簡介：第三軍醫(yī)大學碩士學位論文RNA干擾抑制CMET基因表達對人喉癌HEP2細胞生物學行為的作用姓名謝治年申請學位級別碩士專業(yè)耳鼻咽喉科學指導教師姬長友20090501第三軍醫(yī)人學碩十學位論文經(jīng)雙酶切后的載體PSILENCER20U6連接，構(gòu)建攜帶此SHRNA的重組質(zhì)粒PSILENCER2O，CMETSHRNA，轉(zhuǎn)化DH5Q菌株，提取質(zhì)粒行酶切鑒定，并進行序列測定。2利用構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒，通過脂質(zhì)體介導的方法將其轉(zhuǎn)染到喉癌HEP2細胞株中。采用RTPCR及WESTEMBLOT法檢測CMETMRNA及蛋白表達情況，比較轉(zhuǎn)染前后其表達的變化，判斷各SHRNA的干擾效應(yīng)；篩選出抑制效果最好的CMETSIRNA序列。3通過四甲基偶氮嘩藍MTT法取轉(zhuǎn)染后細胞生長24H、48H、72H、96H四個時間點、運動實驗及侵襲實驗通過構(gòu)建TRANSWELL小室比較重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEP一2細胞前后細胞的生長、運動及侵襲能力。結(jié)果1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH5Q菌株經(jīng)氨卞青霉素抗性篩選可見有細菌克隆長出。2雙酶切鑒定顯示重組質(zhì)粒含有BAMHI及HINDIII酶切位點。3經(jīng)測序，模板序列與設(shè)計序列完全正確，重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。4通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染三種干擾質(zhì)粒后，RTPCR法檢測CMET基因的MRNA表達水平，顯示三組均下調(diào)，以重組質(zhì)粒PSILENCER2O／CMETSHRNA2效應(yīng)最顯著PO003。5經(jīng)WESTEMBLOT法檢測，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染三種干擾質(zhì)粒后，CMET蛋白的表達水平均下調(diào)，以重組質(zhì)粒PSILENCER20，CMETSHRNA2效應(yīng)最顯著PO02。6PSILENCER20／CMETSHRNA2轉(zhuǎn)染HEP一2細胞后，相對于未轉(zhuǎn)染組及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，細胞在培養(yǎng)24H、48H、72H、96H后的吸光度A492值均顯著下降PO05。7PSILENCER2O／CMETSHRNA2轉(zhuǎn)染HEP2細胞后，相對于未轉(zhuǎn)染組及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，侵襲細胞計數(shù)為15OO36LP值均O004，趨化運動細胞計數(shù)為7267473分另IJ為POOOL，P0004。結(jié)論1成功構(gòu)建了針對CMET基因的重組RNAI質(zhì)粒PSILENCER2O紀一METSHRNAL、PSILENCER2O／CMETSHRNA2、PSILENCER2O／CMETSHRNA3。2重組質(zhì)粒PSJJENCER2。O／CMETSHRNA2可明顯降低喉癌HEP2細胞CMET基因在MRNA和蛋白水平的表達。3重組質(zhì)粒PSILENCER20／CMETSHRNA2能顯著抑制喉癌HEP一2細胞的生長、運動及侵襲，有可能是潛在的喉癌治療新方法。關(guān)鍵詞RNA干擾；CMET基因；短發(fā)夾RNA重組質(zhì)粒；喉癌；HEP2細胞；轉(zhuǎn)染7

簡介：MARCCT1在腎透明細胞癌中的表達以及對人腎癌細胞株A498生物學特性影響的實驗研究STUDIEONTHEPRESSION一Ⅳ眥CCT1’RENALCELLTUDIESONTLLEEXPRESSLONOFINRENALCELLIVIAKCCRL’LCARCINOMAANDE““CTONBIOLORICALCARCLNOMAANDITSELIECTONBIOLORICALC1IIARACTERISTICSOFARACTERLSTLCS0TRENALCELLCARCINOMACELLLINEA498研究生姓名王承學科和專業(yè)外科學泌尿外科專業(yè)指導教師王林輝教授指導小組劉冰副教授楊慶副教授葉華茂副教授第二軍醫(yī)大學長海醫(yī)院泌尿外科論文提交日期2013年5月學位授予日期2013年6月目錄摘要。1一ABSTRACT3縮略詞表6前言。