特異性無(wú)反應(yīng)性B、特異性無(wú)反應(yīng)性C、機(jī)體無(wú)反應(yīng)性D、免疫抑制性E、對(duì)任何抗原都不反應(yīng)答案B4、遲發(fā)型皮膚過(guò)敏反應(yīng)與下列哪種物質(zhì)有關(guān)A、IGEB、IGAC、活化B細(xì)胞D、活化T細(xì)胞9、葡萄球菌能產(chǎn)生多種溶血素，其中最主要的是A、Α、Β溶血素B、Α、Γ溶血素C、Β、Γ溶血素D、Δ、Ε溶血素E、Α、Γ溶血素答案A10、與其他肺部感染病原菌相比較，銅綠假單胞菌的毒力特點(diǎn)是A、產(chǎn)生外毒素B、具有內(nèi)毒素C、產(chǎn)生溶血素D、產(chǎn)生綠膿素E、具有菌毛答案D11、有莢膜的流感嗜血桿菌含有莢膜多糖抗原稱作A、V抗原B、M抗原C、A抗原D、X抗原E、S抗原答案B12、下列關(guān)于銅綠假單胞菌敘述中，正確的是A、革蘭氏陽(yáng)性球菌B、革蘭氏陽(yáng)性桿菌C、無(wú)芽孢D、具有莢膜E、無(wú)鞭毛答案C13、下列何種微生物具有莢膜結(jié)構(gòu)A、軍團(tuán)菌

簡(jiǎn)介：臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案A1型1蘭氏染色是細(xì)菌學(xué)中一種變要鑒到染色法，判定結(jié)果是A、G菌為紫色，G為紅色B、G菌為紅色，G為紫色C、G菌為綠色，G為紫色D、G菌為紫色，G為綠色E、G菌為無(wú)色，G為紅色答案B2對(duì)細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)等的檢查是通過(guò)顯微鏡觀察，在觀察其動(dòng)力時(shí)需要A、美蘭染色B、革蘭氏染色C、抗酸染色D、不染色E、復(fù)紅染色答案D3下列關(guān)于螺旋體的敘述，正確的是A、革蘭氏染色陽(yáng)性B、革蘭氏染色陰性C、對(duì)青霉素敏感D、對(duì)紅霉素抵抗E、專性需氧答案A4下列關(guān)于鉤端螺旋體的敘述正確的是A、有鞭毛B、鍍銀染色，鉤體為紅色C、鍍銀染色，鉤體為棕褐色D、革蘭氏染色陽(yáng)性E、人是唯一宿主A、天花病毒疫苗B、滅活疫苗C、痘苗病毒疫苗D、減毒活疫苗E、傳代細(xì)胞疫苗答案C10流行性腮腺炎最具有流行病學(xué)意義的傳染源是下列哪一種A、亞臨床型者B、疾病時(shí)期C、疾病早期D、疾病晚期E、疾病恢復(fù)期答案A11在對(duì)流電泳中，一般常見(jiàn)緩沖液是哪種A、碳酸鹽緩沖液B、TRISHCL緩沖液C、巴比妥緩沖液D、醋酸鹽醋酸緩沖液E、磷酸鹽緩沖液正確答案C12下列哪個(gè)選項(xiàng)是體內(nèi)DNA復(fù)制與體外PCR反應(yīng)不同的A、半保留復(fù)制B、DNTP做原料C、雙向復(fù)制D、引發(fā)酶參與E、DNA聚合酶參與正確答案D13下列致病菌中不具有侵襲力、不侵入腸上皮細(xì)胞的是A、傷寒沙門(mén)氏菌B、霍亂弧菌

簡(jiǎn)介：臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案1在對(duì)病人進(jìn)行診斷時(shí)，常采用血清學(xué)方法，AGAB反應(yīng)有許多特點(diǎn)，但AGAB反應(yīng)主要特點(diǎn)是A、分階段性B、可逆性C、敏感性高D、特異性E、非特異性答案D2革蘭氏染色是重要的細(xì)菌鑒別染色之一其媒染劑（盧戈氏碘液）所起的作用A、增加攝取染料作用，不易脫色B、固定初染細(xì)菌C、對(duì)下一步脫色起促進(jìn)作用D、殺死細(xì)菌E、破壞細(xì)菌細(xì)胞壁答案A3血清制品的保存常加一些防腐劑，防止雜菌生長(zhǎng)，常用的是硫柳汞常用濃度為A、0001B、001C、01D、1E、10答案B4能在SS瓊脂上生長(zhǎng)出的大腸埃希氏菌呈現(xiàn)______色A、淺紅B、深紅C、微黃D、無(wú)E、深灰9下列何種培養(yǎng)基適合軍團(tuán)菌培養(yǎng)A、慶大霉素培養(yǎng)基B、BCYE瓊脂培養(yǎng)基C、巧克力平板D、PPLO培養(yǎng)基E、KORTHOF培養(yǎng)基答案B10凍干菌種待完全干燥后，需將安瓶中空氣抽成真空，當(dāng)用真空火花檢測(cè)器檢測(cè)時(shí)，火花是什么顏色證明為真空A、紅色B、黃色C、白色D、紫色E、蘭綠色答案D11戊烷脒選擇性培養(yǎng)基，膽汁湟綠培養(yǎng)基適用于什么細(xì)菌培養(yǎng)A、霍亂弧菌B、白喉?xiàng)U菌C、破傷風(fēng)桿菌D、布魯氏菌E、炭疽桿菌答案E12活性炭酵母瓊脂培養(yǎng)基CYE是適用于培養(yǎng)什么細(xì)菌A、分離鼠疫桿菌B、布魯氏菌培養(yǎng)C、白喉?xiàng)U菌培養(yǎng)D、腸道細(xì)菌培養(yǎng)E、軍團(tuán)菌的培養(yǎng)答案E13牛肉膏湯是常用的培養(yǎng)基，但它有一個(gè)特點(diǎn)是什么

簡(jiǎn)介：臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案A1題型1機(jī)體抵抗病原微生物的屏障結(jié)構(gòu)包括A、皮膚與粘膜B、血腦屏障C、胎盤(pán)屏障D、免疫系統(tǒng)E、A、B和C答案E2有關(guān)內(nèi)毒素的描述哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的A、均由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生B、其化學(xué)成分為脂多糖C、160℃，24小時(shí)才被破壞D、毒害效應(yīng)具有組織器官選擇性E、毒性作用較弱答案D3下列描述哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的A、病原菌致病力的強(qiáng)弱度稱為毒力B、毒力主要由侵襲力和毒素所決定C、破傷風(fēng)毒素屬于內(nèi)毒素D、侵襲力是指病原菌突破宿主機(jī)體的防御功能，并能在體內(nèi)定居、繁殖和擴(kuò)散的能力E、以上均不是答案C4下列哪種成分不屬于外毒素A、脂多糖B、痙攣毒素C、肉毒毒素D、表皮剝脫毒素E、霍亂腸毒素A、類脂質(zhì)為胞壁中含量最多的成分B、產(chǎn)生外毒素C、產(chǎn)生內(nèi)毒素D、耐藥性低E、一般采用革蘭氏染色答案A10我國(guó)的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中，每升飲用水中不得超過(guò)（）個(gè)大腸桿菌A、1B、3C、5D、7E、8答案B11大腸桿菌指數(shù)測(cè)定時(shí)，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，能發(fā)酵乳糖（）為陽(yáng)性A、產(chǎn)酸B、產(chǎn)酸產(chǎn)氣C、產(chǎn)酸不產(chǎn)氣D、產(chǎn)氣不產(chǎn)酸E、以上都不產(chǎn)生答案B12下列何種細(xì)菌為革蘭氏陰性菌A、腦膜炎奈瑟菌B、結(jié)核分支桿菌C、銅綠假單細(xì)胞D、枯草芽孢桿菌E、白喉棒狀桿菌答案C13下列何種細(xì)菌為革蘭氏陽(yáng)性桿菌A、大腸桿菌B、銅綠假單細(xì)胞

