簡介：蘇州大學學位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學位論文是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學或其它教育機構(gòu)的學位證書而使用過的材料對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人承擔本聲明的法律責任。。。／，論文作者簽名王建盛日蘇州大學學位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學關(guān)于收集、保存和使用學位論文的規(guī)定，即學位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學。本學位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學有權(quán)向國家圖書館、中國社科院文獻信息情報中心、中國科學技術(shù)信息研究所含萬方數(shù)據(jù)電子出版社、中國學術(shù)期刊光盤版電子雜志社送交本學位論文的復印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存和匯編學位論文，可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索涉密論文口本學位論文屬在年一月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文留論文作者簽名王盛越日期趁L生。7導師簽名日飆盟出午

簡介：CFTRCYSTICFIBROSISTRANSMEMBRANECONDUCTANCEREGULAT，CFTR即囊性纖維化跨膜電導調(diào)節(jié)因子，是一種CAMP依賴的CL通道，廣泛表達于呼吸道、胰腺、胃腸道、睪丸、汗腺和唾液腺等多種分泌型和吸收型上皮，主要參與電解質(zhì)、液體轉(zhuǎn)運以及調(diào)節(jié)其它膜通道蛋白的功能。其基因突變導致白種人中常見的致死性常染色體隱性遺傳疾病即囊性纖維化病CYSTICFIBROSIS，CF。其中最為常見的突變類型是△F508第508位氨基酸苯丙氨酸缺失，有90％的CF病人其一條染色體都攜有△F508突變。CF疾病的主要特征是反復的肺部感染、結(jié)構(gòu)破壞和纖維修復，最終導致肺功能不可逆性的喪失，這也是CF疾病高發(fā)病率和致死性的主要原因。由于缺少合適的動物模型，CF發(fā)病機理并不清楚。盡管在CFTR基因克隆后，建立了許多CF小鼠轉(zhuǎn)基因模型，并且這些小鼠也重現(xiàn)了CF病人的腸道病變。但由于小鼠與人在氣道細胞生物學、粘膜下腺表達量以及小鼠氣道可能存在其它的非CFTR介導的氯離子轉(zhuǎn)運，CF轉(zhuǎn)基因小鼠模型未能表現(xiàn)作為CF病人主要致死原因的肺部病變。因此，需要尋找其它的動物建立CF模型。豬在解剖學、生理學上和人有極大的相似性，比較適合建立CF動物模型。此外，由于豬具有較長的壽命，使得對于CF肺疾病的發(fā)生、治療手段的長期治療效果以及副作用的研究成為可能?，F(xiàn)在很多研究者致力于構(gòu)建豬CFTR基因敲除豬和△F508突變豬CF模型。但由于基因敲除豬也可能發(fā)生類似于基因敲除鼠的腸梗阻，在未發(fā)生肺部疾病前過早死亡，使后續(xù)研究難以進行。此外，我們實驗室和美國OSTEDGAAD等的近期研究發(fā)現(xiàn)，豬△F508CFTR在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞模型中能夠正常加工成熟轉(zhuǎn)運到質(zhì)膜，提示豬△F508轉(zhuǎn)基因模型將不會出現(xiàn)預期的表型。用CFTR特異性抑制劑誘導豬CF模型是另一個可行的策略。但現(xiàn)今發(fā)現(xiàn)的人CFTR特異性抑制劑CFTRINH172對豬CFTR的親和力差，抑制效果并不明顯，并且本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，該藥不能誘導豬CF模型的產(chǎn)生。另一種CFTR抑制劑GLYH101雖然對豬有較好的抑制效果，但其在動物體內(nèi)分布和代謝情況并不清楚，是否適合用來做藥物誘導豬CF模型也不清楚。因此，需要尋找高親和力、高特異性、在豬體內(nèi)主要CF病變器官分布較高的豬CFTR抑制劑來誘導豬CF模型。本文的目的是系統(tǒng)研究豬△F508CFTR的細胞生物學和電生理特征，并通過高通量篩選發(fā)現(xiàn)新的豬CFTR特異性、高親和力抑制劑，為建立豬CF藥理模型奠定基礎(chǔ)。首先利用PCR方法我們獲得了豬CFTR基因，并將其連入真核表達載體PCDNA31ZEO。對豬CFTR基因進行點突變，獲得了豬△F508CFTR，也將其連入真核表達載體PCDNA31ZEO。將這兩個構(gòu)建好的重組質(zhì)粒與對碘離子敏感的綠色熒光蛋白突變體EYFPH148QI152L穩(wěn)定轉(zhuǎn)染FRTFISHER大鼠甲狀腺上皮細胞，建立了豬CFTR高通量篩選細胞模型。利用自己制備的針對豬CFTRNBD2結(jié)構(gòu)域的多克隆抗體，對瞬時及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染野生型和△F508PCFTR的COS7細胞及FRT細胞進行免疫印記及免疫熒光分析，發(fā)現(xiàn)△F508PCFTR蛋白大部分778％都具有成熟型糖基化形式，能夠被正常轉(zhuǎn)運上膜。通過CL電流熒光測定、短路電流分析以及全細胞膜片鉗電流測定，發(fā)現(xiàn)△F508PCFTR具有依賴于CAMP激活的CL轉(zhuǎn)運功能。較野生型相比，△F508PCFTR對CAMP激動劑FSKOLIN的敏感性降低10倍EC505ΜMVSEC5005ΜM；其FSKOLIN激活的最大電流為野生型的61％；對人CFTR抑制劑CFTRINH172和GLYH101的靈敏性更高，1ΜMCFTRINH172對△F508PCFTR和野生型CFTR的抑制百分率分別為40％和20％。這些結(jié)果都表明豬△F508突變是一種“溫和性”突變，突變蛋白能正常轉(zhuǎn)運到達頂質(zhì)膜，只是功能較野生型有所降低。以往的研究表明，10％的人△F508CFTR轉(zhuǎn)運到達頂質(zhì)膜就可以避免CF癥狀的發(fā)生，因此△F508轉(zhuǎn)基因豬CF模型不會出現(xiàn)預期表型。此外，對GLYH10L在小鼠體內(nèi)的分布、代謝情況進行了初步研究，發(fā)現(xiàn)其在小鼠肺內(nèi)分布并不明顯，并很快被清除干凈。