7第_部分INCRNAS芯片篩選在腎癌腫瘤組織中差異表達INCRNAS的研究一9一材料與方法一9一一、材料9一組織來源9二主要試劑10三主要配制試劑主要參照第二版分子實驗克隆指南10四主要儀器一11一二、方法一11一一收集標本N二基因表達譜的檢測12一結(jié)果。一14討侖16一第二部分MARCCT1在人腎透明細胞癌中的表達情況及其與臨床分期、病理分級的關(guān)系研究一】7材料與方法J一17一一，一、材料17一組織來源一一王7二主要試劑_一18三主要配制試劑主要參照第二版分子實驗克隆指南一18四主要儀器一19一二、方法一19一一收集標本一19一二REALTIMEPCR分析一20結(jié)果22一一、納入研究病例的臨床病理特征一22一二、實時定量PCR檢測MARCCT1在14例CCRCC及癌旁非腫瘤組織中的表達情況一22

簡介：THEBIOLOGL1ALEFFECTSOFPLLFNYLALANINEDERI＼，ATLVESONSEVENKLNDS0FCELLLINESADISSERTALI011SUBMIUEDTOTHEGIADUATESCHOOLOFIENANNOL‘REALUNIVERSITYINPARLIALFUI’I1LLLCLLLOFTHERCQUIIEMENLSMRIHCDEGL’EEOL、MASLEIOL’SCIENCEBYC|”NRANSUPELWISORPROF．DLXUCTLLLSHUANP】_OF．DIZHANG．1INGBOMAV21I2摘要L4．氟苯丙氨陂FP足人體中一些羥化酶的抑制劑，具有抗腫痛作HJ。L4瓤苯丙缸媵CLP是健前體激素釋放馓素的拈抗物。L4磷酸旌一苯阿姐腹PP是許多酪氡艘磷酸酶的底物．能使癌自}I胞生K停LT訂瑁1胞周期的S期。然而．苯L；II氨酸還有許多其他衍生物，螄L4溴BP、碘IP、氨叢AP、硝基NP、磺酸基SP、JF氧艇MP、訊礁CP．苯岡氨酸等，它們晌生物學作用如何T值得深入研究。為此．我TLLL】MTT方法控洲R上進10種笨丙鲺艘衍生物對小鼠照包裹癌細胞系B16、人M小細胞忡瘸系A(chǔ)549、I，L耍倉鼠卵瓤細胞系CHO、人FI頸斑細胞系HELA、人JJ5L細|JF【系WISH、人乳|J5}穗細胞系MCF一7、人結(jié)腸蜘細胞系HT29的細胞活TE影響。此外．川HOECHST染也療濁榆刪這LO種苯內(nèi)缸酸衍生物對L述7種細胞系凋口JQ誘導作用，以及J1J‘I7坫纖維采集淳形成的方法檢測IO種苯阿氨酸衍，卜物對J‘謎7種細胞懿蔣形J戊們牡I帆。結(jié)果發(fā)塒．10種苯M缸陵衍乍物塒7種L|『|胞們活性影響、疇導細胞嗣R和抑IIⅫ細L肛成G藩盯ILHQ蕾肆。即．IP、MP這二種銜小物制J．進7種塵|LIL地系活性有{J鏨L蝴井『THOECHST染也站糶表呲占F『】能蜉誘甘I．迷7補細膽汞荊一『,KILT啦叫FP、MP，IPJJ立過濡廿釧胞塒I’‘比L刪細胞涌悱。BP、SP、PP『J抑制I．137種細毗系集薄形成晌FI3LT，說明它們通過抑制細胞‘KK{{}響細胞的}悱。AD、NP刈FILL胞帕IVI較刪．?也據(jù)落J|；成實驗結(jié)果顯求．它們釘抑制圳胞集萍J砝成的作用．1¨此它硅灑過抑制細胞’I長搿響量LI|胞活中1。它們時7種細胞的L，‘性大小“蔗異．AD對CHO細他樂的活儺沒仃膨吶，NP剝HT29、WISH、A549這二種圳『地名的活性仃器I咖。HOECBS染也站噼表L卅它們沒盯滿導細咆捌L’巾口作用。CIP除J’刈MCF7手¨H129州科吲L|1肛系|1CJ活RL仃影IIIT々}．塒蚶占細J地沒訂形I吶。細胞睡蔣形成實驗鼎糶疆_；，JC塒返眄種細胞集藩J侈戚的抑制作川人J’劉_|1它細0Ⅱ．1翻此．它J匝JTDITI0MCF一7目LH～1．29L塒種細胞樂N0牛K從而影響細胞溉惶，CP刈7刊，TTLLL№,系活性泣打彩LLLH．J{兒HOCCHST染包自㈨胞成驥落空驗牲小XF7種圳胞沒柯L塒U作玎1。

簡介：博士學位論文論文題目RAP1GAP對急性髓系白血病細胞生物學特性的影響及作用機理的研究研究生姓名邱婷婷指導教師姓名陳子興專業(yè)名稱內(nèi)科血液病學研究方向白血病的發(fā)病機制論文提交日期2013年5月RAP1GAP對急性髓系白血病細胞生物學特性的影響及作用機理的研究中文摘要IRAP1GAP對急性髓系白血病細胞生物學特性的影響及作用機理的研究中文摘要目的和意義目的和意義RAP1GAP屬于GTP酶激活蛋白（GTPASEACTIVATINGPROTEINSGAPS）家族，在RAP1這種小G蛋白GTPGDP循環(huán)中起到重要作用。鳥苷酸交換蛋白（GUANINENUCLEOTIDEEXCHANGEFACTSGEPS）使RAP1由結(jié)合GDP的非活性狀態(tài)轉(zhuǎn)化為結(jié)合GTP的活性狀態(tài)，而RAP1GTP的內(nèi)在水解酶活性很低，需要GAPS加速GTP的水解，使活化的下游信號及時終止。