簡(jiǎn)介：臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)考試題庫(kù)及答案臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)考試題庫(kù)及答案一、單選題一、單選題1細(xì)菌單位是ADMBCMCMMDUMENM答案D2對(duì)下列細(xì)菌大小表述錯(cuò)誤的是A葡萄球菌體直徑約1UMB大腸埃希菌長(zhǎng)約23UMC陰溝腸桿菌寬約0305UMD霍亂弧菌體長(zhǎng)23UME布魯菌長(zhǎng)23UM答案E3下列細(xì)菌菌體形態(tài)呈鏈狀排列的是A卡他布蘭漢菌B屎腸球菌C腐生葡萄球菌D肺炎克雷伯菌E淋病奈瑟菌答案B4下列細(xì)菌菌體形態(tài)呈螺旋形排列的是A表皮葡萄球菌B產(chǎn)酸克雷伯菌C克氏耶爾森菌D鼠咬熱螺菌E鮑氏志賀菌答案D5下列不屬于細(xì)菌基本結(jié)構(gòu)的是A細(xì)胞壁B芽胞C細(xì)胞膜D核質(zhì)E細(xì)胞質(zhì)答案B6不屬于革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁成分的是A脂蛋白B聚糖骨架C四肽側(cè)鏈D五肽交聯(lián)橋E脂多糖答案D7革蘭陽(yáng)性細(xì)菌細(xì)胞壁具有很強(qiáng)抗原性的成分是A外膜B肽聚糖C磷壁酸D聚糖骨架E五肽交聯(lián)橋答案C8下列菌有細(xì)胞壁外膜層的是A糞腸球菌B溶血葡萄球菌C新型隱球菌D產(chǎn)酸克雷伯菌17細(xì)菌的DNA存在于A蛋白質(zhì)B染色體和質(zhì)粒中C細(xì)胞質(zhì)染色體外D細(xì)胞壁E聚糖骨架中答案B18下列不屬于細(xì)菌細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分的是A脂質(zhì)B載體蛋白C多糖D酶E磷壁酸答案E19下列能將雄性菌的某些遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移給雌性菌的特殊結(jié)構(gòu)是A單鞭毛B普通菌毛C性菌毛D雙鞭毛E周鞭毛答案C20典型L型細(xì)菌菌落是A油煎蛋樣菌落B光滑型菌落C絲狀菌落DG型菌落EF型菌落答案A21細(xì)菌的RNA主要存在于A細(xì)胞壁B聚糖骨架C胞質(zhì)D脂多糖E蛋白質(zhì)答案C22細(xì)菌所含核糖核酸占細(xì)菌干重的A5B10C15D20E25答案B23細(xì)菌L型的特點(diǎn)不包括A形態(tài)多形性B染色不確定性C滲透壓敏感性D生化反應(yīng)增強(qiáng)E對(duì)抗生素抵抗答案D50從患者標(biāo)本中新分離的L型菌落常呈A顆粒型B荷包蛋樣C絲狀菌落D露珠樣E臍狀菌落答案A24細(xì)菌需氧呼吸最終電子受體是AH2OBO2CCO2

簡(jiǎn)介：臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案1IMVIC試驗(yàn)包括A、吲哚形成、甲基紅反應(yīng)、VP反應(yīng)和枸櫞酸鹽利用B、葡萄糖發(fā)酵、甲基紅反應(yīng)、VP反應(yīng)和枸櫞鹽利用C、吲哚形成、甲基紅反應(yīng)、VP反應(yīng)和碳酸鹽利用D、乳糖發(fā)酵、甲基紅反應(yīng)、VP反應(yīng)和枸櫞酸鹽利用E、吲哚形成、葡萄糖發(fā)酵、VP反應(yīng)和亞硝酸鹽還原答案A2耶爾森菌屬的特性中，哪一項(xiàng)不正確A、動(dòng)力25℃陽(yáng)性，37℃陰性B、尿素大都陽(yáng)性C、苯丙氨酸酶陰性D、乳糖不發(fā)酵E、動(dòng)力25℃陰性，37℃陽(yáng)性答案E3弧菌屬A、革蘭陰性短桿菌，散在排列，大多有周鞭毛B、革蘭陽(yáng)性，菌體染色不均勻，菌體一端或兩端膨大C、革蘭陰性較粗大的桿菌，有明顯的莢膜，無(wú)鞭毛D、革蘭陰性，弧形或逗點(diǎn)狀，細(xì)菌一端有單鞭毛E、革蘭陰性雙球菌，無(wú)鞭毛答案D4、分離腸道致病菌常用A、麥康凱瓊脂B、堿性瓊脂C、羅－琴培養(yǎng)基D、尿素培養(yǎng)基E、蛋黃平板答案AB、細(xì)菌屬于真核細(xì)胞型微生物C、支原體屬于原核細(xì)胞型微生物D、衣原體屬于原核細(xì)胞型微生物E、立克次氏體屬于原核細(xì)胞型微生物答案B10有關(guān)消毒劑的描述哪項(xiàng)是不正確的A、表面活性劑對(duì)核酸有親和力，影響繁殖B、染料能干擾氧化過(guò)程C、常用消毒劑包括2％－25％碘伏D、常用消毒劑包括2％－4％龍膽紫E、常消毒劑包括001－005％洗必泰答案A11遲緩愛(ài)德華菌的生化反應(yīng)，哪一項(xiàng)不正確A、硫化氫陽(yáng)性B、靛基質(zhì)陽(yáng)性C、枸櫞酸鹽陽(yáng)性D、甘露醇陰性E、尿素陰性答案C12沙雷菌屬的特性中，哪一項(xiàng)不正確A、革蘭陰性桿菌B、具周鞭毛C、以產(chǎn)芽胞D、觸酶強(qiáng)陽(yáng)性E、氧化酶強(qiáng)陽(yáng)性答案E13埃希菌屬A、革蘭陰性短桿菌，散在排列，大多有周鞭毛B、革蘭陽(yáng)性，菌體染色不均勻，菌體一端或兩端膨大C、革蘭陰性較粗大的桿菌，有明顯的莢膜，無(wú)鞭毛