據(jù)此我們推斷其在豬體內(nèi)也具有類似分布代謝情況，提示GLYH101并不適合作為藥物來誘導豬CF模型。因此，需要尋找對豬更有效的特異性抑制劑。利用構(gòu)建的FRTEYFPH148Q1152LPCFTR穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞模型，通過高通量篩選技術(shù)對含10萬個結(jié)構(gòu)多樣的小分子組合化學庫進行抑制劑的篩選，發(fā)現(xiàn)了3個新的豬CFTR特異性抑制劑。其中活性最好的PI1，能夠以劑量依賴的方式抑制FRT單層上皮細胞CPTCAMP激活的豬CFTR短路電流，其IC50為1334ΜM，且這種作用具有快速、可逆、無毒的特點。在小鼠體內(nèi)活性試驗中，可有效抑制霍亂毒素誘導的腸道液體分泌80％。通過以上研究，進一步證實豬△F508突變CFTR的細胞生物學行為與人△F508PCFTR有顯著差異，提示豬△F508轉(zhuǎn)基因模型將不會出現(xiàn)預期的表型。此外，我們對10萬個小分子組合化學庫篩選，發(fā)現(xiàn)了3個新結(jié)構(gòu)的豬CFTR抑制劑，但其親和力不高，提示我們從小分子組合化學庫獲得豬CFTR高親和力的抑制劑可能性不大。下一步計劃對本實驗室近期從500種常用中草藥建立的一個含40000個組分的小分子庫進行系統(tǒng)篩選，從結(jié)構(gòu)更為復雜多樣的天然產(chǎn)物中尋找豬CFTR的高親和力、特異性抑制劑。

簡介：蘭州大學碩士學位論文腎癌干細胞的初步篩選及其生物學特性研究姓名楊寧強申請學位級別碩士專業(yè)外科學（泌尿外科）指導教師岳中瑾20070501蘭州大學碩士學位論文PRELIMINARYISOLATIONOFRENALCARCINOMASTEMCELLSANDTHEIRBIOLOGICALCHARACTERISTICSABSTRACTOBJECTIVE1TOEXPLORETHEMETHODOFPRIMARYCULTURE、PURIFICATIONANDSEPARATIONOFRENALCARCINOMACELLS，ANDTOESTABLISHTHEEXPERIMENTALPATTERNSFORSTUDYINGRENALCARCINOMACELLS2TOSEPARATERENALCARCINOMASTEMCELLSRCSOANDSTUDYTHEIRGENERALBIOLOGICALCHARACTERISTICSMETHODSFRESHRENALCARCINOMATISSUEWASMADEINTOSINGLECELLSUSPENSIONBYMECHANICALANDENZYMATICDISSOCIATION，ANDWASPURIFIEDWITHISOPYCUICSEDIMENTATIONCENTRIFUGATIONANDREPEATEDADHERENCE，THENCDL33IMMUNOMAGNETICBEADSWEREUSEDTOSEPARATETHESINGLECELLSUSPENSION，CDL33CELLSANDCDL33“CELLSHARVESTEDWERECULTUREDSEPARATELYTODETERMINECLONEFORMATIONANDREPRODUCTIVEACTIVITY；SIMULTANEOUSLY，RENALTUMORCDL33CELLSANDCDL33‘CELLSWERESUBCUTANEOUSLYINJECTEDINSCIDMICETOASSESSTHEIRPOTENTIALABILITYTOFORMTUMORCLONE；ANDDESCRIBETHEIRMORPHOLOGICFEATURESRESULTSCONDITIONEDMEDIUMFORPRIMARYCULTURE、PURIFICATIONANDISOLATIONOFRENALCARCINOMACELLSWASNECCESSARY；CLONEFORMATIONANDREPRODUCTIVEACTIVITYOFCDL33。CELLSARESTRONGERTHANCDL33CELLSINOUREXPERIMENTANDALLOFTHECDL33CELLS，CDL33。CELLSANDTHECELLSBEFORESEPARATIONDIDNOTFORMTUMORINOURFOURCASESOFSUBCUTANEOUSIMPLANTATIONINSCIDMICECONDMIONSCONSTITUTIONOFTHERENALCARCINOMACELLSISCOMPLICATEDRENALCARCINOMASTEMCELLSAREPOSSIBLYEXISTEDINSUBPOPULATIONOFCDL33POSITIVECELLSKEYWORDSRENALCARCINOMASTEMCELLSBIOLOGICALCHARACTERISTICSIV

簡介：目的觀察骨髓CD45NESTIN細胞功能在AGVHD宿主中的變化，闡明其介導造血干細胞歸巢、支持造血的作用及在骨髓型GVHD中可能的作用和機制。方法1構(gòu)建急性移植物抗宿主病AGVHD小鼠模型。2檢測移植當天、3天、7天、14天、21天及28天，各組小鼠骨髓上清中及骨髓CD45NESTINCD45NESTIN細胞內(nèi)CXCL12、SCF、IL7及VCAM1相關(guān)趨化因子的水平。3檢測各組小鼠骨髓中供體細胞植入比例，并檢測移植后7天、14天各組小鼠骨髓HSC細胞表面CXCR4及凋亡相關(guān)因子FAS、CASEPASE3的表達。結(jié)果1成功構(gòu)建小鼠AGVHD模型。2移植后AGVHD組小鼠骨髓上清中及其骨髓CD45NESTIN細胞內(nèi)，趨化因子CXCL12及造血相關(guān)因子SCF、IL7、VCAM1的表達水平明顯降低。3移植當天、移植后3天及7天，AGVHD組小鼠骨髓中供體細胞比例明顯低于BMT組，各組小鼠骨髓HSC細胞在移植后不同時間點，其CXCR4表達及凋亡相關(guān)因子FAS、CASEPASE3的表達均無差別。結(jié)論AGVHD環(huán)境下骨髓CD45NESTIN細胞內(nèi)趨化因子CXCL12以及造血相關(guān)因子SCF、IL7、VCAM1基因表達水平上均受到抑制，介導HSCS歸巢的CXCL12CXCR4軸功能受損。而供體源的HSC內(nèi)CXCR4及凋亡相關(guān)因子表達未出現(xiàn)明顯變化。因此，AGVHD發(fā)病可通過作用于骨髓NICHE中CD45NESTIN細胞的正常生理功能，影響正常HSC的植入及造血分化作用。