RAP1RASPROXIMATE1是RAS家族中的一員，通過MEKERK途徑影響細胞的增殖和分化；并調(diào)節(jié)INTEGRINS介導的細胞粘附和遷移，許多研究表明RAP1和腫瘤的關(guān)系密切，其上游調(diào)節(jié)分子也參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。近年來在胰腺癌、甲狀腺癌、鱗狀細胞癌、黑色素瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，RAP1GAP在這些腫瘤中表達下調(diào)，并且和腫瘤細胞的增殖、遷移相關(guān)，RAP1GAP被認為有可能是一潛在的抑癌基因。本實驗室的前期研究發(fā)現(xiàn)RAP1GAP可能在骨髓增生異常綜合征（MYELODYSPLASTICSYNDROMESMDS）發(fā)病機制中起作用。本試驗擬通過構(gòu)建RAP1GAP慢病毒表達載體轉(zhuǎn)染急性髓系白血病細胞株和動物體內(nèi)模型來研究RAP1GAP對白血病細胞生物學特性的影響，探討RAP1GAP在急性髓系白血病（ACUTEMYELOIDLEUKEMIAAML）發(fā)病機制中的作用。方法方法第一部分第一部分實時定量PCR檢測AML患者、非惡性腫瘤血液病患者骨髓單個核細胞（BONEMARROWMONONUCLEARCELLSBMNCS）以及AML細胞株（NB4、HL60、SHI1和U937）RAP1GAPMRNA表達水平，WESTERNBLOT檢測RAP1GAP蛋白表達水平；用含有BAMHI酶切位點的上下游引物將RAP1GAPCDNA克隆至含有黃綠色熒光蛋白（FLAVOVIRENSFLUESCENTPROTEINYFP）的慢病毒表達載體PRRLVENUS，磷酸鈣共沉

簡介：中南大學博士學位論文MMP2在人腦膠質(zhì)瘤中的表達及姜黃素對膠質(zhì)瘤細胞和HUVEC生物學特性的影響姓名鐘喆申請學位級別博士專業(yè)外科學指導教師袁賢瑞20090501中南大學博十學位論文中文摘要及20例高度惡性者IIIIV級；另取術(shù)前無瞳孔散大的腦外傷病人行內(nèi)減壓手術(shù)的新鮮腦組織7例作為對照。用RTPCR方法檢測其MMP2MRNA的表達。另收集這些膠質(zhì)瘤組織和腦組織的石蠟標本，用免疫組織化學檢測MMP2蛋白、VIII因子、KI一67的表達情況。并分析MMP2蛋白的表達與膠質(zhì)瘤的病理分級、膠質(zhì)瘤KI一67標記指數(shù)LI、微血管密度MVD的關(guān)系。用姜黃素干預(yù)膠質(zhì)瘤細胞，檢測姜黃素對膠質(zhì)瘤細胞MMP2表達的影響；再用姜黃素干預(yù)膠質(zhì)瘤細胞和HUVEC，用MTT法檢測膠質(zhì)瘤細胞細胞及HUVEC的增殖活性；結(jié)晶紫染色法檢測HUVEC的粘附及遷移能力。結(jié)果①檢測到MMP2MRNA及其蛋白在人腦膠質(zhì)瘤中存在表達，MMP2蛋白表達主要定位于膠質(zhì)瘤細胞的胞漿，且其表達與腫瘤的惡性程度X23993，尺O01，KI一67嚴O661，尺O01及MVDR0557，尺O01有正相關(guān)性；MMP2在正常腦組織中沒有表達。②膠質(zhì)瘤細胞中存在MMP2MRNA的表達。姜黃素對膠質(zhì)瘤細胞中MMP2MRNA表達有顯著的下調(diào)作用PO01。③加入姜黃素干預(yù)后，膠質(zhì)瘤細胞的增殖活性亦明顯低于對照組尸O01；姜黃素對單純和混合培養(yǎng)的HUVEC增殖活性、遷移能力有明顯影響尸O01。結(jié)論1人腦膠質(zhì)瘤組織和細胞中可檢測出MMP2表達。MMP2的表達與膠質(zhì)瘤惡性程度、KI67及MVD具有正相關(guān)性。提示MMP2在膠質(zhì)瘤的生長、侵襲中發(fā)揮重要作用。2姜黃素可以下調(diào)膠質(zhì)瘤細胞MMP2MRNA的表達。3姜黃素可以明顯抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖活性。4姜黃素可以抑制HUVEC的增殖、粘附、遷徙能力。提示姜黃素還可以抑制血管生成，起到抗腫瘤和抗血管生成的雙重作用。關(guān)鍵詞基質(zhì)金屬蛋白酶一2，膠質(zhì)瘤，血管生成，人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞，姜黃素II

