簡介：目的①觀察大鼠骨折后不同時間點外周血間充質(zhì)干細胞（PBMSCS）的數(shù)量變化，并與同期培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細胞BMSCS比較異同。②觀察大鼠骨折后外周血對間充質(zhì)干細胞（MSCS）趨化和成骨的影響，并分析可能原因及其相關(guān)基因的變化。③觀察BMP2對大鼠BMSCS遷移、趨化的影響，并研究此過程中的信號通路。方法⑴建立大鼠骨折模型，根據(jù)骨折后1、3、7D時間點分組，抽取外周血，獲得單核細胞，貼壁分離培養(yǎng)MSCS，檢測各組成纖維細胞集落形成單位（CFUFS）數(shù)和集落形成率（CFE），同期分離培養(yǎng)BMSCS。⑵MTT法檢測不同來源的MSCS增殖特點，流式細胞儀檢測MSCS表面抗原表達，成骨和成脂分化檢測其多項分化潛能。⑶分離各組外周血血清，TRANSWELL裝置觀察血清對BMSCS遷移的作用，RTPCR法研究骨折組血清對間充質(zhì)干細胞ALP、OC和OPNMRNA表達的影響，ELISA法檢測各組血清中BMP2和SDF1的含量。⑷BMP2預(yù)刺激間充質(zhì)干細胞，WESTERNBLOT、ELISA檢測CXCR4的表達及SDF1的分泌。⑸添加LY294002、LHMO、AMD3100阻斷MSCS信號通路后，TRANSWELL裝置檢測BMP2對MSCS趨化的作用。結(jié)果①骨折后PBMSCS含量升高，且具有間質(zhì)干細胞的特性，表達抗原CD44、CD90、CD29，不表達造血細胞系標志CD34、CD45，能夠向成骨、成脂分化。②骨折血清顯著促進MSCS遷移和成骨分化，骨折組血清BMP2含量較對照組有顯著差異，且具有時序性。③BMP2處理的間充質(zhì)干細胞SDF1分泌增加，CXCR4表達升高，阻斷劑LHMO、AMD3100可以明顯降低MSCS的遷移能力，LY294002無此作用。結(jié)論⑴骨折后大鼠PBMSCS動員增加，并呈時序性變化。該細胞具有間質(zhì)干細胞的特性。⑵骨折后大鼠外周血含有多種因子，在促進MSCS趨化和分化中發(fā)揮重要作用。⑶BMP2促進BMSCS遷移及SDF1CXCR4表達，但兩者之間無直接關(guān)聯(lián)。

簡介：該文研究了37例MDS、2例由MDS轉(zhuǎn)化的AMLMDSAML以及11例正常對照的造血細胞染色體核型、體外培養(yǎng)CFUGM生長模式、增殖細胞核抗原PCNA表達、細胞周期和造血克隆性結(jié)論1、初診MDS患者近三分之一可檢出非隨機性骨髓細胞染色體核型異常2、MDS骨髓細胞體外半固體培養(yǎng)CFUGM生長行為異常近半數(shù)患者表現(xiàn)集落集簇無生長3、MDS骨髓細胞PCNA陽性率增加隨著病程進展有逐漸增高趨勢4、MDS骨髓細胞BRDU標記指數(shù)低下DNA合成期及細胞周期時間延長RAEBRAEBT患者較RARAS患者更為明顯5、RA患者約70﹪左右呈單克隆造血RAEB患者均呈單克隆造血綜上所見隨著MDS病程進展骨髓中原始細胞增多造血細胞生物學特性呈現(xiàn)以下的演變趨勢造血轉(zhuǎn)變?yōu)閱慰寺⌒泽w外培養(yǎng)CFUGM接近于白血病性生長特征PCNA增高細胞周期延長這可能是惡性轉(zhuǎn)化程度增高的造血干祖細胞克隆獲得優(yōu)勢生長的反映

簡介：種子細胞是組織工程最基本的要素軟骨細胞體外培養(yǎng)極易老化一般培養(yǎng)至56代其特異性標志蛋白Ⅱ型膠原就已經(jīng)喪失表達因此不能通過體外擴增獲取大量的軟骨細胞來滿足構(gòu)建軟骨組織的需要我們試圖通過基因轉(zhuǎn)染的方式建立永生化人關(guān)節(jié)軟骨細胞系并對其生物學特性進行研究從而為軟骨組織工程種子細胞的問題提供新的探索方向我們得出最后結(jié)論1、含HPV16E7的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體能夠成功永生化人關(guān)節(jié)軟骨細胞2、永生化人關(guān)節(jié)軟骨細胞IHAC經(jīng)嚴格致瘤性檢驗為良性轉(zhuǎn)化3、通過3種不同的誘導(dǎo)方法可以快速穩(wěn)定地誘導(dǎo)并維持IHAC的Ⅱ型膠原表型4、IHAC在體內(nèi)具有優(yōu)秀的成軟骨能力

簡介：MASTER’SDISSERTATIONL寶叢I曼生物堂佳目的毖響答辯日期20110608學位論文版權(quán)使用授權(quán)書江蘇大學、中國科學技術(shù)信息研究所、國家圖書館、中國學術(shù)期刊光盤版電子雜志社有權(quán)保留本人所送交學位論文的復(fù)印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致，允許論文被查閱和借閱，同時授權(quán)中國科學技術(shù)信息研究所將本論文編入中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫并向社會提供查詢，授權(quán)中國學術(shù)期刊光盤版電子雜志社將本論文編入中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫并向社會提供查詢。論文的公布包括刊登授權(quán)江蘇大學研究生處辦理。本學位論文屬于不保密圈。學位論文作者簽名姆蠡刀／年占月9日燧名伽埂；VOT年6只多B