簡介：我們和國外的研究表明ESRD思者的循環(huán)晚期糖基化終產(chǎn)物AGE水平異常增高在罹患有動脈粥樣硬化的ESRD患者的血管壁中也檢查到了AGE沉積AGE是蛋白質(zhì)氨基組與糖的醛基組之間非酶性糖化氧化反應的終產(chǎn)物研究提示AGE是一種對內(nèi)皮細胞有重要病理生理作用的尿毒癥毒素慢性腎功能衰竭時加速型動脈粥樣硬化AS的發(fā)病機制目前尚未完全清楚但近期研究結(jié)果表明AS的本質(zhì)是炎癥反應鑒于NO和MCP1在AS發(fā)病過程中的重要作用我們假設(shè)ESRD患者升高的AGE修飾蛋白可能通過對內(nèi)皮細胞NO生成及MCP1表達的影響促進了ESRD患者心血管疾病的發(fā)生該研究旨在觀察AGE修飾蛋白對人血管內(nèi)皮細胞合成、分泌一氧化氮NO和單核細胞趨化因子LMCP1的影響并對上述作用的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導通路及分子機制進行探討結(jié)論1AGE修飾蛋白抑制人類內(nèi)皮細胞合成NO2AGE修飾蛋白刺激人類內(nèi)皮細胞表達MCP1蛋白質(zhì)并上調(diào)MCP1MRNA的表達3AGE修飾蛋白抑制NO合成和刺激MCP1表達的生物學作用是經(jīng)P38MAPK信號傳導途徑通過氧化應激機制介導的晚期糖基化終產(chǎn)物對人血管內(nèi)皮細胞具有直接的病理生物學效應它們在循環(huán)和血管壁的縮留或沉積可能通過活化血管內(nèi)皮細胞導致動脈局部的炎癥反應從而參與慢性腎功能衰竭加速型動脈粥樣硬化的發(fā)生由于AGE對血管內(nèi)皮細胞的病理生物學作用由P38MAPK途徑介導故抗氧化劑和P38信號通路阻斷劑可能是慢性腎功能衰竭心血管并發(fā)癥的一種薪的防治途徑

簡介：中南大學博士學位論文EB病毒LMP1介導細胞增殖和調(diào)控凋亡雙重生物學效應分子機制探討姓名唐發(fā)清申請學位級別博士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師曹亞200251中南大學湘雅醫(yī)學院腫瘤研究所博士學位論文唐發(fā)清AP1CASPASECDKCROSSTALKCTARLCTAR2DABDIKBDOXEBEBNAEGFRIAP1心EBVHRPJAKLMPLNFLCBNPCPCR英文縮寫注解ACTIVATORPROTIENCYSTEINYLASPARATESPECIFICPROTEINCYCLINDEPENDENTKINASECARBOXYTERMINALACTIVATINGREGION1CARBOXYTERMINALACTIVATINGREGION一2DIARNINOBENZIDINEDOMINANTNEGATIVEMUTANTOFIKBDOXYCYLINEEMIDIUMBROMIDEEPSTEINBARRVIRUSNUCLEARANTIGENEPIDERMALGROWTHFACTORRECEPTORINHIBITOROFAPOPTOSISPROTEININHIBITOROFNFLCBEPSTEINBARRVIRUSHORSERADISHPEROXIDASEJANUSKINASELATENTMEMBRANEPROTEINLNUCLEARFACTORRD3NASOPHARYNGEALCARCINOMAPOLYMERASECHAINREACTION6激活蛋白1半胱氨酰天冬酸周期素依賴性激酶信息交流C活化區(qū)1C活化區(qū)2二氨基聯(lián)苯胺ITJ3顯負突變體強力霉素溴乙錠EB病毒核抗原表皮生長因子受體凋亡抑制蛋白NFKB抑制子EB病毒辣根過氧化物酶JANUS激酶潛伏膜蛋白1核轉(zhuǎn)錄因子RD3鼻咽癌聚合酶鏈反應

簡介：中南大學碩士學位論文去甲基化劑誘導肺腺癌細胞RASSF1A基因表達及其對肺腺癌細胞生物學行為影響的研究姓名李曉婕申請學位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學指導教師陳瓊20060501表達的量與凋亡率呈正顯著相關(guān)P005結(jié)論1肺腺癌A549細胞存在著RASSFIA的表達缺失。25AZACDR可實現(xiàn)啟動子去甲基化誘導肺腺癌A549細胞重新表達RASSFIA，并在一定范圍內(nèi)呈濃度依賴性。35AZACDR可抑制肺腺癌A549細胞的生長、誘導細胞凋亡，且與RASSFIA基因表達呈正相關(guān)，這提示RASSFIA重新表達可能為去甲基化劑誘導細胞凋亡的途徑之一，去甲基化劑可能成為肺癌化療的侯選用藥，RASSFIA有可能作為肺癌防治的新靶點。關(guān)鍵詞肺癌細胞，RASSFIA，5一氮雜一2’一脫氧胞苷，去甲基化Ⅱ

簡介：中國醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學位論文是我本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C構(gòu)的學位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關(guān)責任。論文作者簽名筮＆日期型L中國醫(yī)科大學研究生學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國醫(yī)科大學有關(guān)保護知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬中國醫(yī)科大學。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學，且導師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學。學校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名查盤艮指導教師簽名鏨坦／日期型至中文論著摘要6種MIRNAS在人不同腫瘤細胞及組織中的表達差異及生物學意義刖吾MICRORNASMIRNAS是一類長19～25個核苷酸，內(nèi)源性非編碼的單鏈小分子RNA，在物種間高度保守。MIRNAS參與腫瘤細胞的增殖、分化、凋亡及轉(zhuǎn)移過程，其突變、缺失及表達水平的異常與人類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。大量關(guān)于MIRNAS表達水平改變的文獻報道，均是基于某一種腫瘤，檢測其MIRNAS表達譜的改變。本研究中，目標MIRNAS是通過查閱大量文獻，篩選出人類腫瘤相關(guān)MIRNAS的信息，并加以對比和分析，找出與人類腫瘤相關(guān)性較大，但目前研究得尚不透徹，因而具有潛在研究價值的MIRNAS。本研究篩選出MIR．100、MIR．148A、MIR．181A、MIR．200A、MIR．200C和MIR．218等六種目標MIRNAS。其中MIR．100、MIR．148A、MIR．18LA、和MIR．218在多種腫瘤中表達水平下調(diào)，發(fā)揮抑癌基因的作用。MIR200A和MIR．200C同屬MIR．200家族，MIR．200A在大多數(shù)腫瘤中表達下調(diào)，在少部分腫瘤中表達上調(diào)，MIR．200C在胰腺癌細胞和組織中抑制腫瘤侵襲，但促進腫瘤增殖。因此，關(guān)于MIR．200A和MIR．200C在眾多腫瘤中的表達情況，其發(fā)揮癌基因還是抑癌基因的作用，仍存在爭論，需進一步深入研究。此外，還有文獻報道，MIR．148A、MIR．200C與腫瘤耐藥有關(guān)，MIR．218與乳頭瘤病毒有關(guān)。REAL．TIMEPCR檢測MIRNAS，是目前應用得最為廣泛的方法，其重復性好，需要的樣本量小且定量準確。因此，本實驗將用REAL．TIMEPCR法檢測目標MIRNAS在不同來源、不同類型腫瘤細胞中的表達水平，并在肺癌及乳腺癌組織中進行驗證，比較表達差異、分析生物學意義。