簡介：博士學位論文密級ADRML在肝細胞癌中的生物學作用及其對NFKB活性的影響B(tài)IOLOGICALFUNCTIONOFADRMLINHEPATOCELLULARCARCINOMAANDITSEFFICTNF‘。?！瓵CTIVITYARCLNOMAANDITSELLECTONNKBACTIVI鉀作者姓名楊鑫學科專業(yè)臨床醫(yī)學外科學院系、所湘雅二醫(yī)院指導教師尹邦良教授論文答辯日期竺竺蘭翌答辯委員會主彪盈塹7中南大學二。一二年五月博士學位論文中文摘要摘要目的原發(fā)性肝癌是全球范圍內(nèi)第五大最為常見的惡性腫瘤，并高居全球惡性腫瘤死因第二位。目前全球原發(fā)性肝癌病人中最為常見的病理類型是肝細胞癌，所占比例大約為70％到85％。盡管肝細胞癌已被深入研究多年，其病因及分子生物學機制尚未完全闡明。與此同時，目前針對肝細胞癌的治療手段仍十分有限，肝癌患者的預(yù)后仍不容樂觀。因此，研究探索與HCC發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的分子生物學機制對于提高HCC診斷及治療水平具有十分重大的意義。ADRMLADHESIONREGULATINGMOLECULE1是真核細胞26S蛋白酶體重要的泛素受體之一，并且能與蛋白酶體19S調(diào)節(jié)亞基通過帽狀結(jié)構(gòu)相連結(jié)從而將去泛素化酶UCH37募集至26S蛋白酶體。近年來越來越多的研究表明ADRML在多種惡性腫瘤中呈高表達狀態(tài)，并且可能扮演了類似癌基因的角色。盡管如此，ADRML肝細胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用尚不明了。在本課題中，我們研究了ADRML在肝細胞癌中的表達情況、ADRML在肝癌細胞惡性生物學行為中的功能作用及其可能的下游分子機制，以期為肝細胞癌的診斷、治療提供新的潛在分子靶點。方法采用實時定量RTPCR和免疫組織化學方法檢測肝細胞癌組織和癌旁肝組織ADRMLMRNA和蛋白表達情況，采用RTPCR和WESTERNBLOT檢測三種不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞HEP3B、MHCC97一L和MHCC97HADRMLMRNA和蛋白表達水平；利用短發(fā)夾干擾RNA技術(shù)沉默MHCC97一H細胞ADRML表達水平，并采用MTT、1

簡介：南昌大學碩士學位論文急性淋巴細胞白血病臨床和生物學特征與預(yù)后分析姓名趙廣芬申請學位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學（血液?。┲笇Ы處熽悋?01206摘要7172例ALL患者分別進了TCRV、BCR／ABL、MLL等融合基因檢測。成人ALL病例中，不同基因改變的各組間生存期無明顯差異。兒童ALL中，不同基因改變的各組間生存期有顯著性差異。以融合基因陰性ALL病例OS最高445月，而有MLL基因改變的ALL的OS最低175月。887例成人ALL按MICM預(yù)后分為標危、高危兩組。標危組ALL中位OS175月明顯高于高危組ALL15月。85例兒童ALL按MICM預(yù)后分為低危、標危及高危三組。其中，以低危組ALL的中位OS41月最高，其次為標危組38月，高危組的中位OS22月最低。9兒童組ALL的CR率976％顯著高于成人組ALL862％。兒童組ALL的DFS47％顯著高于成人組1867％。使用LASP組與未使用組CR率無顯著性差異836％VS923％，P0281，但OS有著顯著性差異20月VS135月，P0028。使用CTX組TALL的CR率875％顯著高于未使用CTX組333％。10成人ALL組DFS與兒童組相比有著顯著性差異P0000，成人組復發(fā)率60％顯著高于兒童組157％，其中CNSL復發(fā)有5例成人組3例，兒童組2例。結(jié)論1成人ALL較兒童ALL預(yù)后差，兩者問OS、DFS存在顯著性差異，復發(fā)率高于兒童組。2成人ALL外周血WBC顯著高于兒童組。ALL外周血白細胞與生存期呈負相關(guān)。3檢測成人ALL病例LDH、融合基因改變，對判斷療效與監(jiān)測病情有重要的臨床價值。4ALL免疫分型中OS以T型最低，其次為B型，前B型OS最高。5FAB形態(tài)學分類對ALL患者預(yù)后臨床指導意義有限。6ALL變異性染色體以PH染色體陽性最多見。成人PH染色體陽性的ALL預(yù)后較正常核型差。染色體核型對ALL的預(yù)后判斷具有重要的臨床意義。7MICM危險度分級在判斷成人與兒童ALL預(yù)后具有較好的臨床價值。8加用LASP可顯著提高ALL患者OS；加用CTX可能有助于提高TALL

簡介：中圖分類號盟3墨UDC610博士學位論文學校代碼Q533PTEN甲基化在骨肉瘤發(fā)生中的作用及5AZACDR去甲基化對其MG63細胞生物學行為的影響EFFECTONPTENMETHYLATIONINOSTEOSARCOMAOCCURRINGANDINFLUENCEONCYTOLOGYBEHAVIOROFCELLLINEMG一63DEMETHYLATEDBY5AZACDR作者姓名羅一學科專業(yè)臨床醫(yī)學研究方向外科學學院系、所湘雅醫(yī)院指導教師鄧展生教授論文答辯日期加，3，F(xiàn)、砷答辯委員會主席趟一中南大學2013年5月博士學位論文中文摘要中文摘要骨肉瘤OSTEOSARCOMA是起源于間胚葉組織的最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤，其生物學性狀極為復雜，有關(guān)其發(fā)病機理仍未完全清楚，診斷和治療的方法依然有限?