簡介：點擊查看更多DMSO誘導(dǎo)HL-60為類中性粒細胞相關(guān)的生物學指標分析研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的探討骨髓增生異常綜合征MDS造血細胞凋亡特征及相關(guān)藥物對MDSL原始細胞系的調(diào)控作用。方法1，用免疫組織化學方法堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶系統(tǒng)，APAAP結(jié)合DNA末端原位標記ISEL同步檢測30例MDS病人骨髓切片標本中CD68或CD41陽性細胞及凋亡細胞，并分析二者間關(guān)系，缺鐵性貧血病例做對照。2，結(jié)合ISEL流式細胞儀FCM和熒光原位雜交FISH共檢測19例MDS病例凋亡信號和克隆標記，以判斷凋亡細胞的克隆性來源；3，不同濃度不同時間的三氧化二砷AS2O3和或腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體TRAIL作用于MDS髓系原始細胞系MDSL，然后用流式細胞儀ANNEXINV熒光標記檢測細胞凋亡。半固體培養(yǎng)18天后收獲細胞行形態(tài)學分類和分化抗原檢測。甲基化特異性PCRMSP檢測抑癌基因P15INK4B甲基化程度、RTPCR檢測P15INK4BA水平表達，免疫標記檢測P15INK4B蛋白水平表達。結(jié)果1，MDS病例骨髓中有核細胞凋亡明顯多于對照組；MDS之巨核細胞和微小巨核細胞CD41陽性細胞較對照組明顯增高，P分別為＜005和＜001。并呈現(xiàn)異常分布及成簇現(xiàn)象。巨核系凋亡無明顯增加。巨核系凋亡僅見于微小巨核細胞；MDS骨髓CD68陽性細胞數(shù)與造血細胞凋亡顯示顯著正相關(guān)；R083，P＜0001MDS低危組RARASCD68陽性細胞巨噬細胞和ISEL陽性細胞凋亡細胞數(shù)均高于高危組RAEBRAEBTP分別＜005和＜001。2，10例經(jīng)ISELFISH分析的MDS患者骨髓有核細胞中異?？寺〖毎俜直绕骄鶠?71﹪，凋亡細胞中異常克隆細胞百分比僅為240﹪。9例經(jīng)FCMFISH分析者，8例顯示凋亡細胞中核型正常百分比高于非凋亡細胞中核型正常百分比。3，不同AS2O3TRAIL組合均可誘導(dǎo)細胞發(fā)生凋亡，48H藥物處理時達高峰約25﹪，72H時仍有約9﹪的細胞凋亡。藥物處理尤其是AS2O3TRAIL導(dǎo)致細胞明顯的形態(tài)學分化，而TRAIL能顯著降低CD34細胞比率。未經(jīng)處理的MDSL細胞基本不表達P1INK4B并伴有明顯的P15INK4BDNA甲基化。藥物處理后P15INK4B表達增強，并伴有DNA去甲基化；但免疫標記未顯示蛋白水平P15INK4B表達的變化；結(jié)論1MDS存在造血細胞過度凋亡；外周血小板減少的原因可能與病態(tài)巨核細胞產(chǎn)生和釋放血小板障礙有關(guān)；MDS巨噬細胞與造血細胞凋亡的相關(guān)性提示腫瘤壞死因子TNFΑ參與凋亡誘導(dǎo)過程。2，MDS凋亡細胞主要來源于殘余正常造血細胞，克隆細胞存在凋亡抵抗傾向。3，AS2O3和或TRAIL處理能促進MDS惡性細胞凋亡，誘導(dǎo)細胞分化；并能通過DNA去甲基化而增強原本幾乎消失的抑癌基因P15INK4B表達，有進一步進行基礎(chǔ)研究的價值和臨床應(yīng)用前景。

簡介：研究生導(dǎo)師及課題組成員簡介導(dǎo)師S王郡甫男，1965年11月出生，醫(yī)學免疫學博士，研究員，碩士生導(dǎo)師。主要從事基因工程，腫瘤免疫學等方向研究。課題指導(dǎo)小組其他成員；許曉群男，1975年6月出生，碩士，副研究員，主要從事分子免疫學方面的研究。張建華女，1953年8月出生，副主任技師，主要從事細胞生物學方面的研究。目錄摘要IIABSTRACTⅣ符號說明VII前言1正文3第一部分人IL24的EDNA獲取及克隆載體的構(gòu)建31實驗材料和儀器311主要實驗材料312主要儀器設(shè)備一713主要實驗方法82實驗結(jié)果133第一部分附錄圖表15第二部分PADMDA7／IL24腺病毒表達載體的構(gòu)建L81實驗材料與方法1811主要實驗材料L812主要儀器設(shè)備2113主要實驗方法222實驗結(jié)果303第二部分附錄圖表3L第三部分ADMDA一7／IL24腺病毒感染喉癌細胞HEP2及對HEP2的生物學影響351實驗材料與方法3511主要實驗材料3512主要儀器設(shè)備3713主要實驗方法382實驗結(jié)果4L3第三部分附錄圖表42討論“44，J、結(jié)48參考文獻49文獻綜述52攻讀碩士學位期間發(fā)表學術(shù)論文6L虱【謝62