簡介：點擊查看更多骨橋蛋白下調(diào)對大隱靜脈平滑肌細胞多種生物學特性影響的實驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：乳腺癌的發(fā)病率在所有女性腫瘤中占首位，達229％，并且乳腺癌的致死率也在女性癌癥中排名第一。近年來乳腺癌在中國婦女中的發(fā)病率正悄然上升，在過去的十年間，北京、上海乳腺癌的發(fā)病率上升分別超過20％及30％，已接近西方乳腺癌高發(fā)國家的水平，因此加強對乳腺癌發(fā)生與發(fā)展的機制研究已刻不容緩。HEDGHOGHHGLI信號通路是一條經(jīng)典的胚胎發(fā)育信號系統(tǒng)，在胚胎發(fā)育和胚胎形成后細胞的生長和分化過程中都起著重要作用。轉(zhuǎn)錄因子GLI1既是HH通路下游的效應分子，也是該通路調(diào)節(jié)的靶蛋白，其表達也是HHGLI信號通路激活的標志。盡管已有研究表明，HHGLI通路參與了乳腺的正常發(fā)育，且與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。例如，GLI1及其他HH通路成員在乳腺癌組織中常見異常表達；GLI1的高表達可以促進乳腺癌細胞的增殖，并能抑制雌激素受體ESTROGENRECEPTA，ERA的表達。但是GLI1對乳腺癌其他生物學行為的影響還不很清楚，對其作用的機制也缺乏深入的研究。加之乳腺癌是一種包含多種類型的不均一性疾病。除了不同的病理類型外，還可根據(jù)癌細胞雌激素受體ER的表達情況，分為雌激素依賴型ER陽性和非依賴型ER陰性乳腺癌兩大類型。不同類型乳腺癌之間具有明顯不同的生物學特性和臨床表現(xiàn)。HEDGHOGHHGLI信號通路對這兩種不同乳腺癌的增殖、分化、遷移等是否有不同的影響也不清楚。MCF7和T47D細胞是ER陽性的雌激素依賴性細胞系，其分化程度相對比較高，而增殖和侵襲能力都比雌激素非依賴性乳腺癌細胞，如MDAMB231和SKBR3細胞低。本校病理生理教研室在前期研究中發(fā)現(xiàn)GLI1在MCF7和T47D中的表達明顯低于MDAMB231和SKBR3，并顯示GLI1的表達水平與ER的表達呈負相關(guān)，與乳腺癌的增殖呈正相關(guān)。本課題在前期研究的基礎(chǔ)上，擬進一步研究GLI1在乳腺癌增殖、粘附、遷移、抗凋亡等生物學行為中的作用及可能機制。我們首先建立了持續(xù)性穩(wěn)定高表達GLI1的MCF7、T47D細胞系，觀察高表達GLI1對乳腺癌細胞粘附、遷移、抗凋亡等生物學特性的影響，繼而通過全基因組寡核苷酸微陣列芯片分析，尋找轉(zhuǎn)染GLI1表達質(zhì)粒的MCF7細胞與轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒的MCF7細胞之間的差異表達基因，分析受GLI1調(diào)控的基因在乳腺癌生物學行為中的作用，并預測乳腺癌細胞中GLI1的靶基因，探討GLI1影響乳腺癌生物學特性的可能機制，進一步研究GLI1在乳腺痛發(fā)生發(fā)展中作用，尋找乳腺癌的治療的可能靶點。為研究GLI1在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展中的作用，全文由以下三個部分組成第一部分，穩(wěn)轉(zhuǎn)高表達GLI1對乳腺癌細胞增殖、遷移、粘附和凋亡的影響目的探討GLI1在乳腺癌細胞增殖、粘附、遷移、凋亡等生物學行為中的作用。方法采用細胞增殖實驗、粘附實驗、TRANSWELL遷移實驗等，與轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒的對照細胞相比，觀察穩(wěn)定轉(zhuǎn)染高表達GLI1對乳腺癌MCF7、T47D細胞株增殖、粘附、遷移的影響。給予紫杉醇PACLITAXEL，PTX100NM處理24小時、48小時，采用CCK8法檢測高表達GLI1對PTX凋亡誘導下細胞存活率的影響。結(jié)果成功建立穩(wěn)轉(zhuǎn)高表達GLI1的MCF7、T47D細胞株及穩(wěn)轉(zhuǎn)空載質(zhì)粒的對照細胞。穩(wěn)轉(zhuǎn)高表達GLI1促進乳腺癌細胞增殖，并能明顯促進細胞的粘附；其中穩(wěn)轉(zhuǎn)高表達GLI1的MCF7、T47D細胞粘附能力分別是對照細胞的158、141倍P結(jié)論高表達GLI1能促進乳腺癌細胞MCF7、T47D的增殖、粘附，抑制乳腺癌細胞MCF7的遷移，促進其在凋亡誘導劑PTX作用下的存活。第二部分，GLIL調(diào)控的靶基因的篩選與鑒定目的篩選GLI1調(diào)控的基因，探討GLI1對乳腺癌生物學行為影響的可能機制，尋找GLI1的靶基因。方法采用人全基因組寡核苷酸微陣列芯片技術(shù)，篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)高表達GLI1的MCF7與對照細胞之間的差異表達基因，并用QRTPCR方法驗證。生物信息學分析預測GLI1可能的靶基因，采用QRTPCR方法檢測重組人HEDGEHOG通路配體SHHNRECOMBINANTHUMANSHHNTURMINUS，RHSHHN處理MCF7細胞4小時后GLI1、CCL2、BIRC3MRNA的變化，推測其是否為GLI1的直接靶基因。結(jié)果基因芯片共篩選出GLI1MCF7與對照細胞差異表達基因338個，其中表達上調(diào)的基因有179個，表達下調(diào)的基因有159個，隨機挑選部分基因，采用QRTPCR方法驗證，其MRNA表達情況與基因芯片結(jié)果一致。信號通路分析提示，這些基因編碼的蛋白功能涉及細胞增殖、凋亡、粘附、趨化、炎癥反應、泛素化、代謝等各方面，其中，BTG1、SESN1、CLDN2、BIRC3、CCL2等改變基因可能是GLI1影響乳腺癌細胞生物學行為的機制之一。