簡(jiǎn)介：20202020年四川輕化工大學(xué)微生物學(xué)考研真題年四川輕化工大學(xué)微生物學(xué)考研真題A卷一、填空題4小題，10空，每空1分，共10分11、_____發(fā)明了分離和純化細(xì)菌的方法，并建立了著名的_____準(zhǔn)則，進(jìn)一步弄清了疾病和病原菌之間的關(guān)系。12、由WOESE提出生物的三個(gè)域是指_____域、_____域、和_____域。13、證明遺傳變異物質(zhì)基礎(chǔ)的三個(gè)經(jīng)典實(shí)驗(yàn)是_____、_____和_____。14、_____培養(yǎng)基可用于細(xì)菌培養(yǎng)，_____培養(yǎng)基可用于酵母菌培養(yǎng)。二、單項(xiàng)選擇題10小題，每題1分，共10分21、碳水化合物是微生物重要的能源和碳源，通常被異養(yǎng)微生物優(yōu)先利用A葡萄糖B甘露糖C乳糖D半乳糖22、酵母菌繁殖主要是通過(guò)A無(wú)性孢子B芽殖C有性孢子D菌絲片段23、下列微生物中，是真核微生物的A藍(lán)細(xì)菌B擔(dān)子菌C鏈霉菌A互生B寄生C捕食D拮抗29、UV誘變微生物突變的主要效應(yīng)是A引起堿基置換B引起移碼突變D引起染色體易位C產(chǎn)生嘧啶二聚體210、微生物發(fā)酵過(guò)程中，當(dāng)其代謝活動(dòng)使培養(yǎng)基PH值降低，可采取對(duì)其進(jìn)行調(diào)節(jié)。A加適當(dāng)碳并降低通氣量C加適當(dāng)?shù)床⒔档屯饬緽加適當(dāng)碳源并提高通氣量D加適當(dāng)?shù)床⑻岣咄饬咳?、判斷題10小題，每題1分，共10分，正確的請(qǐng)?zhí)顚?xiě)“√”，錯(cuò)誤的請(qǐng)?zhí)顚?xiě)“”31、在微生物生長(zhǎng)曲線中，穩(wěn)定期后期培養(yǎng)物是發(fā)酵工業(yè)中作為種子的最佳材料。32、在一密閉容器中接種厭氧菌和好氧菌，好氧菌首先生長(zhǎng)。33、察氏培養(yǎng)基是一種半合成培養(yǎng)基。34、在真菌菌絲的延伸和成熟過(guò)程中，其細(xì)胞壁的成分是穩(wěn)定的。35、親緣關(guān)系相近的種，其GC比接近，但GC比接近的兩個(gè)種，其親緣關(guān)系不一定接近。

簡(jiǎn)介：考試復(fù)習(xí)重點(diǎn)資料（最新版）考試復(fù)習(xí)重點(diǎn)資料（最新版）封面第1頁(yè)資料見(jiàn)第二頁(yè)資料見(jiàn)第二頁(yè)1緒論緒論?微生物學(xué)概述微生物學(xué)概述?微生物的定義微生物的定義?微生物的特點(diǎn)微生物的特點(diǎn)?微生物的分類微生物的分類?環(huán)境微生物學(xué)的研究對(duì)象和任務(wù)研究對(duì)象環(huán)境微生物學(xué)的研究對(duì)象和任務(wù)研究對(duì)象

簡(jiǎn)介：國(guó)外醫(yī)學(xué)輸血及血液學(xué)分冊(cè)2004年第27卷第5期NK細(xì)胞的免疫生物學(xué)特性王荷花綜述韓明哲審?！菊咳祟怤K細(xì)胞是機(jī)體抗腫瘤和抗病毒感染的天然免疫細(xì)胞，有自發(fā)的細(xì)胞毒功能，近1O年來(lái)人們發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞的識(shí)別也具有特異性。NK細(xì)胞表達(dá)多種受體，按受體識(shí)別的分子可分為HLAI類分子特異性受體、非HLAI類分子特異性受體和共受體三大類，功能上劃分為活化性受體和抑制性受體兩類，這些受體對(duì)NK細(xì)胞的功能有重要的調(diào)節(jié)作用。本文就NK細(xì)胞受體的特點(diǎn)和功能作一綜述，并探討開(kāi)發(fā)NK細(xì)胞新型潛在細(xì)胞免疫治療的價(jià)值?！娟P(guān)鍵詞】自然殺傷細(xì)胞；受體；細(xì)胞免疫治療人類NK細(xì)胞由骨髓造血干細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，約占外周血淋巴細(xì)胞的10～15，免疫表型特點(diǎn)為CD3一CD56，因細(xì)胞胞體大、胞漿量多、電鏡下觀察胞內(nèi)含有致密顆粒，故又稱為大顆粒淋巴細(xì)胞。NK細(xì)胞的發(fā)育成熟非胸腺依賴性，也無(wú)抗原特異性受體的表達(dá)，因此最初被認(rèn)為是一種天然免疫細(xì)胞，具有天然的和淋巴細(xì)胞因子活化的細(xì)胞毒活性、分泌有免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子以及抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒活性。早期人們發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞殺傷的靶細(xì)胞常有HLAI類分子表達(dá)水平的下調(diào)I1，另外NK細(xì)胞也能介導(dǎo)排斥同種異體的正常骨髓細(xì)胞_2。近來(lái)隨著NK細(xì)胞受作者單位300020天津，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)血液學(xué)研究所血液病醫(yī)院433綜述體的不斷發(fā)現(xiàn)及其對(duì)NK細(xì)胞功能調(diào)節(jié)的研究，使人們認(rèn)識(shí)到NK細(xì)胞識(shí)別功能的特異性，有利于開(kāi)發(fā)新的細(xì)胞免疫治療。1NK細(xì)胞受體NK細(xì)胞表達(dá)多種不同的受體，按其識(shí)別的配體可分為三大類3HLAI類分子特異性受體、非HLAI類分子特異性受體和其他受體，根據(jù)受體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)又可劃分為免疫球蛋白樣超家族受體和C型凝集素超家族受體兩大家族I4。1．1HLAI類分子特異性受體這一大類受體識(shí)別的配體是HLAI類分子，它包括免疫球蛋白樣超家族受體殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體KILLERCELLIMMUNOGLOBULINLIKERECEPTORS，KIR23DRUKERBJ。SAWYERSCL，KANTARJIANH，ETA1．ACTIVITYOFASPECI．CINHIBITOROFTHEBETABLTYROSINEKINASEINTHEBLASTCRISISOFCHRONICMYELOIDLEUKEMIAANDACUTELYMPHOBLASTICLEUKEMIAWITHTHEPHILADELPHIACHROMOSOME．NENGLJMED，2001，34410381042．24KANTARJIANH，SAWYERSC，HOCHHAUSA，ETA1．HEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESTOIMATINIBMESYLATEINCHRONICMYELOGENOUSLEUKEMIA．NENGLJMED，2002，346645652．25TALPAZM，SILVERRT，DRUKERBJ，ETA1．IMATINIBINDUCESDURABLEHEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESINPATIENTSWITHACCELERATEDPHASECHRONICMYELOIDLEUKEMIA；RESULTSOFAPHASE2STUDY．