簡介：前言嚴重急性呼吸綜合征SEVEREACUTERESPIRATYSYNDROME，SARS是21世紀在全球暴發(fā)的第一種烈性傳染病，2002年11月我國廣東佛山市曾經(jīng)發(fā)生一起家族聚集性SARS疫情，2003年2月下旬從香港開始向其他國家蔓延。我國既是SARS暴發(fā)的起源地，也是疫情最嚴重的地區(qū)。SARS是由一種新型冠狀病毒引起的疾病，此型冠狀病毒基因組結(jié)構(gòu)與已知的其他冠狀病毒基因組結(jié)構(gòu)類似，完整的病毒顆粒呈球形，有包膜，核心由無分段的單股正鏈RNA和堿性磷酸蛋白N組成，包膜表面覆蓋有規(guī)則排列的2040NM長的棒狀或花瓣狀刺突；包膜上主要有三種糖蛋白S蛋白、M蛋白和E蛋白，其中S和M蛋白是主要的結(jié)構(gòu)性表面抗原，由病毒基因組S和M基因編碼。M蛋白是病毒顆粒中含量最豐富的糖蛋白，它是由一個短的N端、3個連續(xù)的跨膜區(qū)和一個位于毒粒內(nèi)部的C端結(jié)構(gòu)域組成的一種Ⅲ型糖蛋白。編碼M蛋白的開放閱讀框F總長為666個核苷酸，編碼221個氨基酸殘基。M蛋白的主要功能包括宿主高爾基體的整合膜蛋白、引發(fā)病毒顆粒的組裝、與病毒核衣殼N蛋白相互作用、形成病毒內(nèi)核的鞘和誘導(dǎo)Α干擾素等，而其中參與包膜的形成和參與核心的組成是M蛋白最主要的功能；此外M蛋白富含有效的中和表位，在誘發(fā)機體免疫系統(tǒng)生成抗體及產(chǎn)生細胞毒性T細胞免疫反應(yīng)上起著重要的作用，因此研究M蛋白的結(jié)構(gòu)和功能對于了解SARS的免疫損傷機理、制備有效的疫苗都具有十分重要的意義。SARS病毒通過肺組織損傷而引發(fā)肺纖維化已有報道，但對其具體的表現(xiàn)形式和發(fā)病機制尚缺乏認識。近年來我們課題組對肺纖維化發(fā)病機制已做了相當?shù)难芯?，根?jù)以往的研究發(fā)現(xiàn)肺間質(zhì)成纖維細胞的功能及分化、ECM合成和降解的平衡是肺纖維化發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。隨著防治SARS工作的不斷深入，研究肺纖維化發(fā)生發(fā)展的規(guī)律和機制、探索防治方法及途徑己成為當務(wù)之急。由于SARS具有很高的傳染性，所以對于SARS相關(guān)樣本方面的研究必須遵守相應(yīng)的生物安全防護規(guī)則，世界衛(wèi)生組織和中國衛(wèi)生部制定了SARS相關(guān)操作所必須遵守的生物安全原則，鑒于開展活病毒研究的條件尚不具備、人體材料的應(yīng)用局限以及動物SARS模型制備的條件限制，我們考慮先從SARS致肺纖維化的細胞模型入手，利用重組有SARS結(jié)構(gòu)蛋白基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入肺間質(zhì)成纖維細胞來觀察它對FB生長特性和生物學功能的影響。目的觀察轉(zhuǎn)SARSCOVM基因的大鼠肺間質(zhì)成纖維細胞生長特性及部分生物學功能的改變；初步探討SARS病毒致肺組織損傷并最終引發(fā)肺纖維化的可能的機制和途徑。方法利用堿裂解法擴增純化質(zhì)粒包括重組質(zhì)粒PCDNA31M和空載體PCDNA31；酶消化法分離大鼠肺間質(zhì)成纖維細胞采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法瞬時轉(zhuǎn)染質(zhì)粒入FB；采用免疫熒光染色、RTPCR和WESTERNBLOT的方法鑒定轉(zhuǎn)染結(jié)果；在轉(zhuǎn)染后24、48和72小時用MTT比色法測定細胞生長情況收集轉(zhuǎn)染后48小時的細胞采用流式細胞技術(shù)檢測大鼠肺成纖維細胞的生長周期；收集轉(zhuǎn)染后48小時的細胞總RNA采用RTPCR和REALTIMEPCR的方法觀察MMP2的表達情況。結(jié)果根據(jù)免疫熒光、RTPCR和WESTERNBLOT的結(jié)果，M基因成功地瞬時轉(zhuǎn)染入肺間質(zhì)成纖維細胞，表達產(chǎn)物有SARSCOVM蛋白的抗原性；MTT和FCM顯示與轉(zhuǎn)染空載體的細胞相比轉(zhuǎn)染了PCDNA31M重組質(zhì)粒的細胞的生長明顯增強，GO／G。期比例下降，S期比例增加，尤其在48小時這個變化最為明顯；轉(zhuǎn)染后48小時細胞MMP2的表達較轉(zhuǎn)染空載體的細胞表達明顯增強。結(jié)論成功地將攜帶有M基因的真核表達質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染入大鼠肺間質(zhì)成纖維細胞，目的基因在肺間質(zhì)成纖維細胞中表達并具有與SARSCOVM相似的抗原性；SARSCOVM蛋白可以促進大鼠肺間質(zhì)成纖維細胞的生長；同時MMP2表達增強。