經(jīng)分析，潛在靶基因BIRC3、CCL2基因的啟動子區(qū)域有GLI1的結(jié)合序列。用RHSHHN蛋白處理MCF7細胞4小時，觀察到BIRC3、CCL2的MRNA表達的增加，推測BIRC3、CCL2可能為GLI1的靶基因。結(jié)論GLI1調(diào)控的基因涉及粘附、凋亡、轉(zhuǎn)移、炎癥反應等方面，這些被調(diào)控的基因參與了GLI1對乳腺癌各種生物學行為的作用。其中BIRC3、CCL2可能為GLI1的直接靶基因。第三部分，影響乳腺癌細胞GLI1表達的因素目的基于雌激素17ΒESTRADIOL，E2對乳腺癌發(fā)生發(fā)展的重要作用，觀察雌激素、雌激素受體ERQ對GLI1表達、轉(zhuǎn)錄活性的影響。并觀察血清濃度對GLI1表達的影響。方法乳腺癌MCF7細胞給予E2處理不同時間，采用QRTPCR、WESTERNBLOT方法分別檢測GLI1的MRNA、蛋白的表達。MCF7中采用脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染ERA，熒光素酶報告基因方法檢測GLI1轉(zhuǎn)錄活性的改變。分別用含10％、5％、25％、05％的去激素血清培養(yǎng)液培養(yǎng)MCF7細胞24H，QRTPCR方法檢測GLI1MRNA表達的改變。結(jié)果雌激素E2能時間依賴性地上調(diào)乳腺癌MCF7細胞GLI1的表達，36H時MRNA表達最高，為對照的436倍，各時間點GLI1MRNA表達量與對照相比均有統(tǒng)計學差異P結(jié)論雌激素E2可上調(diào)GLI1的表達。瞬時轉(zhuǎn)染高表達ERΑ能增強GLI1的轉(zhuǎn)錄活性。此外，血清濃度的降低可上調(diào)GLI1的表達，推測GLI1可能在應激、炎癥等不良因素下表達，利于乳腺癌細胞的存活。

簡介：第三軍醫(yī)大學碩士學位論文INK4A/ARF基因共轉(zhuǎn)染對肺腺癌A549細胞生物學行為及藥物敏感性的影響姓名謝啟超申請學位級別碩士專業(yè)腫瘤學指導教師胡義德20050501整三堊鱉查堂堡主堂堡蝗苧英文縮寫AADMALARFBPCDKCDDPCDNADNADNTPDOPATDABDMSODEPCEBEDTAE2FFCMG418HEPESHEICC￡BMMLV英文縮寫一覽表英文全稱ABSORPTIONDOXORUBICINAPOPTOSISINDEXALTERNATIVEREADINGFRAMEBASEPAIRCYCLINDEPENDENTKINASECISPLATINCOMPLEMENTARYDNADEOXYRIBONUCLEICACIDDEOXYRIBONUCLEOSIDETRIPHOSPHATEN12，3DIOLEOYLOXYPROPYL卜N，NNTRIMETHYLAMMONIUMMETHYISULFATEDIAMINOBENZIDINEDIMETHYLSULFOXIDEDIETHYLPROCARBONATEETHIDIUMBROMIDEETHYLENEDIAMINETETRACETATEE2ABINDINGFACTORFLOWCOMETERGENETICINN一2HYDROXYETHYLPIPERAZINEN一2一ETHANESULFONICACIDHEMATOXYLINESOSINIMMUNOCYTOCHEMISTRYLURIABERTANIMOLONEYMURINELEUKEMIAVIRUS孛交龕穩(wěn)光吸收值鹽酸阿霉素臻亡豢數(shù)可變閱讀框堿基對周期豢婊簸蛙酶順鉑互補DNA脫氧核耱核酸寡脫筑三磷酸苷陽離子脂質(zhì)體二氨蘩聯(lián)苯黢二甲熬旺砜焦碳酸二乙酯濱訖乙錠乙二敝四乙酸E2A綴合因子滾式綴鼴儀選擇性抗生素G418N．2．羥乙基呱嗪N．乙磺酸蘇術(shù)索，伊紅免疫細胞化學LB壤棼基莫洛怒鼠白血病病毒

簡介：碩士學位論文論文題目SIRNA干擾TGFBR3對膀胱癌T24細胞生物學行為的影響研究生姓名肖克兵指導教師姓名單玉喜專業(yè)名稱泌尿外科研究方向泌尿男生殖系腫瘤的基礎(chǔ)與臨床論文提交日期2013年3月SIRNA干擾TGFBR3對膀胱癌T24細胞生物學行為的影響中文摘要ISIRNA干擾TGFBR3對膀胱癌T24細胞生物學行為的影響中文摘要中文摘要中文摘要中文摘要背景與目的背景與目的背景背景研究表明TGFBR3在人類多種腫瘤中表達異常，其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。本課題組前期研究顯示在膀胱癌組織中，TGFBR3表達異常，可能發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。但其在膀胱癌細胞中的表達及其對膀胱癌生物學行為的影響還未見相關(guān)報道。目的目的本實驗通過檢測及SIRNA干擾TGFBR3在膀胱癌細胞中的表達，進而研究其對膀胱癌生物學行為的影響。方法方法利用QRTPCR及WESTERNBLOTTING檢測正常膀胱上皮細胞株SVHUC1、膀胱癌細胞株5637及T24中TGFBR3的表達，篩選出高表達TGFBR3的細胞株。使用化學合成的SIRNA干擾高表達TGFBR3的細胞株，并進行體外實驗觀察TGFBR3對膀胱癌生物學行為的影響。設(shè)計并合成四對特異性干擾TGFBR3的SIRNA，利用QRTPCR篩選出可以有效干擾TGFBR3MRNA達75以上的序列，進行后續(xù)實驗。應用WST1細胞增殖實驗及平板克隆形成實驗研究干擾TGFBR3后膀胱癌細胞生長及活性的變化，選擇PI染色法研究干擾TGFBR3后膀胱癌細胞細胞周期分布的變化，進行劃痕實驗及TRANSWELL遷移、侵襲實驗研究干擾TGFBR3后膀胱癌細胞運動、遷移、侵襲能力的變化。結(jié)果結(jié)果本組PCR及WESTERNBLOTTING實驗無論在MRNA水平還是在蛋白水平，TGFBR3在三株細胞中的表達為T24最高，SVHUC1其次，5637最低。三者MRNA表達量分別為342000875、100001800、062001270P＜005。因此選用T24細胞作為后續(xù)RNAI的工具細胞。設(shè)計合成的四對SIRNAR314均可以降低T24細胞TGFBR3的表達，干擾效率分別為8548、8937、7983、6878P＜0001。因此選擇SIRNAR313用于后續(xù)實驗。WST1結(jié)果顯示與MOCK組、SIRNANC組相比，轉(zhuǎn)染后48H時，SIRNATGFBR3組細胞的生長及活性降低（P＜001），72H時兩者差異進一步增大（P＜0001）。平板克隆形成實驗結(jié)果顯示與MOCK組、SIRNANC組相比，SIRNATGFBR3組克隆形成數(shù)明顯減少（P＜005）。碘化丙啶染