BLOOD，2002，9919281937．26SAWYERSCL。HOCHHAUSA，F(xiàn)ELDMANE。ETA1．IMATINIBINDUCESHEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESINPATIENTSWITHCHRONICMYELOIDLEUKEMIAINMYELOIDBLASTCRISISRESULTSOFAPHASE1STUDY．BLOOD，2002，9935303539．27KANTARJIANHJORGEC，O’BRIENS，ETA1．HIGHRATESOFEARLYMAJORANDCOMPLETECYTOGENETICRESPONSESWITHIMATINIBMESYLATETHERAPYGIVENAT400MGOR800MGORALLYDAILYINPATIENTSWITHNEWLYDIAGNOSEDPHILADELPHIACHROMOSOMEPOSITIVECHRONICMYELOIDLEUKEMIAINCHRONICPHASE．PROCAMSOCCLINONCO1．2002。21261AABSTR．28DRUKERBJ，F(xiàn)ORTHEIRISINTERNATIONALRANDOMIZEDIFNVS．STI571STUDYGROUPSTI571GLEEVEC／GLIVECIMATINIBVERSUSINTERFERONIFN一CYTARABINEASINITIALTHERAPYFORPATIENTSWITHCMLRESULTSOFARANDOMIZEDSTUDY．PROCAMSOCCLIN0NC。2002，21LAABSTR．29DRUKERBJ。SAWYERSCL，CAPDEVILLER，ETA1．CHRONICMYELOGENOUSLEUKEMIA．HEMATOLOGY，AMSOCHEMATOLEDUCPROGRAM2001，87112．3O0’BRIENSG，VALLANCESE，CRADDOCKC．ETA1．PEGINTRONANDST1571COMBINATIONEVALUATIONSTUDYPISCESINCHRONICPHASECHRONICMYELOIDLEUKAEMIA．BLOOD，2001。98846ASUPPL1，ABSTR．31DRUKERB，KANTARJIANH，TALPAZM，ETA1．APHASEISTUDYOFTHECOMBINATIONOFGLEEVECIMATINIBMESYLATEWITHLOWDOSEARAC．BLOOD，2001，98845ASUPPL1，ABSTR．32BRIANJ．DRUKER．IMATINIBALONEANDINCOMBINATIONFORCHRONIEMYELOIDLEUKEMIA．SEMINARSINHEMATOLOGY，2003，4015058．收稿日期2004一O4一O1本文編輯羅幼平IL￡}}維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM國(guó)外醫(yī)學(xué)輸血及血液學(xué)分冊(cè)2004年第27卷第5期HLAI類分子特異性活化性受體KIR和CD94／NKG2C、E、H的結(jié)構(gòu)共同點(diǎn)是受體胞質(zhì)尾短，無(wú)ITIM基序，受體活化信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)需DAP12_1。DAP12胞質(zhì)尾含有由YXXL／I氨基酸序列組成的2個(gè)ITAMIMMUNORECEPTORTYROSINEACTINGMOTIF基序。NK細(xì)胞活化性受體的集結(jié)導(dǎo)致YXXL序列中酪氨酸快速而短暫的磷酸化，隨后募集并活化蛋白酪氨酸激酶SYK或ZAP70轉(zhuǎn)導(dǎo)活化信號(hào)，使NK細(xì)胞活化。雖然NCR目前尚未明確配體，但與單克隆抗作用的研究發(fā)現(xiàn)其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)類似于上述途徑，其中NKP46和NKP30的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通過(guò)含經(jīng)典ITAM的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)肽CD3鏈，NKP44則與DAP12結(jié)合。NKG2D活化信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)由DAP10介導(dǎo)，與DAP12不同，DAP10分子胞質(zhì)尾無(wú)ITAM結(jié)構(gòu)，但含有一個(gè)YXXM氨基酸序列，其酪氨酸磷酸化后與PI一3亞單位P85結(jié)合，啟動(dòng)活化信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)口。因此，NKG2D活化信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑完全不同于NK細(xì)胞HLAI類分子特異性活化性受體。3NK細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)很顯然，NK細(xì)胞的功能受其表達(dá)的抑制性受體和活化性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)性信號(hào)和活化信號(hào)之間平衡機(jī)制調(diào)節(jié)。NK細(xì)胞表達(dá)的受體中，HLAI類分子特異的抑制性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制NK細(xì)胞活化的負(fù)性信號(hào)，NCR、NKG2D和HLAI類分子特異的活化性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)活化信號(hào)，共受體則協(xié)同NK細(xì)胞功能的活化。對(duì)同一NK細(xì)胞表達(dá)的HIAI類分子特異性受體而言，雖然識(shí)別相同或相似HIAI類分子的KIR和CD94／NKG2抑制性受體和活化性受體都能與相應(yīng)的配體結(jié)合，但通常抑制性受體與HLAI類分子結(jié)合的親和力顯著高于活化性受體N。另外，僅少數(shù)NK細(xì)胞克隆同時(shí)表達(dá)識(shí)別相同HLAI類分子同種型的活化性受體和抑制性受體，通常大多數(shù)NK細(xì)胞克隆表達(dá)的是不同HLA1分子同種型的抑制性受體。