簡介：J18239南華大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南華大學或其他單位的學位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。作者簽名靼才詞卅年，月；口日南華大學學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學位論文是本人在南華大學攻讀艇博／碩士學位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的學位論文。本論文的研究成果歸南華大學所有，本論文的研究內(nèi)容不得以其它單位的名義發(fā)表。本人同意南華大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權(quán)保留學位論文，允許學位論文被查閱和借閱；學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保留學位論文；學校可根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學位論文。同意學校將論文加入中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫，并按中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫出版章程規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。同意授權(quán)中國科學信息技術(shù)研究所將本學位論文收錄到中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。對于涉密的學位論文，解密后適用該授權(quán)。作者簽名弱7F目≯口口’年R月口日川T彳、锨H薌H名『到1幣J洲義氧化性低密度脂蛋白對骨髓源性平滑肌細胞生物學特性的影響碩士研究生段才聞導(dǎo)師嚴鵬科副教授摘要目的建立骨髓間質(zhì)干細胞源性平滑肌細胞骨髓源性，BMSCSMC模型，以血管平滑肌細胞血管源性，VSMC為對照。系統(tǒng)比較OXLDL對兩種來源平滑肌細胞的增殖、遷移、粘附、泡沫化等生物學特性的影響，探索骨髓間質(zhì)干細胞分化的平滑肌細胞在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法采用貼壁法從SD大鼠骨髓中分離骨髓問質(zhì)干細胞BONEMESENCHYMALSTEMCELL，BMSC，從胸主動脈分離血管平滑肌細胞VASCULARSMOOTHMUSCLECELLS，VSMC。運用條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)BMSC分化成SMC，采用免疫熒光法分析骨髓問質(zhì)干細胞及其分化后的細胞特異性標志物。80M∥LOXLDL分別處理骨髓問質(zhì)干細胞分化的平滑肌細胞72H，細胞計數(shù)法觀察兩種細胞的生長特征，流式細胞術(shù)分析細胞生長周期特征。羥脯氨酸測定法檢測兩種細胞合成細胞外基質(zhì)能力，粘附和遷移實驗檢測兩種細胞的粘附和遷移能力。蛋白免疫印記法檢測細胞清道夫受體CD36和SRA、膽固醇逆轉(zhuǎn)運蛋白ABCAL和小凹蛋白CAVEOLIN1的表達變化。結(jié)果1、分離的BMSC經(jīng)含堿性成纖維細胞生長因子BFGF和轉(zhuǎn)化生長因子TGFP的條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化15天后，誘導(dǎo)分化的細胞形態(tài)呈梭形平滑肌樣，表達平滑肌細胞特異性蛋白標志物伐肌動蛋白SMQACTIN和平滑肌肌球蛋白重鏈LSMMC1，呈平滑肌細胞表型。2、BMSCSMC和VSMC細胞的生長曲線均大致呈S型，兩種細胞的倍增時間分別約為20小時和32小時。經(jīng)80M∥LOXLDL處理后，BMSCSMC和VSMC

簡介：分類號VDC博士學位論文密級HIF1Q特異性抑制劑YC1對缺氧條件下人膀胱癌細胞株T24細胞生物學行為的影響EFFECTSOFYC1TARGETINGHYPOXIAINDUCIBLEFACTOR1ALPHAINHYPOXICHUMANBLADDERUROTHELIALCARCINOMACELLLINET24作者姓名李楊樂學科專業(yè)泌尿外科學院、系所指導(dǎo)教師湘雅二醫(yī)院趙曉昆教授答辯委員會主席中南大學二O一一年五月原創(chuàng)性聲明LLIIIIIIIIIIIIIIIIT111IY1918231本人聲明，所呈交的學位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學或其他單位的學位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。爭作者簽名么絲顯韭日期且年』月旦日學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權(quán)保留學位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學位論文，允許學位論文被查閱和借閱；學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學位論文。同時授權(quán)中國科學技術(shù)信息研究所將本學位論文收錄到中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。才一FLL作者簽名塾翌生導(dǎo)師簽名復(fù)墊日期巫年上月旦日