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文HUGL1基因表達和細胞生物學功能與結(jié)直腸癌發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系姓名黃士勇申請學位級別博士專業(yè)臨床醫(yī)學外科學（普通外科）指導教師孟榮貴郝立強20080601獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行的研究工作。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔本聲明的法律責任。學位論文作者簽名暴、士乒簽字日期。碉年易月多日學位論文使用授權(quán)書聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。保密的學位論文在解密后適用本授權(quán)書學位論文作者簽名多、步舅導師簽名多羰簽字日期哪年易月羅日簽字日期；B留年6月』日

簡介：肌腱病TENDINOPATHY的發(fā)病率極高，是骨科、運動醫(yī)學、康復醫(yī)學、職業(yè)病防治和老年醫(yī)學的常見疾病。肌腱病嚴重影響人們的工作與生活，特別影響運動員競技水平的發(fā)揮，常迫使優(yōu)秀運動員提早退役。肌腱病的主要臨床表現(xiàn)為肌腱或肌腱骨胳連接處的疼痛、壓痛甚至斷裂、關(guān)節(jié)活動度受限。肌腱腱病最常見的發(fā)病部位依次為髕腱、跟腱、岡上肌腱肩袖、指深屈肌腱及肱骨外上髁伸肌總腱止點。足底筋膜炎、跟腱炎、髕腱炎、網(wǎng)球肘、高爾夫肘、岡上肌腱炎都是肌腱病。雖然肌腱病如此常見，其發(fā)病機制仍不清楚，常認為與肌腱韌帶的急慢性損傷有關(guān)。新近發(fā)現(xiàn)的肌腱干祖細胞TENDONSTEMPROGENITCELLS，TSPCS，也稱為肌腱干細胞TENDONSTEMCELLS，TSCS或肌腱源性干細胞TENDONDERIVEDSTEMCELLS，TDSCS，經(jīng)傳代培養(yǎng)后可直接成為腱細胞，具有成體干細胞的自我復制和誘導成脂、成軟骨、成骨分化的潛能，是腱細胞的前體細胞。研究表明，TSCS參與肌腱的急慢性損傷修復，是肌腱急慢性損傷修復過程中的關(guān)鍵效用細胞。不同劑量的反復循環(huán)機械應力刺激可影響肌腱干細胞力學生物學行為，進一步導致肌腱內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)和肌腱病的發(fā)生。應用體外循環(huán)機械牽伸系統(tǒng)模擬細胞在體反復機械應力狀態(tài)，證明4％的機械拉伸能增加TSCS增殖、促進TSCS成為腱細胞，然而8％的機械拉伸可誘導TSCS分化為脂肪、軟骨和骨細胞?？梢?，小的機械拉伸（有序和適度的體育鍛煉）可促進TSCS增殖并成為腱細胞，有利于肌腱的強壯及肌腱的健康而持續(xù)較大的機械負荷（如過度勞損）是有害的，它促使肌腱干細胞分化為非腱細胞，導致脂肪堆積、黏液形成和肌腱鈣化，表現(xiàn)為肌腱病的典型病理變化?？梢?，TSCS可能是探索肌腱病的突破口。因為對肌腱病還沒有本質(zhì)認識，臨床治療還往往是經(jīng)驗性的。治療方法包括局部制動休息、減負訓練、按摩冷療、離心型運動、口服非甾體類抗炎藥物、局部注射富血小板血漿PLATELETRICHPLASMA，PRP、細胞療法、體外沖擊波術(shù)、嚴重時可給予糖皮質(zhì)激素等治療。對于保守治療無效、臨床癥狀持續(xù)較重者，可給予外科手術(shù)治療。在這些治療方法中，PRP局部注射具有自體來源、制作簡單、可制作成凝膠狀、臨床使用安全、方便、經(jīng)濟等優(yōu)點，倍受醫(yī)生和患者的歡迎。因此，臨床應用PRP局部注射治療“肌腱病”值得我們關(guān)注。PRP是全血經(jīng)過梯度離心分離獲得的、含有超過基線水平的濃縮血小板血漿。一般而言，血小板含量至少要達到正常血的35倍才能稱之為PRP。當PRP被激活后，其血小板釋放出大量的生長因子，包括血小板衍生生長因子PDGF，轉(zhuǎn)化生長因子ΒTGFΒ，血管內(nèi)皮細胞生長因子VEGF，纖維生長因子FGF，內(nèi)皮細胞生長因子EGF，血小板衍生內(nèi)皮細胞生長因子PDEGF，胰島素樣生長因子IGF等。這些生長因子對細胞的增殖和分化有著重要的作用，能夠刺激損傷組織血管神經(jīng)化、為細胞修復或再生損傷組織提供血供和營養(yǎng)。體外研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)PRP能促進TSCS增殖和成腱細胞形成，動物實驗研究也已證實這一結(jié)果，一些臨床試驗也已經(jīng)驗證PRP能夠促進肌腱和韌帶急慢性損傷的愈合和有效治療肌腱病。然而，PRP局部注射治療肌腱和韌帶的急慢性損傷和肌腱病并不總是令人滿意，有一些臨床試驗卻發(fā)現(xiàn)PRP對肌腱和韌帶急慢性損傷的修復和肌腱病的治療無益。因此，應用PRP治療肌腱病仍需進一步基礎(chǔ)與臨床研究。我們知道，臨床應用的PRP是個體化準備的，沒有明確的定義。因而，每一個人的PRP都可能不一樣，并且在某些情況下，有些病人不能成功獲得PRP。仔細分析PRP的制備過程及其組成成份，我們發(fā)現(xiàn)只有兩類（共有4種）不同的PRP在臨床使用其中一類含白細胞LPRP和LPRF，另一類不含白細胞PPRP、PPRF。有研究發(fā)現(xiàn)應用富含白細胞的PRP有較乏白細胞的PRP更為嚴重的急性炎癥反應。因為TSCS是肌腱急慢性損傷修復的關(guān)鍵效用細胞，我們假設(shè)LPRP不利于肌腱和韌帶的愈合是因為LPRP會抑制TSCS的正常活性。本課題為證實上述假設(shè)共分為3章，即肌腱干細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定PPRP和LPRP的制備和鑒定PPRP和LPRP對TSCS增殖、分化和細胞力學的影響。研究目的是為臨床合理應用PRP局部注射治療肌腱病提供理論依據(jù)。第一章兔肌腱干細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定目的分離和鑒定兔肌腱干細胞TSCS并評估其干細胞特性為下一步實驗做準備。研究內(nèi)容包括1TSCS的分離及培養(yǎng)2TSCS的克隆形成能力及增殖能力檢測3TSCS的流式細胞儀及免疫熒光鑒定4TSCS的成脂、成軟骨、成骨分化能力測定。方法從新西蘭大白兔中獲取TSCS已經(jīng)匹茲堡大學實驗動物應用學會批準IACUC批準號1105545A。選用3月齡健康雄性新西蘭大白兔。兔處死后從后肢的跟腱取細胞并進行TSCS培養(yǎng)，觀察克隆形成、進行干細胞鑒定和到P3后行成脂、成軟骨、成骨誘導。