所以，在正常情況下，NK細(xì)胞的抑制性受體與自身正常細(xì)胞表達(dá)的HLAI類分子結(jié)合后，轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制該NK細(xì)胞活化的負(fù)性信號(hào)，導(dǎo)致啟動(dòng)NK細(xì)胞活化的早期階段分子失活，從而阻止NK細(xì)胞的活化，即NK細(xì)胞以轉(zhuǎn)導(dǎo)負(fù)性信號(hào)占優(yōu)勢(shì)。這也就阻止了NK細(xì)胞對(duì)宿主自身正常細(xì)胞的殺傷作用，避免自身免疫反應(yīng)的發(fā)生。病理情況下，當(dāng)NK細(xì)胞識(shí)別自身HIAI類分子水平下調(diào)或丟失的腫瘤細(xì)胞、病原體感染的細(xì)胞時(shí)，抑制性受體與HIAI類分子作用水平減低或不能與之結(jié)合，導(dǎo)致抑制NK細(xì)胞活化的信號(hào)減弱或缺乏，則啟動(dòng)活化性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)的活化信號(hào)，使該NK細(xì)胞活化，發(fā)揮細(xì)胞毒功能，裂解靶細(xì)胞。若該靶細(xì)胞同時(shí)表達(dá)MLCA／MLCB分子，可激活不同信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的活化性受體NKG2D，進(jìn)一步增強(qiáng)NK細(xì)胞的活化信號(hào)，提高宿主的疾病防御能力。綜上所述，NK細(xì)胞通過(guò)表達(dá)多種受體的調(diào)節(jié)方式，整合抑制性受體和活化性受體轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)性信號(hào)和活化信號(hào)，使機(jī)體能夠區(qū)分自身正常細(xì)胞和HLA1分子水平下調(diào)或丟失的異常細(xì)胞，從而闡明了NK細(xì)胞免疫監(jiān)視“丟失自我”MISSINGSELF假說(shuō)的機(jī)制。4NK細(xì)胞的免疫治療應(yīng)用NK細(xì)胞識(shí)別“自己”和“非己”的特性，調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的活性，可能為免疫治療提供新的途徑。理論上阻斷抑制性受體與MHCI類分子的相互作用，解除對(duì)NK細(xì)胞活化的抑制，能夠有效增強(qiáng)NK細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)。KOH等N實(shí)驗(yàn)研究證明，采用單克隆抗體封閉同基因小鼠NK細(xì)胞抑制性受體或者過(guò)繼性MHCI不相合異基因NK細(xì)胞凈化骨髓和自體骨髓移植后的維持治療，有效提高了白血病小鼠長(zhǎng)期無(wú)白血病復(fù)發(fā)存活率，同時(shí)對(duì)造血重建無(wú)明顯影響。這一效應(yīng)同樣能在病毒感染如巨細(xì)胞病毒感染時(shí)巨細(xì)胞病毒能夠編碼MHCI類分子樣類似物以逃逸免疫系統(tǒng)的殺傷發(fā)揮作用。在異基因造血干細(xì)胞移植中ALLOSCT，供一受者問(wèn)NK細(xì)胞識(shí)別的特異性主要指抑制性受體識(shí)別的特異性，即兩者抑制性受體識(shí)別的配體是否相合，另外由于移植預(yù)處理的作用使受者NK細(xì)胞基本被清除，所以移植后主要存在的是供者NK細(xì)胞的同種反應(yīng)性，即指受者M(jìn)HCI類基因不編碼供者所有NK細(xì)胞抑制性受體識(shí)別的MHCI類分子。因此，此NK細(xì)胞亞群KIR抑制性受體不能與受者M(jìn)HCI類分子結(jié)合，從而阻斷抑制信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，有利于供者NK細(xì)胞的活化，增強(qiáng)移植后抗殘留腫瘤細(xì)胞的功能。RUGGERI等發(fā)現(xiàn)在白血病患者HLA半相合干細(xì)胞移植后，供一受者方向KIR一配體不相合的受者體內(nèi)可檢測(cè)到供者同種反應(yīng)性NK細(xì)胞克隆，并證明供一受者方向KIR一配體不相合有利于患者的長(zhǎng)期無(wú)病生存，同時(shí)防止急性移植物抗宿主病GVHD的發(fā)生。小鼠移植模型證明供者同種反應(yīng)性NK細(xì)胞不僅能夠有效清除殘留白血病細(xì)胞，而且分別通過(guò)進(jìn)一步清除受者預(yù)處理殘留的T細(xì)胞和抗原遞呈細(xì)胞，促進(jìn)植入以及阻止AGVHD。后來(lái)GIEBEL等223在白血病患者無(wú)關(guān)供者造血干細(xì)胞移植中也證明供一受者方向KIR表位不相合有助于患者的無(wú)病生存，減少Ⅲ～Ⅳ度AGVHD的發(fā)生。實(shí)際上，同種反應(yīng)性NK細(xì)胞主要攻擊受者造血細(xì)維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM

簡(jiǎn)介：午曉群等NKG2D真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)YT細(xì)胞生物學(xué)功能的影響第L2期分子與細(xì)胞免疫學(xué)NKG2D真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)YT細(xì)胞生物學(xué)功能的影響①許曉群張建⑦④張彩游力張建華劉金生王郡甫高春義田志剛⑦山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，濟(jì)南250062885中國(guó)圖書(shū)分類號(hào)92．12文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)100X20O5120885．04摘要目的建立NK細(xì)胞受體NKG2D真核表達(dá)載體，通過(guò)轉(zhuǎn)染NK細(xì)胞系YT，初步探討NKG2D分子對(duì)YT細(xì)胞系殺傷功能的增強(qiáng)作用。方法用RTPCR方法從NK92細(xì)胞中調(diào)取NKG2D基因片段，克隆到PGEM．TEASY載體并對(duì)克隆的DNA片段進(jìn)行序列分析。用限制內(nèi)切酶EEORI和BAMHI消化PCEM．TEASY／NKG2D重組質(zhì)粒，分離NKG2D片段，并插入真核表達(dá)質(zhì)粒PEGFPN1的相應(yīng)限制酶位點(diǎn)，酶譜分析鑒定重組表達(dá)載體PEGFPN1／NKG2D。然后經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞和YT細(xì)胞。