簡介：浙江大學碩士學位論文周期性牽張力對鼠骨髓基質(zhì)細胞生物學特性及RANKL、MCSF蛋白表達的影響姓名張烈焚申請學位級別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學指導(dǎo)教師劉麗20060501游程大學磷士研究生掌氌論文研究目的1零實驗通過一乖爭先進靜誨井細胞拉律掬力裝置，對甑骨髓基菔繃胞系ST2施加生理性及瘸理性周期牽張力，觀察細胞受力前厝細胞形態(tài)殿增殖活性靜變位。2對飄骨髓基溪綱胞系S豫分剮施加生璦性及病理餓靜周期幢舉張力，觀察分泌型及膜擻RANKL和MCSF蛋白的液達變化。材料釋方法1體外細胞加力裝置及力學刺激細胞煙力采用華中電子科披大學硬制的隧贏彎蕊細臌力學搬載儀。將ST2接靜翔特毒4的塑料培養(yǎng)稷上，繼續(xù)壤葬24H，培養(yǎng)扳上靜細胞生長弼80％匯合，將培養(yǎng)板放入加力皿內(nèi)，在加力裝鬣上進行加力。細胞所受的張力大，L、E曩彈性板的簿越位移MM裘示，位移越大，彤變越大，表示鏹胞受牽張力越大。本實驗加力頻率潮定為O5HZ，位移為LLLLM和2MM，邸張力為1785USTRAIN及3570ⅡSTRAIN。2，騏W法測定機械力對ST2緇脆壤建的影睫細胞農(nóng)特制的培養(yǎng)扳上生長到對數(shù)生長覯對，隨機分為3組，第L組靜置不加力，第2組加力位移LMM，第3組加力位移2MM，加力時間6H。鴦鞋力后綢腿鞋2LQ4黥密度接秘予96孔扳，每緦梭靜2L魏，每魏艇200UL完全培養(yǎng)旗。以只如寵全培養(yǎng)液的孔作為空自對照組。每24H各組測定3個孔，每孑L加入20U1們T溶液59／L，繼續(xù)培養(yǎng)3H，吸去培養(yǎng)液，加入200ULD疆S0，振蕩LO趣IN，在酶聯(lián)兔疫監(jiān)濺儀上戳570N瓤測定光啜收僮A。。3。ELISA檢測機械力刺激下細胞培養(yǎng)液中分泌型RANKL、MESF的禽量細胞在特制的培養(yǎng)板上生長到對數(shù)生長期時，隨機分為2組，第L組熱力位移LM聚，第2綴艇力位移2辯難，熱力噩重閹12H。熱力_L遣程中，分裂在OH、O5H、LH、2H、3H、6H、9H、12H等8個時間點扶加力臌中各取200U1培養(yǎng)液樣品，按ELISA試劑盒的攖求進行檢測。在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上以450N班涮是先啜牧擅氏。4免疫沉淀WESTERNBLOT梭測機械力刺激下膜型RANL、MCSF含量一2一

簡介：山東大學博士學位論文乳腺癌細胞耐藥株的生物學特性改變與多藥耐藥、侵襲轉(zhuǎn)移的探討姓名宋科瑛申請學位級別博士專業(yè)外科學（普外）指導(dǎo)教師李兆亭孫靖中200151中文摘要類型。V連環(huán)素VCATENIN，YCTN，又稱斑珠蛋白PLAKO西OBIN，與D連環(huán)素高度同源60％1J上的序列相同，并結(jié)合于ECADHERIN同一部位上。V連環(huán)素的作用尚不清楚，但如果沒有V璉環(huán)素的參與，ECDCAT復(fù)合體不能改變細胞的行為。ECADLLERIN通過連環(huán)素與肌動蛋白ACTIN相連，對維持細胞形態(tài)和調(diào)節(jié)粘附具有重要作用。同質(zhì)性粘附是指同種細胞與同種細胞之間的粘附，同質(zhì)性粘附下降能促進瘤細胞從瘤體上脫落下來，促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。ECDCAT復(fù)合體對于維持細胞同質(zhì)性粘附發(fā)揮重要作用。異質(zhì)性粘附是指瘤細胞與宿主細胞或宿主基質(zhì)的粘附。瘤細胞脫離瘤體侵襲到基底膜或穿過基底膜遭遇宿主基質(zhì)和宿主細胞，這一過程就是一個異質(zhì)性粘附的過程。CD44分子是分布極為廣泛的細胞表面跨膜糖蛋白。其中CDV6與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，它通過促進癌細胞與宿主細胞或宿主基質(zhì)的異質(zhì)性粘附，使腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力加強。MCF7及MCF7／ADR細胞是乳腺癌研究中常用的腫瘤細胞系，后者是前者接觸阿霉素后產(chǎn)生的耐藥株。除阿霉素外，MCF7／ADR細胞還對多種藥物交叉耐藥，能穩(wěn)定地過度表達P糖蛋白PGLYCOPROTEIN，PGP，具有典型的多藥耐藥性。因此許多學者運用這兩株細胞在探索多藥耐藥機理和逆轉(zhuǎn)機制方面做了大量工作。國內(nèi)外對多藥耐藥和侵襲轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系卻缺乏相關(guān)、的文獻報道寸目的形態(tài)學觀察與多藥耐藥密切相關(guān)的MCF7和MCF7／ADR兩株細胞的生物學差異，對比檢測ECADLLE血、Y連環(huán)素、CD村V6的表達情況，檢測兩者超微結(jié)構(gòu)的差異。本研究的重點并非是對腫瘤的耐藥機理進行研究，而是通過研究耐藥細胞的生物學特性嘗試揭示腫瘤化療耐藥及侵襲轉(zhuǎn)移與細胞生物學特性差異方面的內(nèi)在聯(lián)系。分析乳腺癌細胞MCF7和