，F(xiàn)代醫(yī)學認為，腫瘤的發(fā)生是一個多階段、多因素和多基因綜合作用的過程，其生物學本質(zhì)是細胞內(nèi)遺傳調(diào)控和表觀遺傳調(diào)控的紊亂與失調(diào)。近年來以不基于基因序列改變?yōu)樘卣鞯谋碛^遺傳調(diào)控在腫瘤發(fā)生中的作用各受關(guān)注，其主要表現(xiàn)形式是DNA甲基化，它可以直接導致相關(guān)基因的表觀遺傳轉(zhuǎn)錄沉默?；駾NA甲基化有助于腫瘤發(fā)生的早期預(yù)測及預(yù)后評估。癌基因的低甲基化、抑癌基因的高甲基化和整體基因組的低甲基化是DNA甲基化失衡狀態(tài)的三種經(jīng)典現(xiàn)象，其中尤以抑癌基因的高甲基化與腫瘤的關(guān)系最為密切，它是抑癌基因轉(zhuǎn)錄失活的主要途徑，甚至可能成為調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的唯一的機制。PTEN是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第一個具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因，是抑癌基因家族中繼P53發(fā)現(xiàn)后在人類腫瘤中突變及缺失率最高的又一明星分子。PTEN具有抑制腫瘤生長、促進細胞凋亡及抑制血管生成等作用，能負性調(diào)控P13K／AKT及抑制MAPK的信號轉(zhuǎn)導通路對腫瘤產(chǎn)生影響。已有研究表明在很多人類惡性腫瘤中都存在PTEN的異常甲基化，但關(guān)于其與骨肉瘤的關(guān)系卻鮮見報道。了解骨肉瘤中PTEN的甲基化狀態(tài)，對尋找骨肉瘤早期診斷可能的分子標志物具有重要的臨床意義。II

簡介：目的蛋白質(zhì)糖基化是一種重要的翻譯后修飾，它參與和調(diào)控生物體的許多生命活動。隨著蛋白質(zhì)組學技術(shù)的不斷發(fā)展，蛋白質(zhì)糖基化研究越來越受到廣泛的重視。CD147是高度糖基化的跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族的成員。CD147是細胞表面多功能糖蛋白，廣泛表達于各種細胞中，如淋巴母細胞，炎癥細胞，特別在腫瘤細胞高表達。CD147主要通過誘導基質(zhì)金屬蛋白酶活性參與組織重構(gòu)，參與許多生理和病理過程，包括精子發(fā)生、受精、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)形成和發(fā)育、HIV感染和腫瘤轉(zhuǎn)移。CD147由2個胞外IG結(jié)構(gòu)域，1個跨膜結(jié)構(gòu)域和1個胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域組成。從CD147N端起，第一個胞外IG結(jié)構(gòu)域與MMPS誘導活性及CD147自身寡聚有關(guān)；第二個胞外IG結(jié)構(gòu)域與窖蛋白（CAVEOLIN1，CAV1）存在相互作用。由于N糖基化不同，CD147同時表現(xiàn)為高糖型CD147（HGCD147，分子量4066KDA）和低糖型CD147（LGCD147，分子量32KDA）。有文獻報道，N糖基化對CD147的誘導活性起促進作用，但CD147糖基化的功能尚有待深入研究。本文基于本實驗室已構(gòu)建的野生型CD147真核表達載體，利用快速PCR定點突變的方法，構(gòu)建CD147糖基化位點突變的真核表達載體，并將其穩(wěn)定表達于小鼠肝正常細胞IAR20中，觀察CD147的糖基化對細胞的生物學功能的影響。方法1利用快速PCR定點突變的方法，構(gòu)建CD147糖基化位點突變PCDNA31表達載體。2利用脂質(zhì)體將野生型CD147及其糖基化位點突變體表達載體轉(zhuǎn)染至小鼠肝正常細胞IAR20細胞上，以空表達載體做對照，經(jīng)G418篩選及RTPCR和WESTERNBLOT分析，獲得野生型CD147及其糖基化位點突變體穩(wěn)定表達株。3利用MTT法檢測穩(wěn)定表達野生型CD147及其糖基化位點突變體對IAR20細胞增殖能力的影響；利用體外基質(zhì)侵襲實驗，觀察檢測穩(wěn)定表達野生型CD147及其糖基化位點突變體對IAR20細胞遷移和侵襲能力的影響。結(jié)果1、限制性內(nèi)切酶酶切和DNA測序鑒定表明，成功構(gòu)建小鼠CD147糖基化位點突變真核表達載體PCDNA31CD147（N154Q）和PCDNA31CD147（N44，154Q）。