應(yīng)用熒光顯微鏡觀測(cè)、WESTERNBLOT方法和免疫組化染色對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)PEGFPNI／NKG2D的表達(dá)進(jìn)行鑒定，MTR方法觀察YT細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷功能。結(jié)果RTPCR擴(kuò)增獲得650BP基因片段，經(jīng)DNA序列分析證明所獲得的DNA序列與文獻(xiàn)報(bào)道的NKG2D序列一致。轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞在熒光顯微鏡下發(fā)出強(qiáng)綠色熒光，WESTERNBLOT分析顯示重組蛋白能特異地與抗人NKG2D單克隆抗體結(jié)合；免疫組化檢測(cè)顯示，轉(zhuǎn)染的CHO中有棕色顆粒，證明所構(gòu)建的NKG2D真核表達(dá)載體可以在細(xì)胞中表達(dá)；轉(zhuǎn)染NKG2D真核表達(dá)載體的YT細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的殺傷效果。結(jié)論所獲得的表達(dá)NKG2D分子的真核表達(dá)載體，通過(guò)轉(zhuǎn)染YT細(xì)胞，初步鑒定所表達(dá)NKG2D分子具有生物學(xué)功能，可以提高NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性。關(guān)鍵詞NKG2D受體；NK細(xì)胞；基因轉(zhuǎn)染；真核表達(dá)CONSTRUCTIONOFNKG2DEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORANDEFECTONYTCELLBIOLOGICALFUNCTIONXU‰，ZHANGJ／AN，ZHANGCAI，YOU12，ZHANGANHNA，刪J／NSHENG，WANGJUNFU，GAOCHUNYI，TIANZHIGANG．INSTITUEOFBASICMEDICINE，SHANDONGACADEMYOFMEDICALSCIENCE，J／NAN250062，CHINAABSTRACTOBJECTIVETOESTABLISHNKCELLRECEPTORNKG2DEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORANDINVESTIGATEONTHECYT0CITYOFNKCELLFINYTTRAECTEDWITHNKG2D．METHODSANKG2DGENEFRAGMENT，WITHALENGTH0FABOUT650BP，WASAMPLIFIEDFROMTHENK一92CEILLINEBYRTPCRANDWASSEQUENCEDBYCLONEDTOPNIDPGEMTEASY．THERECOMBINANTPLMIDPCTEASY／NKG2DWASDIGESTEDWITHECOR工ANDBAMH工，THENNKG2DFRAGMENTWASISOLATEDANDINSERTEDINTOTHECORRESPONDINGRESTRICTIONSITEONEUKARYOFIEEXPRESSIONVECTORPEGFPN1．THELIPOFECTINWASUSEDTOTRANSECTMCOMBIMNTEUKARYO6EEXPRESSIONPLASMIDINTOTHECHOANDYRCELLS．THEEXPRESSIONLEVELOFNKG2DGENEINTMECTEDCHOCEILSWASDETECTEDBYFLUORESCENCEMICROSCOPY，WESTERNBLOTANDIMMUNOHISTOEHOMICALSTAINING．RESULTSTHENGTHOFEDNAFRAGMENTAMPLIFIEDBYRTPCRWASCONSISTENTWITHTHAT0FNKG2D．DNASEQUENCING0FPGEMTEASY／NKG2DREVEALEDTHATTHECLONEDDNASQUENCEWASIDENTICALTOTHAT0FREPORTEDNKG2D．THEEENFLUORESCENCECOULDBESEENINTRANSFECTEDCHOCELLSUNDERFLUORESCCNEEMICROSCOPE．WESTERNBLOTANDIMMUNOHISTOCHEMICALSTAI,DETECTIONSHOWEDTHATNKG2DEXPRESSEDINTRANSFECTEDCELLS．TRANSFECTEDYTCELLSHAVESTRONGEREYTOTOXICITYAGAINSTTUMORCEIL．CONDUSIONNKG2DEUKARYOAEEXPRESSIONVECTORSHOWEDBIOLOGICALFUNCTIONBYTRANSFEETEDINTONKCEILLINEYTANDCOULDINCREASEYTCYTOLYFIEACTIVITY．KEYWORDSNKG2DRECEPTOR；NKCEIL；GENETRANSFECFION；EUKARYOFICEXPRESSIONNKG2D是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的表達(dá)于NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、7KI細(xì)胞及CD8細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞表面的NK細(xì)胞受體，是NK細(xì)胞識(shí)別靶細(xì)胞的一種主要結(jié)構(gòu)“。由于腫瘤細(xì)胞不表達(dá)或低表達(dá)MHC．I①本文受?chē)?guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目30371302、3047152和山東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目YMCZ4資助②山東大學(xué)藥學(xué)院，濟(jì)南250012③通訊作者作者簡(jiǎn)介許曉群1975年一，男，碩士，助理研究員，主要從事基因工程和分子免疫學(xué)研究。類分子，使得腫瘤特異性MHC限制性細(xì)胞毒性T細(xì)胞CTL不能發(fā)揮作用。在這種情況下，識(shí)別非MHC．I類分子的NKG2D在介導(dǎo)NK細(xì)胞識(shí)別并溶解腫瘤細(xì)胞及感染細(xì)胞的免疫應(yīng)答中可能發(fā)揮關(guān)鍵作用L2】。近年來(lái)，對(duì)于NK細(xì)胞的分化發(fā)育、識(shí)別殺傷和功能調(diào)節(jié)的分子機(jī)制的研究日益引起重視。