簡介：復(fù)旦大學博士學位論文SOX2在神經(jīng)母細胞瘤中的表達及其對神經(jīng)母細胞瘤干細胞生物學特性的影響姓名楊少波申請學位級別博士專業(yè)兒科學（外科）指導(dǎo)教師肖現(xiàn)民20120410SO【2在神經(jīng)母細胞瘤中的表達及其對神經(jīng)母細胞瘤干細胞生物學特性的影響墮主堡窒壅I墮細胞核中表達，而瘤旁組織中表達呈陰性。REMTEEPCR及WESTERNBLOT結(jié)果均顯示神經(jīng)母細胞瘤組織中SOX2的表達水平明顯高于瘤旁組織，差異有統(tǒng)計學意義PO．05。經(jīng)統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)SOX2在高分期腫瘤中的表達水平高于低分期腫瘤P0．05，且未經(jīng)化療的腫瘤其SOX2的表達水平高于經(jīng)化療的腫瘤PO．05。SOX2在神經(jīng)母細胞瘤中的表達水平與性別、年齡、腫瘤部位、大小、病理分型等參數(shù)無相關(guān)性均胗O．05。2．SO【2對神經(jīng)母細胞瘤干細胞生物學特性的影響RT．PCR結(jié)果顯示在神經(jīng)母細胞瘤BE2．C細胞系中可檢測到SO【2基因RNRNA水平表達。利用慢病毒載體感染BE2．C細胞成功構(gòu)建SOX2高表達BE2CSOX2】和低表達【BE2一CSHRNM穩(wěn)定細胞。CCK．8活細胞數(shù)檢測顯示72H時BE2．C．SOX2細胞的AV值1．465±0．046高于BE2．C細胞1．01±0．018，差異有統(tǒng)計學意義PO．05；而BE2．C．SHRNA細胞的AV值0．912±0．020低于BE2．C細胞1．201±0．018，差異有統(tǒng)計學意義P0．05。流式細胞儀細胞周期分析顯示BE2．C．SOX2組S期細胞百分比55．2±4．3％高于BE2．C組細胞38．6±3．5％，BE2．C．SHRNA組S期細胞百分比21．8±5．7％低于BEO．C組細胞，三組組間比較差異有統(tǒng)計學意義火O．05，而三組細胞G0／G1期細胞百分比的比較情況呈現(xiàn)出相反的結(jié)果；BE2．C．SOX2、BE2．C及BE2．C．SHRNA組的細胞增殖指數(shù)分別為65．2±5．6％、36．3±2。8％、51．7±4．6％，三組組問比較差異有統(tǒng)計學意義尸O．05。RA或BRDU干預(yù)后WESTERNBLOT檢測細胞標志蛋白P嘶PHEDN、NF．68、VIMENTIN、S一100顯示，經(jīng)RA或BRDU干預(yù)的BE2．C．SOX2細胞其標志蛋白表達量低于經(jīng)同種藥物干預(yù)的BE2．C細胞和空載體細胞尺O．05；而經(jīng)RA或BRDU干預(yù)的BE2．CSHRNA細胞其標志蛋白表達量高于經(jīng)同種藥物干預(yù)的BE2．C細胞和空載體細胞尺O．05。平板克隆形成實驗顯示BE2．C。SOX2細胞的克隆形成數(shù)目103±18和克隆形成率20．6％均高于BE2．C細胞75±12，15％，而BEE。C．SHRNA細胞的克隆形成數(shù)目42±7和克隆形成率8．4％均低于BE2．C細胞，三組組間比較差異有統(tǒng)計學意義火0．05。軟瓊脂克隆形成實驗未成功，細胞均死亡。裸鼠成瘤實驗顯示BE2．C．SOX2接種組腫瘤的生長速度和體積均大于BE2一C接種組，而BE2．C．SHRNA接種組腫瘤的生長速度和體積均低于BE2．C接種組，三組組間比較差異有統(tǒng)計學意義PO．05。3．基因芯片檢測SOX2下調(diào)時神經(jīng)母細胞瘤干細胞基因表達譜變化SOX2基因表達下調(diào)時基因表達譜芯片篩得差異表達的基因有596條，其中差異顯著的基因有FMNL、GFRA2、HISTLH2BK、CARTPT、AHNAK2、PLP2、TSPAN8、TIMP2、EPO和PRRLL等。經(jīng)REM．TIMEPCR驗證，證實芯片篩選的結(jié)果可靠。4

簡介：分類號分類號R782學校代碼學校代碼10392學科專業(yè)代碼學科專業(yè)代碼100302學號號2100904278福建醫(yī)科大學碩士研究生畢業(yè)論文微弧氧化水熱處理微弧氧化水熱處理TLM鈦合金鈦合金對人牙齦成纖維對人牙齦成纖維細胞細胞生物學行為生物學行為的影響的影響EFFECTSOFMICROARCOXIDATIONHYDROTHERMALTLMALLOYONTHEBIOLOGICALBEHAVISOFHUMANGINGIVALFIBROBLAST學位類型型醫(yī)學碩士醫(yī)學碩士所在學院院口腔醫(yī)口腔醫(yī)學院學院研究生生劉瑜瑜劉瑜瑜學科學科、專業(yè)專業(yè)口腔臨床醫(yī)學口腔臨床醫(yī)學導(dǎo)師師陳江陳江教授教授研究起止日期研究起止日期2011年7月至月至2013年3月答辯日期期2013年5月24日二○一○一三年五月1目錄英文縮略詞索引2中文摘要4英文摘要7前言10第一部分微弧氧化水熱處理TLM鈦合金理化性能的研究和人牙齦成纖維細胞原代培養(yǎng)13第二部分微弧氧化水熱處理TLM鈦合金對人牙齦成纖維細胞早期黏附、細胞形態(tài)及增殖的影響24第三部分LPS誘導(dǎo)下微弧氧化水熱處理的TLM鈦合金對HGF分泌IL6、MMP1表達量的影響34全文總結(jié)44參考文獻46綜述54個人簡歷65致謝66