2、WESTERNBLOT和RTPCR結(jié)果表明，PCDNA31CD147WT，PCDNA31CD147N154Q和PCDNA31CD147N44，190Q在小鼠肝正常細胞IAR20細胞中穩(wěn)定表達野生型CD147和糖基化位點突變體CD147N154Q的分子量分別為44KDA和45KDA，糖基化位點突變體CD147N44，190Q表達為兩條帶，分子量分別為37KDA和42KDA。3、與轉(zhuǎn)染空載體和未轉(zhuǎn)染細胞相比，穩(wěn)定表達野生型CD147和糖基化位點突變體CD147N154Q的IAR20細胞增殖能力和遷移能力顯著增強（P005）。4、與轉(zhuǎn)染空載體和未轉(zhuǎn)染細胞相比，穩(wěn)定表達野生型CD147、糖基化位點突變體CD147（N154Q）和CD147（N44，190Q）均不增加IAR20細胞侵襲能力。結(jié)論CD147的穩(wěn)定表達促進小鼠肝正常細胞IAR20細胞的增殖和遷移，而CD147的這種促進作用與CD147糖基化程度有關(guān)。

簡介：復旦大學碩士學位論文MIR一21與神經(jīng)母細胞瘤生物學特性的相關(guān)性研究及意義分析THESIGNIFICANCEANDCORRELATIONOFMIERORNA一21WITHBIOLOGICALFEATURESOFNEUROBLASTOMA碩士研究生周耀東學科及專業(yè)兒科學外科導師鄭珊教授導師組成員李凱副教授陳蓮副教授2011年4月10日MIR一21與神經(jīng)母細胞瘤生物學特性的相關(guān)性研究及意義分析碩士論文英漢詞匯對照MIR一21與神經(jīng)母細胞瘤生物學特性的相關(guān)性研究及意義分析常用縮略詞匯英漢對照表英文縮寫NBPCRMIRNARTUHFHFISHHE英文全稱中文全稱NEUROBLASTOMA神經(jīng)母細胞瘤POLYMERASEEHAINREAETION聚合酶鏈式反應(yīng)MIERORNA微小RNAREVERSETRANSERIPTION逆轉(zhuǎn)錄UN幾VORABLEHISTOLOGY預(yù)后不良型FAVORABLEHISTOLOGY預(yù)后良好型NUORESEENEEINSITUHYBRIDIZATION熒光原位免疫雜交技術(shù)HEMATOXYLINANDEOSINSTAINHE染色

簡介：上海交通大學碩士學位論文雷帕霉素對人骨肉瘤細胞及干細胞中雷帕霉素靶蛋白傳導通路的生物學作用及意義碩士研究生劉沛宜學號1107529673導師張偉濱教授申請學位醫(yī)學碩士學科外科學培養(yǎng)單位上海市傷骨科研究所授予學位單位上海交通大學DISSERTATIONSUBMITTEDTOSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITYFTHEDEGREEOFMASTERTHEOSTEOSARCOMACELLTHEOSTEOSARCOMASTEMCELLCYTOBIOLOGICALBEHAVIINHIBITEDBYRAPAMYCINTHROUGHTHEMAMMALIANTARGETOFRAPAMYCINSIGNALINGPATHWAYCIDATELIUPEIYISTUDENTID1107529673SUPERVISPROFZHANGWEIBINACADEMICDEGREEAPPLIEDFMASTEROFMEDICALSPECIALITYTHOPEDICSURGERYAFFILIATIONSHANGHAIINSTITUTEOFTHOPEDICSTRAUMATOLOGYDEGREECONFERRINGINSTITUTIONSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY

簡介：實驗?zāi)康姆蚀蠹毎饕嬖谟谡衬ず徒Y(jié)締組織中借助于其表面表達的IGE的高親合力受體FCERI與抗變應(yīng)原的特異性抗體IGE的交聯(lián)形成IGEFCΕRI復合物進而引發(fā)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)。肥大細胞胞漿中存在大量顆粒其內(nèi)儲存組胺等生物介質(zhì)活化的肥大細胞也可新合成細胞因子如TNFΑ、IL6和IL13等生物介質(zhì)。為此本研究擬利用ELF1SIRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)和體外TSA刺激等方式探討轉(zhuǎn)錄因子ELF1和組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA對小鼠骨髓來源的肥大細胞BMMC表面FCΕRI基因表達及其生物學功能的調(diào)控作用機制。進而為肥大細胞相關(guān)的變態(tài)反應(yīng)的研究提供新的實驗依據(jù)。實驗方法一、小鼠BMMC的制備BALBC小鼠雌性68周齡。