我們旨在構(gòu)建NKG2D基因的真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染NK細(xì)胞系，為進(jìn)一步研究NKG2D如何在NK細(xì)胞中發(fā)揮效應(yīng)功能及其腫瘤生物治療的應(yīng)用提供一種研究工具。維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM午曉群等NKG2D真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)YR細(xì)胞生物學(xué)功能的影響第12期ECORLBAMHLIECORLIBAMHLECORI_PG．FPNN／NKG2D535BPIFEGFP／KANNEOR／／HIE．1?1D川R圖1重組質(zhì)粒PEGFP．N1／NKG2D構(gòu)建示意圖№．1SCHEMATICCONSTRUCTIONOFPLASMIDPEGFPN1／NKG2D圖2重組質(zhì)粒PEGFPN1／NKG2D的酶切鑒定№．2RESTRICTIVEENZYMEDIGESTIONANALYSISOFRECOMBINANTPLASMIDPEGFP．N1／NKG2DNOTE1．NKG2DGENEFR,TNONT；2．PEGFPNI／NKG2DDIGESTEDWITHECORIANDBANLHI3．PCEM．TEASY／NKG2DDIGESTEDTHECORIANDBAMHI；4．1KBDNAMARKER．圖3GFP在CHO中的表達(dá)200№．3EXPRESSIONOFGFPINCHOS200NOTECHOSTRANSFECTEDBYPEGFPNI／NKG2DAFTER24HOURS．KDA6050402520一L5一88728圖4WESTERNBLOT鑒定NKG2D重組蛋白№．4ANALYSISOFRECOMBINANTPROTEINNKG2DBYWESTERNBLOTNOTE1．PRESTAINEDPROTEINLADDER；2．NONTRANDECTEDCHOS；3．CHOSTLDBFTEDBYPEGFPNI／NKG2D．AB圖5免疫組化染色檢測(cè)NKG2D在CHO中表達(dá)200№．5DETECTIONOFNKG2DEXPRESSIONINCHOSBYILI,DNUNOHISTOCHEMICALSTALG200NOTEA．CHOTRANSFECTEDBYEMPTYPLASMID；B．CHOTRANDECTEDBYPEG}3NI／NKG2D．圖6NKG2D對(duì)YT細(xì)胞殺傷OMDA231乳腺癌細(xì)胞的影響№．6INFLUENCEOFNKG2DONYT曲AGAINSTOMDA231CELLS2．3NKG2D真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞中NKG2D表達(dá)水平的鑒定①綠色熒光鑒定將重組質(zhì)粒PEGFPN1／NKG2D轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24、．旌一譬鬻辨。踟∞鯽加加一O／0一魯I3L蓉；U維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM

簡(jiǎn)介：周德慶編微生物學(xué)課后習(xí)題答案周德慶編微生物學(xué)課后習(xí)題答案緒論緒論1什么是微生物什么是微生物它包括哪些類群它包括哪些類群答微生物是一切肉眼看不見(jiàn)或看不清的微小生物的總稱包括①原核類的細(xì)菌放線菌藍(lán)細(xì)菌’支原體立克次氏體和衣原體②真核類的真菌原生動(dòng)物和顯微藻類,以及屬于非細(xì)胞類的病毒和亞病毒2人類遲至人類遲至1919世紀(jì)才真正認(rèn)識(shí)微生物世紀(jì)才真正認(rèn)識(shí)微生物,其中主要克服了哪些重大障礙其中主要克服了哪些重大障礙答①顯微鏡的發(fā)明,②滅菌技術(shù)的運(yùn)用，③純種分離技術(shù)，④培養(yǎng)技術(shù)。33簡(jiǎn)述微生物生物學(xué)發(fā)展史上的簡(jiǎn)述微生物生物學(xué)發(fā)展史上的5個(gè)時(shí)期的特點(diǎn)和代表人物個(gè)時(shí)期的特點(diǎn)和代表人物答史前期（約8000年前1676），各國(guó)勞動(dòng)人民，①未見(jiàn)細(xì)菌等微生物的個(gè)體；②憑實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)利用微生物是有益活進(jìn)行釀酒、發(fā)面、制醬、娘醋、漚肥、輪作、治病等）初創(chuàng)期（16761861年），列文虎克，①自制單式顯微鏡，觀察到細(xì)菌等微生物的個(gè)體；②出于個(gè)人愛(ài)好對(duì)一些微生物進(jìn)行形態(tài)描述；奠基期（18611897年），巴斯德，①微生物學(xué)開(kāi)始建立；②創(chuàng)立了一整套獨(dú)特的微生物學(xué)基本研究方法；③開(kāi)始運(yùn)用“實(shí)踐理論實(shí)踐”的思想方法開(kāi)展研究；④建立了許多應(yīng)用性分支學(xué)科；⑤進(jìn)入尋找人類動(dòng)物病原菌的黃金時(shí)期；發(fā)展期（18971953年），EBUCHNER，①對(duì)無(wú)細(xì)胞酵母菌“酒化酶”進(jìn)行生化研究；②發(fā)現(xiàn)微生物的代謝統(tǒng)一性；③普通微生物學(xué)開(kāi)始形成；④開(kāi)展廣泛尋找微生物的有益代謝產(chǎn)物；⑤青霉素的發(fā)現(xiàn)推動(dòng)了微生物工業(yè)化培養(yǎng)技術(shù)的猛進(jìn)；成熟期（1953至今）JWATSON和FCRICK，①?gòu)V泛運(yùn)用分子生物學(xué)理論好現(xiàn)代研究方法，深刻揭示微生物的各種生命活動(dòng)規(guī)律；②以基因工程為主導(dǎo)，把傳統(tǒng)的工業(yè)發(fā)酵提高到發(fā)酵工程新水平；③大量理論性、交叉性、應(yīng)用性和實(shí)驗(yàn)性分支學(xué)科飛速發(fā)展；④微生物學(xué)的基礎(chǔ)理論和獨(dú)特實(shí)驗(yàn)技術(shù)推動(dòng)了生命科學(xué)個(gè)領(lǐng)域飛速發(fā)展；⑤微生物基因組的研究促進(jìn)了生物信息學(xué)時(shí)代的到來(lái)。44試述微生物與當(dāng)代人類實(shí)踐的重要關(guān)系。試述微生物與當(dāng)代人類實(shí)踐的重要關(guān)系。