簡介：第一部分目的研究SNAIL基因在人骨髓間充質(zhì)干細胞MSCS中的轉(zhuǎn)染和表達，SNAIL對骨髓基質(zhì)細胞生物學性狀及生長等方面的影響，探討骨髓基質(zhì)細胞作為SNAIL基因受體細胞的可行性。方法采用密度梯度離心法、貼壁篩選法并結(jié)合傳代對成人骨髓MSC進行純化和體外擴增，觀察細胞形態(tài)和表面標志物的表達特點，流式細胞儀檢測骨髓MSC表面抗原表達，脂質(zhì)體法將重組真核表達載體PCAGGSNEOSNAILHA及對照空質(zhì)粒PCAGGSNEO轉(zhuǎn)染MSCS，G418篩選穩(wěn)定表達，繪制轉(zhuǎn)染后細胞的生長曲線，分別于轉(zhuǎn)染后48小時和4周利用免疫熒光染色技術(shù)及免疫印跡法檢測MSCS報告基因HA及目的基因SNAIL表達情況。結(jié)果成人骨髓MSC培養(yǎng)3天后有散在呈針尖狀的貼壁細胞，7～10天后形成集落或融合呈纖維狀，3周左右細胞生長可匯合至8090％，間充質(zhì)樣細胞呈長梭形，走向趨向一致，傳代后1周左右即可融合，3～5代后基本純化，細胞形態(tài)單一，細胞排列具有典型的旋渦狀結(jié)構(gòu)。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示CD34表達陰性及CD29表達陽性；500ΜGML的G418是最適篩選濃度，PCAGGSNEOSNAILHA轉(zhuǎn)染后不同時期的MSCS在蛋白水平均可檢測到目的基因SNAIL及報告基因HA的表達；生長曲線示重組真核表達載體PCAGGSNEOSNAILHA及對照空質(zhì)粒PCAGGSNEO轉(zhuǎn)染后的細胞即MSCSSNA和MSCSNEO生長曲線與未轉(zhuǎn)染的同代MSCS相比，倍增時間稍稍延長，一代時間約比未轉(zhuǎn)染的細胞多一天，而MSCSSNA和MSCSNEO之間倍增時間及一代時間沒有明顯差異。結(jié)論分離培養(yǎng)的細胞為間充質(zhì)干細胞且成分單一，第3、5代細胞很純且生長旺盛，適用于做轉(zhuǎn)染或以后的研究，PCAGGSNEOSNAILHA可以在MSCS內(nèi)獲得瞬時和長期表達，且SNAIL表達對MSCS的生長速度無明顯影響。MSCS可以作為SNAIL基因的受體細胞，為下一步研究SNAIL對MSCS遷移趨化、存活抗凋亡及基質(zhì)金屬蛋白酶2分泌等生物學特性的影響奠定基礎(chǔ)。第二部分目的探討SNAIL基因修飾對骨髓間充質(zhì)干細胞遷移力的影響，及磷脂酰肌醇3激酶PHOSPHATIDYLINOSITAL3KINASE，PI3K、細胞外信號調(diào)節(jié)激酶12EXTRACELLULARSIGNALREGULATEDKINASE，ERK12及P38絲裂原活化的蛋白激酶P38MITOGENACTIVATEDPROTEINKINASE，P38MAPK等信號通路在SNAIL轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞遷移能力改變中的調(diào)控作用。方法采用免疫熒光細胞化學、WESTERNBLOT方法檢測SNAIL基因修飾后骨髓間充質(zhì)干細胞內(nèi)PI3K、ERK12和P38MAPK信號通路的表達變化，用跨膜遷移實驗TRANSWELL實驗來評價MSCS的侵襲遷移能力，比較轉(zhuǎn)染SNAIL質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染對照空質(zhì)粒的骨髓間充質(zhì)干細胞的差異，并比較用和不用各信號通路干預(yù)劑的差異。結(jié)果WESTERNBLOT結(jié)果表明，MSCSSNA細胞PERK12與總ERK12的比值顯著高于MSCSNEO組。同時，MSCSSNA細胞內(nèi)PAKT與總AKT的比值較MSCSNEO組亦顯著性增加。免疫熒光細胞化學染色顯示PERK12、PAKT在MSCSNEO中均為較弱的綠色熒光，且多分布在細胞胞漿內(nèi)。而在MSCSSNA中PERK12、PAKT熒光強度明顯增強，核內(nèi)亦存在較多分布。PP38在MSCSNEO和MSCSSNA細胞核和胞漿中均呈陰性表達。TRANSWELL體外跨膜侵襲遷移實驗顯示SNAIL質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MSCSMSCSSNA較對照空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MSCSMSCSNEO細胞遷移率增加，PI3K信號通路特異性抑制劑WTMANNIN和ERK通路抑制劑PD98059能顯著抑制此遷移率的增加。各濃度P38通路抑制劑SB203580對MSCSNEO和MSCSSNA的跨膜遷移數(shù)量均無明顯抑制作用。結(jié)論SNAIL基因修飾可增加骨髓間充質(zhì)干細胞AKT、ERK12磷酸化水平，并促進骨髓間充質(zhì)干細胞的遷移，PI3K通路的特異性抑制劑WTMANNIN和ERK通路抑制劑PD98059可分別抑制SNAIL修飾誘導(dǎo)的AKT、ERK12的磷酸化，降低骨髓間充質(zhì)干細胞遷移能力；SB203580對SNAIL的促細胞遷移作用無明顯影響。