鈍性分離小鼠雙側(cè)股骨用1ML注射器吸取少量RPMI1640培養(yǎng)液沖洗骨髓內(nèi)細胞至無菌平皿中。收集液體至10ML離心管中1000RPM4℃離心5MIN棄上清。用10MLBMMC培養(yǎng)液重懸細胞移至10CM無菌培養(yǎng)皿37℃培養(yǎng)。二、ELF1SIRNA和ELF1表達質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染按照MOUSEMACROPHAGENUCLEOFECT試劑盒說明操作選擇Y001程序分別將20ΜMELF1SIRNA、CONTROLSIRNA和FITC標記的寡核苷酸經(jīng)電轉(zhuǎn)至小鼠1106BMMC中37℃分別培養(yǎng)24H待試劑盒轉(zhuǎn)染效率、ELF1MRNA表達和FCΕRIΑ、Β、Γ鏈MRNA表達檢測和48H待ELF1蛋白表達檢測。同法將1ΜGPGVB2ΑNN06或PGL3BASIC分別與25NGPRLCMV內(nèi)參和20ΜMELF1SIRNACONTROLSIRNA共同電轉(zhuǎn)染至1106BMMC中；另將5ΜGPGVB2ΑNN06或PGL3BASIC分別與25NGPRLCMV內(nèi)參和10ΜGPCR31ELF1或?qū)φ誔CR31經(jīng)BIORADGENEPULSERⅡ電轉(zhuǎn)染至BMMC中37℃孵育24H后收集BMMC待FCΕRIΑ鏈啟動子熒光素酶活性的分析。三、ELF1表達鑒定收集24HELF1及CONTROLSIRNA核轉(zhuǎn)染的BMMC按照RNEASYRMICRO試劑盒的說明提取細胞總RNA利用HIGHCAPACITYCDNAREVERSETRANION試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成CDNA第一鏈利用TAQMANUNIVERSALPCRMASTERMIX和7500REALTIMEPCR儀進行REALTIMEPCR分析靶基因ELF1MRNA表達。ELF1引物為MM00468217_M1。另收集48HELF1及CONTROLSIRNA轉(zhuǎn)染的BMMC裂解細胞后經(jīng)75％SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳電轉(zhuǎn)膜15H后用ANTIELF1AB和ANTIACTINAB作為第一抗體4℃過夜孵育。洗膜后用ALEXAFLU680GOATANTIRABBITIGG和IRDYE800GOATANTIMOUSEIGG分別作為抗ELF1和ACTIN的第二抗體進行孵育1H洗膜后用ODYSSEYINFRAREDIMAGINGSYSTEM檢測ELF1蛋白的表達。四、BMMCFCΕRIΑ鏈啟動子活性檢測收集轉(zhuǎn)染后的BMMC按照DUALLUCIFERASEASSAY試劑盒說明經(jīng)MICROLUMATPLUS分析FCΕRLΑ鏈啟動子熒光素酶活性。五、FCΕRIΑ、Β和Γ鏈MRNA表達水平的檢測收集ELF1SIRNACONTROLSIRNA轉(zhuǎn)染后的BMMC。利用RNEASYMICROKIT提取總RNA利用HIGHCAPACITYCDNAREVERSETRANIONKIT合成CDNA第一鏈利用TAQMANUNIVERSALPCRMASTERMIX和7500REALTIMEPCRSYSTEMWITHTAQMANGENEEXPRESSION進行REALTIMEPCR分析靶基因Α鏈MM00438867_M1、Β鏈MM00442780_ML和Γ鏈MM00438869_G1MRNA表達水平。六、PU1結(jié)合FCΕRIΑ鏈啟動子能力檢測收集ELF1SIRNACONTROLSIRNA轉(zhuǎn)染后的BMMC經(jīng)超聲破碎細胞沉淀染色質(zhì)DNA。再分別與ANTIPU1GOATAB和GOATIGG4℃孵育1H后經(jīng)7500REALTIMEPCRSYSTEM分析PU1結(jié)合FCΕRIΑ鏈啟動子的能力。所用引物為小鼠FCΕRIΑ鏈啟動子821正義鏈82565’GGCATAGCTGATGAGTTAACCAGATAC3’反義鏈1225’TATGGETTCGAAAATAGGCTTGA3’和TAQMANPROBE51335’FAMCAGAAGACATTTCCTTCTCMGB3’。七、TSA體外刺激BMMC調(diào)制正常小鼠BMMC濃度至1106ML經(jīng)0210或50NMTSA37℃孵育24H待BMMCFCΕRI表達和功能檢測或48H待BMMC凋亡檢測。八、BMMC表面FCΕRI表達檢測收集ELF1SIRNA對照SIRNA轉(zhuǎn)染的BMMC或TSA體外刺激的BMMC經(jīng)242G阻斷細胞表面FC受體后再與PEANTIFCΕRIΑ鏈抗體4℃避光孵育1HPBS洗細胞2遍用FACSCALIBUR流式細胞儀分析細胞表面FCΕRI表達。