結(jié)果體外培養(yǎng)7天后，肌腱來源細胞TENDONDERIVEDCELLS，TDCS已經(jīng)形成克隆。流式細胞術(shù)對細胞表面抗原標志進行了分析，結(jié)果顯示TDCS表面抗原干細胞標志CD90、CD44均呈強陽性。免疫熒光的方法對干細胞特征性標志物NS，NANOG，OCT4，SSEA4進行了檢測，染色細胞經(jīng)免疫熒光顯微鏡觀察。結(jié)果顯示80％的TDCS細胞均表達陽性。成脂誘導分化后，細胞增殖緩慢，細胞中出現(xiàn)脂滴，并逐漸增大、融合，油紅O染色可見細胞內(nèi)大小不等的紅色脂滴。成軟骨誘導分化4周，固定細胞，經(jīng)番紅O染色，細胞微團被染為紅色。成骨誘導分化4周后，TDCS細胞呈層疊樣生長，局部出現(xiàn)鈣鹽沉積，形成礦化結(jié)節(jié)，鈣鹽沉積處ALIZARINREDS染色成紅色。小結(jié)本研究獲取的TDCS是肌腱干細胞TSCS，具有克隆形成能力及快速增殖能力，細胞表面抗原CD90、CD44表達呈陽性，而CD34表達呈陰性，干細胞特異性標志物NS、NANOG、SSEA4和OCT4表達陽性，在成骨、成脂和成軟骨誘導條件下，可以分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等，具有多向分化潛能，可用于下一步研究。第二章PPRP和LPRP的制備及PPRP及LPRP對TSCS的影響為了明確是否是PRP中的白細胞影響了PRP的療效，本研究將分別制備PPRP和LPRP及研究PPRP與LPRP對TSCS的作用，以進一步確定LPRP對肌腱韌帶修復的不利影響，明確PPRP對肌腱韌帶修復的積極作用。方法選用3月齡、體重25KG的健康雄性新西蘭大白兔8只匹茲堡大學實驗動物中心提供，IACUCPROTOCOLNUMBER1105545A，乙醚麻醉后，在嚴格無菌條件下，用預先含有38％ACD抗凝劑SODIUMCITRATE溶液的注射器從心臟采集新鮮抗凝血并置于冰水混合物中。小心緩慢地將6ML的新鮮血注入盛有6MLPOLYMPHPREPACCURATECHEMICALSCIENTIFICCROPNY的試管中，置4℃離心機中予以400GM離心30分鐘后手工分離出PPRP和LPRP，應用自動細胞計數(shù)儀NEXCELOMBIOSCIENCELLC，LAWRENCE，MASSACHUSETTS對PPRP和LPRP所含的白細胞進行計數(shù)。PPRP和LPRP均用22MMCACL2進行激活并存于4℃冰箱中備下一步實驗用。將準備好PPRP和LPRP培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中除含或未含PPRP或LPRP外，其他成分一樣（20％胎牛血清、100UML青霉素、100UML鏈霉素、低糖DMEM），分析各培養(yǎng)基中的細胞因子將兔來源的TSCS接種在含PPRP、LPRP0％，2％，5％，10％培養(yǎng)基或普通培養(yǎng)基的6孔培養(yǎng)板中10000個細胞孔并在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)培養(yǎng)至1、2、4天觀察細胞形態(tài)，至第4天用自動細胞計數(shù)儀NEXCELOMBIOSCIENCELLC，LAWRENCE，MASSACHUSETTS行細胞計數(shù)并計算PDT，流式細胞儀檢測其干細胞特征性細胞表面標志物觀察PPRP組、LPRP組和對照組TSCS經(jīng)成脂、成軟骨和成骨誘導28天后其多分化潛能QRTPCR分析PPRP和LPRP對TSCS基因表達的影響，PRP與白細胞對TSCS的相互影響CTFM測定PPRP和LPRP對TSCS細胞力學的影響。結(jié)果加入離心液一次梯度離心可制備高濃度的PRP。PRP中的血小板量為144108±084108MLP＜005，與全血比較，其血小板濃縮率為325±073。PPRP中的白細胞數(shù)為06625105±036105ML，LPRP中的白細胞數(shù)為32775105±122105MLP0019MEAN±SD，N8。所有培養(yǎng)基PPRP培養(yǎng)基、LPRP培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基均在配制好后即用ELISA法測定其生長因子PDGFEGFTGFΒ1，VEGF的濃度。PPRP培養(yǎng)基有較LPRP培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基更高濃度的生長因子，特別是EGF和TGFΒ1。LPRP培養(yǎng)基中VEGF濃度較普通培養(yǎng)基還低，說明白細胞可能抑制PRP釋放生長因子PPRP與LPRP培養(yǎng)基比較，P＜005，N3LPRP培養(yǎng)基組不貼壁細胞增加其干細胞特征性細胞表面標志物CD44和CD90發(fā)生變化，經(jīng)PPRP處理，CD44和CD90都表達增加，經(jīng)LPRP處理則相反PPRP與LPRP組比較，P＜005，N3PDT與PRP白細胞的濃度有關(guān)，當增加PPRP的濃度或降低LPRP濃度時，PDT縮短（組內(nèi)和組間比較，P＜005，N3）培養(yǎng)4天、14天后，LPRP的濃度越高，NANOG、OCT4基因表達越下調(diào)LPRP組內(nèi)和LPRP組與PPRP組比較，P＜005，N3經(jīng)28天的成脂、成軟骨和成骨誘導后，PPRP培養(yǎng)基組、LPRP培養(yǎng)基組和普通培養(yǎng)基組的TSCS均被成功誘導。然而，LPRP培養(yǎng)基組陽性細胞染色數(shù)明顯較PPRP培養(yǎng)基組和普通培養(yǎng)基組。與PPRP培養(yǎng)基組和普通培養(yǎng)基組比較，LPRP培養(yǎng)基組成脂、成軟骨和成骨分化明顯增加（組內(nèi)比較，P＜005，N3）各基因與PPRP和LPRP的濃度密切相關(guān)。LPRP的存在，PPARΓ、SOX9、RUNX2、MPGES基因表達就明顯上調(diào)。LPRP組內(nèi)和LPRP組與PPRP組比較，P＜005，N3LPRP培養(yǎng)基組的最大細胞收縮力明顯小于PPRP培養(yǎng)基組和普通培養(yǎng)基組，組間比較有顯著性差異P0006、0002，N5，但PPRP培養(yǎng)基組與普通培養(yǎng)基比較則未見顯著性差異P0609、0002，N5WBC組的COX1和COX2基因明顯上調(diào)，但WBCS的這種作用可以明顯被PRP抵消PRP組Ⅰ型膠原基因COLI表達上調(diào)，但這種作用可以明顯被WBC處理抑制WBC組還明顯有MMP13基因表達的增加，這種表達增加可以被PRP抵消。