PI3K和ERK信號通路在SNAIL基因促進骨髓間充質(zhì)干細胞遷移功能的調(diào)控中可能發(fā)揮了重要作用。第三部分目的觀察MSCS在SNAIL基因修飾后細胞膜表面相應(yīng)特異性受體CXCR4表達水平、及對SDF1的趨化能力的變化。為探索提高MSCS移植后向受損后局部常高表達SDF1的器官組織趨化遷移能力的方法提供研究基礎(chǔ)。方法采用免疫熒光細胞化學染色、熒光標記流式細胞儀技術(shù)及RTPCR技術(shù)檢測SNAIL基因修飾后的骨髓間充質(zhì)干細胞上CXCR4受體的表達水平；采用體外TRANSWELL跨膜趨化實驗評價MSCS向SDF1的趨向遷移能力，觀察大小不同濃度的抗CXCR4中和抗體對趨化實驗的干預(yù)作用。結(jié)果流式細胞儀熒光檢測顯示，MSCSNEO和MSCSSNA細胞表面均有CXCR4受體的表達，其中MSCSSNA的陽性表達率明顯高于MSCSNEO的陽性表達率6425％±722％VS745％±091％，P結(jié)論SNAIL可上調(diào)MSCS趨化因子受體CXCR4分子的表達，并可通過這一環(huán)節(jié)促進骨髓間充質(zhì)干細胞對相應(yīng)趨化因子SDF1的趨化作用，這提示了通過上調(diào)SNAIL的表達而提高MSCS向正調(diào)節(jié)表達SDF1的受損組織例如腦的缺血半暗帶等部位遷移效率的可行性，為提高MSCS的遷移能力及移植效率的研究方向提供了新思路和實驗依據(jù)，并為以后進一步開展提高MSCS向受損組織器官遷移的在體實驗研究提供了實驗基礎(chǔ)。第四部分目的觀察SNAIL對骨髓MSCS在離體無血清培養(yǎng)下細胞骨架的變化及凋亡的影響，并研究SNAIL對MSCS在含IL4培養(yǎng)基中發(fā)生凋亡的保護作用，為探索提高MSCS移植后存活能力的方法提供研究基礎(chǔ)。方法MSCSSNA及MSCSNEO于體外無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，ΒACTIN免疫熒光細胞染色觀察細胞骨架，流式細胞儀檢測細胞SUBG1凋亡峰，及ANNEXINVPI雙標法檢測細胞早期凋亡率ANNEXINVPI％，并比較SNAIL轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)染的MSCS即MSCSNA及MSCNEO在以上方面的差異。同樣的方法，MSCSSNA及MSCSNEO在含IL420NGML和不含IL4的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時后，收集細胞流式細胞儀檢測細胞凋亡。結(jié)果無血清培養(yǎng)24小時后，MSCSSNA細胞骨架排列保持正常有序分布狀態(tài)，細胞長極存在較長的應(yīng)力纖維束，細胞輪廓清晰；而MSCSNEO細胞骨架排列出現(xiàn)紊亂，基本細胞形態(tài)尚保持。結(jié)論經(jīng)SNAIL基因修飾，MSCS骨架結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性及在體外無血清培養(yǎng)或IL4等促凋亡因素存在的環(huán)境中抗凋亡能力增加。第五部分目的研究SNAIL基因修飾對骨髓間充質(zhì)干細胞MMP2表達的影響，及細胞外信號調(diào)節(jié)激酶12EXTRACELLULARSIGNALREGULATEDKINASE，ERK12和PI3KAKT信號通路在SNAIL轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞MMP2表達改變中的調(diào)控作用。方法應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將攜帶SNAIL基因的重組載體PCAGGSNEOSNAILHA導(dǎo)入體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細胞中，用G418篩選獲得陽性細胞。采用RTPCR檢測細胞內(nèi)MMP2MRNA的表達，明膠電泳酶譜分析細胞上清液中基質(zhì)金屬蛋白酶2MMP2的活力，并比較轉(zhuǎn)染SNAIL質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染對照空質(zhì)粒的MSCS的差異；阻斷實驗以不同濃度ERK激酶特異性抑制劑PD98059或和PI3K通路特異性抑制劑WTMANNIN干預(yù)后WESTERNBLOT檢測MSCS細胞ERK、AKT磷酸化水平變化，確定PD98059和WTMANNIN分別抑制SNAIL誘導(dǎo)的MSCS細胞ERK激酶和AKT激酶磷酸化的有效濃度，進而研究其對SNAIL轉(zhuǎn)染MSCSMMP2MRNA水平及培養(yǎng)上清中MMP2活性的影響。結(jié)論SNAIL能促進MSCS的MMP2的轉(zhuǎn)錄及MMP2蛋白的表達。MMP2可能是MSCS的細胞內(nèi)受轉(zhuǎn)錄因子SNAIL調(diào)控作用的耙基因之一，且ERK12及PI3K轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活在此過程中具有調(diào)控作用。