55微生物對(duì)生命科學(xué)基礎(chǔ)理微生物對(duì)生命科學(xué)基礎(chǔ)理______________論的研究有和重大貢獻(xiàn)為什么能發(fā)揮這種作用論的研究有和重大貢獻(xiàn)為什么能發(fā)揮這種作用答微生物由于其“五大共性”加上培養(yǎng)條件簡(jiǎn)便，因此是生命科學(xué)工作者在研究基礎(chǔ)理論問(wèn)題時(shí)最樂(lè)于選用的研究對(duì)象。歷史上自然發(fā)生說(shuō)的否定，糖酵解機(jī)制的認(rèn)識(shí)，基因與酶關(guān)系的發(fā)現(xiàn)，突變本質(zhì)的闡明，核酸是一切生物遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)的證實(shí)，操縱子學(xué)說(shuō)的提出，遺傳密碼的揭示，基因工程的開(kāi)創(chuàng)，PCR技術(shù)的建立，真核細(xì)胞內(nèi)共生學(xué)說(shuō)的提出，以及近年來(lái)生物三域理論的創(chuàng)建等，都是因選用微生物作為研究對(duì)象而結(jié)出的碩果。為此，大量研究者還獲得了諾貝爾獎(jiǎng)的殊榮。微生物還是代表當(dāng)代生物學(xué)最高峰的分子生物學(xué)三大來(lái)源之一。在經(jīng)典遺傳學(xué)的發(fā)展過(guò)程中，由于先驅(qū)者們意識(shí)到微生物具有繁殖周期短、培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單、表型性狀豐富和多數(shù)是單倍體等種種特別適合作遺傳學(xué)研究對(duì)象的優(yōu)點(diǎn)，紛紛選用粗糙脈孢菌，大腸桿菌，釀酒酵母和T系噬菌體作研究對(duì)象，很快揭示了許多遺傳變異的規(guī)律，并使經(jīng)典遺傳學(xué)迅速發(fā)展成為分子遺傳學(xué)。從1970年代起，由于微生物既可以作為外源基因供體和基因載體，并可作為基因受體菌等的優(yōu)點(diǎn)，加上又是基因工程操作中的各種“工具酶”的提供者，故迅速成為基因工2．典型細(xì)菌的大小和重量是多少試設(shè)想幾種形象化的比喻加以說(shuō)明．典型細(xì)菌的大小和重量是多少試設(shè)想幾種形象化的比喻加以說(shuō)明。答一個(gè)典型的細(xì)菌可用ECOLI作代表，它的細(xì)胞平均長(zhǎng)度約為2UM，寬度約05UM，形象地說(shuō)，若把1500個(gè)細(xì)菌的長(zhǎng)徑相連，僅等于一顆芝麻的長(zhǎng)度，如果把120個(gè)細(xì)胞橫向緊挨在一起，其總寬度才抵得上一根人發(fā)的粗細(xì)。它的重量更是微乎其微，若以每個(gè)細(xì)胞濕重約102G計(jì)，則大約109個(gè)ECOLI細(xì)胞才達(dá)1MG重。3．試圖示．試圖示GG和GG細(xì)菌細(xì)胞壁的主要構(gòu)造，并簡(jiǎn)要說(shuō)明其異同。細(xì)菌細(xì)胞壁的主要構(gòu)造，并簡(jiǎn)要說(shuō)明其異同。答圖示如下（略）答圖示如下（略）G細(xì)菌與G細(xì)菌的細(xì)胞壁都含肽聚糖和磷壁酸細(xì)胞壁都含肽聚糖和磷壁酸；不同的是含量的區(qū)別如下表成分占細(xì)胞壁干重的G細(xì)菌G細(xì)菌肽聚糖含量很高（50～90）含量很低（～10）磷壁酸含量較高（﹤50）無(wú)類脂質(zhì)一般無(wú)（﹤2）含量較高（～20）蛋白質(zhì)無(wú)含量較高4．試圖示肽聚糖的模式構(gòu)造，并指出．試圖示肽聚糖的模式構(gòu)造，并指出GG和GG細(xì)菌肽聚糖結(jié)構(gòu)的差別。細(xì)菌肽聚糖結(jié)構(gòu)的差別。答圖示略G細(xì)菌與G細(xì)菌的肽聚糖的差別僅在于差別僅在于1）四肽尾的底3個(gè)氨基酸不是LLYS，而是被一種只有在原核微生物細(xì)胞壁上才有的內(nèi)消二氨基庚二酸（MDAP）所代替；2）沒(méi)有特殊的肽橋，其前后兩個(gè)單體間的連接僅通過(guò)甲四肽尾的第4個(gè)氨基酸DALA的羧基與乙四肽尾的第3個(gè)氨基酸MDAP的氨基直接相連，因而只形成較為疏稀、機(jī)械強(qiáng)度較差的肽聚糖網(wǎng)套。5．什么是缺壁細(xì)菌試列表比較．什么是缺壁細(xì)菌試列表比較4類缺壁細(xì)菌的形成、特點(diǎn)和實(shí)際應(yīng)用。類缺壁細(xì)菌的形成、特點(diǎn)和實(shí)際應(yīng)用。答在自然界長(zhǎng)期進(jìn)化中和實(shí)驗(yàn)室菌種的自發(fā)突變中都會(huì)產(chǎn)生少數(shù)缺細(xì)胞壁的種類，或是用人為的方法通過(guò)抑制新生細(xì)胞壁的合成或?qū)ΜF(xiàn)成細(xì)胞壁進(jìn)行酶解而獲得人工缺壁的細(xì)菌統(tǒng)稱為缺壁細(xì)菌。比較如下類型形成特點(diǎn)實(shí)際應(yīng)用L型細(xì)菌（LFORMOFBACTERIA）在某些環(huán)境條件下（實(shí)驗(yàn)室或宿主體內(nèi)）通過(guò)自發(fā)突變而形成的遺傳性穩(wěn)定的細(xì)胞壁缺陷變異型1．沒(méi)有完整而堅(jiān)韌的細(xì)胞壁，細(xì)胞呈多形態(tài)2．有些能通過(guò)細(xì)菌濾器，故又稱“濾過(guò)型細(xì)菌”3．對(duì)滲透敏感，在固體培養(yǎng)基上形成“油煎蛋”似的小菌落（直徑在01MM左右）可能與針對(duì)細(xì)胞壁的抗菌治療有關(guān)原生質(zhì)體（PROTOPLAST）在人為條件下，用溶菌酶處理或在含青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)而抑制新生細(xì)胞壁合成而形成的僅由一層細(xì)胞膜包裹的，圓球形、對(duì)滲透壓變化敏感的細(xì)胞，一般由革__________蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌形成。1．對(duì)環(huán)境條件變化敏感，低滲透壓、振蕩、離心甚至通氣等都易引起其破裂2．有的原生質(zhì)體具有鞭毛，但不能運(yùn)動(dòng)，也不被相應(yīng)噬菌體所感染，在適宜條件（如高滲培養(yǎng)基）可生長(zhǎng)繁殖、形成菌落，形成芽孢。及恢復(fù)成有細(xì)球狀體SPHAEROPLAST又稱原生質(zhì)球，是對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌處理后而獲得的殘留部分細(xì)胞壁（外壁層）的球形體與原生質(zhì)體相比，它對(duì)外界環(huán)境具有一定的抗性，可在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)胞壁的正常結(jié)