小結(jié)本研究中通過加入離心液一次梯度離心分離制備出PPRP和LPRP，其所含的白細胞有顯著的差異。與PPRP和空白對照比較，LPRP會抑制TSCS的增生、加速TSCS的分化、并使TSCS脆性增加經(jīng)WBCS處理后，TSCS的炎癥反應介質(zhì)基因COX1和COX2表達增加，細胞分解代謝的基因Ⅰ型膠原表達減少但MMP13表達增加。這些發(fā)現(xiàn)支持臨床所見的肌腱病發(fā)病機制，因而，我們可以合理地推斷PPRP可以促進肌腱韌帶的愈合而LPRP可能抑制肌腱韌帶的愈合。因此，我們應該用PPRP而不是含有白細胞的LPRP治療肌腱病。第三章PPRP膠TSCS復合物的構(gòu)建及TSCS的體內(nèi)、外示蹤將PPRP膠作為載體負載TSCS構(gòu)建成PPRP膠TSCS復合物并植入目標部位，并監(jiān)測TSCS植入體內(nèi)后其生物學活性。方法應用SPIO標記TSCS、分析SPIO對TSCS生物學功能的影響構(gòu)建PPRP膠TSCS復合物體外MRI觀察經(jīng)SPIO標記的TSCS在PPRP膠內(nèi)的分布情況建立兔髕韌帶窗式缺損模型，用PPRP膠TSCS復合物進行修復，MRI連續(xù)檢測追蹤經(jīng)SPIO標記的TSCS并檢驗PPRP膠作為載體的可行性免疫熒光檢測評價PPRP膠TSCS植入體內(nèi)3周后其TSCS的Ⅰ型膠原合成能力，以觀察TSCS植入體內(nèi)3周后的生物學性能明確PPRP膠作為TSCS載體用于治療急慢性肌腱損傷和肌腱病的可行性。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)TSCS經(jīng)胞吞作用攝入SPIO，可見SPIO在細胞漿內(nèi)并圍繞在細胞核周圍。細胞標記率約98％。經(jīng)SPIO標記的TSCS細胞形態(tài)未見明顯改變細胞增殖也未見明顯改變，表現(xiàn)為PDT與未標記TSCS比較無顯著性統(tǒng)計學差異P＞005，說明SPIO標記不會影響細胞的增殖功能分別于標記后2、4、7天檢測細胞的活力，發(fā)現(xiàn)其活力都在90％左右，與未標記細胞比較也無明顯差異，說明SPIO標記不會明顯干擾TSCS的細胞活力P＞005經(jīng)免疫組織化學方法證實SPIO標記組TSCS和未標記組NUCLEOSTEMIN和NANOG表達率都為約90％，沒有明顯差別P＞005經(jīng)QRTPCR檢測，我們發(fā)現(xiàn)標記TSCS和未標記TSCS相比，在標記后4、7、14天，其OCT4和NANOG基因表達都沒有明顯差別P＞005經(jīng)21天的成脂、成軟骨和成骨分化，兩組未見明確差異其PPAR、SOX9和RUNX2基因表達也無明顯差異P＞005。體外PPRP膠TSCS復合物經(jīng)3TMR掃描發(fā)現(xiàn)經(jīng)SPIO標記的TSCS其MRI信號與標記細胞數(shù)呈線性改變，說明TSCS可均勻分散在PPRP膠中體內(nèi)PPRP膠TSCS復合物經(jīng)3TMR掃描發(fā)現(xiàn)經(jīng)SPIO標記的TSCS連續(xù)3周其MRI信號沒有明顯變化。術(shù)后3周局部表現(xiàn)為肌腱缺損已有組織填充，經(jīng)普魯氏蘭染色證實MRI顯影的細胞就是經(jīng)SPIO標記的TSCS，說明TSCS能持續(xù)停留在目標部位至少3周。從組織修復的角度考慮，3周的時間足于完成急性炎癥期，目的細胞能停留在目標部位3周以上就可能發(fā)揮其生理功能，達到治療目的。再次，經(jīng)免疫組織化學染色證實PPRP膠負載的TSCS在體內(nèi)3周后出現(xiàn)明顯的Ⅰ型膠原的表達，說明TSCS已經(jīng)發(fā)揮生理作用。可見PPRP膠可以作為TSCS細胞治療或組織工程的載體。小結(jié)用SPIO標記TSCS不會明顯干攏其干性、負載TSCS的PPRP膠修復兔髕韌帶窗式缺損術(shù)后2周和3周連續(xù)經(jīng)MRI觀察均未見明顯影像學改變、經(jīng)普魯氏蘭染色證實MRI顯影的細胞就是SPIO標記的TSCS，說明存在于PPRP膠內(nèi)作為目的細胞的TSCS可以穩(wěn)定維持在目標部位，且TSCS植入體內(nèi)3周后能合成Ⅰ型膠原，說明TSCS可用SPIO進行標記、PPRP膠可作為TSCS的良好載體。結(jié)論本研究成功地從兔跟腱分離培養(yǎng)出TDCS。這些細胞有克隆形成能力、快速增殖能力和多向分化潛能，經(jīng)流式細胞儀證實干細胞表面特征性標志物陽性，經(jīng)免疫熒光染色證實干細胞特征標志物染色陽性，從而確定為肌腱干細胞經(jīng)一次離心可簡便制備出較高濃度的PRP并成功分離出PPRP和LPRP發(fā)現(xiàn)LPRP，這種含白細胞的PRP，會抑制TSCS增殖、加速TSCS分化并使TSCS脆性增加、加大TSCS的細胞炎癥反應及細胞分解代謝?；蛟S，我們應該用PPRP而不是含有白細胞的LPRP來治療肌腱病。PPRP膠是TSCS細胞治療和肌腱組織工程潛在的良好支架。

簡介：第四軍醫(yī)大學碩士學位論文外源性AXIN基因?qū)κ竽z質(zhì)瘤細胞系C6生物學特性的影響姓名張麗英申請學位級別碩士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師李青20060501鵝州軍醫(yī)人學碩士學位論文英文縮略訶表縮寫APCAXAMBPBSA℃CBDCBPCDNACKDABDEPCDIXDMEMERKFCSG418GFP英文縮略詞表ABBREVIATION英文全稱ADENOMATOUSPOLYPOSISCOLIAXINASSOCIATINGMOLECULEBASEPAIRSBOVINESERUMALBURNINDEGREECELSIUSIJCATENINBINDINGDOMAINCREBBINDINGPROTEINCOMPLIMENTARYDEOXYLRIBONUCLEICACIDCASEINKINASEDIAMINOBEZIDINEDIETHYLPYROCARBONATEDISHEVELED／AXINHOMOLOGOUSDULBECCOSMODIFIEDOFEAGLESMEDIUMEXTRACELLULARSIGNALREGULATEDKINASEFETALCALFSERLMRLGENITICINGREENFLUORESCENCEPROTEIN中文全稱大腸息肉腺瘤AXIN結(jié)合分子堿基對牛血清白蛋白攝氏度13CATENIN結(jié)合區(qū)域CREB結(jié)合蛋白互補鏈脫氧核糖核酸酪蛋白激酶二氨基聯(lián)苯氨焦炭酸二乙酯DVL／AXIN同源結(jié)構(gòu)域一種細胞培養(yǎng)液細胞外信號調(diào)控激酶胎牛血清氨基糖甙抗生素綠色熒光蛋白