九、BMMC凋亡檢測收集TSA體外刺激48H的BMMC經(jīng)5ΜGMLPROPIDIUMIODIDEPI和ANNEXINVFITCBDBIOSCIENCES室溫染色15MIN后FACSCALIBUR流式細胞儀分析BMMC的凋亡情況。十、肥大細胞脫顆粒能力檢測收集不同濃度TSA體外刺激的BMMC經(jīng)1ΜGMLIGE4℃致敏1H重懸于TYRODE’S緩沖液中1106ML再經(jīng)1ΜGMLANTIIGE37℃刺激45MIN后收集上清液。加入PNITROPHENYLNACETYLΒDGLUCOPYRANOSIDE作為底物37℃顯色90MIN后經(jīng)酶標儀測定OD405值ODSAMPLE。IGE致敏細胞經(jīng)2％TRITON處理的培養(yǎng)上清液的OD值作為細胞顆粒的最大釋放量ODTOTAL。IGE致敏細胞經(jīng)TYPRODE’S緩沖液孵育的上清液的OD值為ODBASEΒ氨基己糖苷酶的釋放量％ODSAMPLEODBASEODTOTALODBASW100％。十一、BMMC分泌合成IL6檢測TSA體外刺激的BMMC經(jīng)1ΜGMLIGEANTIIGE體外刺激1H后提取細胞總RNA反轉(zhuǎn)錄成CDNA經(jīng)REALTIMEPCR檢測IL6MRNA水平；經(jīng)體外刺激3H或6H后收集培養(yǎng)上清按照IL6ELISAKIT說明檢測上清中IL6分泌水平。十二、BMMCIL6啟動子上組蛋白乙酰化水平檢測TSA體外刺激的BMMC經(jīng)1ΜGMLIGEANTIIGE體外刺激30MIN后超聲破碎細胞沉淀染色質(zhì)DNA。再與ANTIACETYLHISTONEH3RABBITIGG、ANTIACETYLHISTONEH4RABBITANTISERUM或RABBITIGG4℃孵育1H后經(jīng)7500REALTIMEPCRSYSTEMAPPLIEDBIOSYSTEMS分析乙?；M蛋白H3和H4結(jié)合IL6啟動子的能力。所用引物為小鼠IL6啟動子849正義鏈IL684F5’CCCATGAGTCTCAAAATTAGAGAGTTG3’反義鏈IL69R5’CAGAGCAGAATGAGCTACAGACATC3’和TAQMANPROBEIL656P5’CTCCTAATAAATATGAGACTGGG3’。結(jié)論1、小鼠巨噬細胞核轉(zhuǎn)染試劑盒AMAXA同樣適用于小鼠BMMC的核酸轉(zhuǎn)染。2、ELF1SIRNA可特異性降低小鼠BMMC的ELF1表達。3、ELF1通過抑制PU1與Α鏈啟動子之間的結(jié)合抑制小鼠BMMCFCΕRIΑ鏈啟動子的活性和轉(zhuǎn)錄。4、ELF1可抑制小鼠BMMCFCΕRIΑ鏈MRNA的表達但對Β和Γ鏈的轉(zhuǎn)錄未見有意義的影響。5、ELF1單獨作用尚不能影響小鼠BMMCFCΕRI的表面表達。6、TSA以劑量依賴方式抑制FCΕRI介導的BMMC活化。7、50NMTSA通過誘導細胞凋亡降低小鼠BMMCFCΕRI的表達抑制FCΕRI介導的BMMC脫顆粒和IL6合成分泌。8、TSA增強小鼠FCΕRI介導活化的BMMCIL6啟動子組蛋白乙?；乃?。

簡介：獨創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含未獲得逵；墊邀直墓他益要掛別岜明毆奎攔亙窒≥或其他教育機構(gòu)的學位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名走導簽字日期加，夠年石月IO日學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學位論文作者完全了解桂林醫(yī)學院有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)桂林醫(yī)學院可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同時授權(quán)中國學術(shù)期刊光盤版電子雜志社、中國科學技術(shù)信息研究所將本學位論文收錄到中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫、中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。保密的學位論文在解密后適用本授權(quán)書學位論文作者簽名越導導師簽字確簽字日期ⅥY年6月LON簽字日期Ⅵ7乒年多月F／日鞣花酸對骨髓瘤SP2／O細胞的生物學作用中文摘要目的本研究課題以小鼠骨髓瘤SP2／O細胞株作為研究對象，運用了體外細胞培養(yǎng)和分子生物學技術(shù)等科研方法，探索鞣花酸對多發(fā)性骨髓瘤細胞增殖、凋亡和細胞周期的影響并檢測與癌細胞發(fā)生、發(fā)展密切關(guān)聯(lián)的腫瘤相關(guān)分子COX一2的表達情況。通過分析鞣花酸對小鼠骨髓瘤SP2／O細胞的生物學作用，為臨床手術(shù)治療M肋，有效清除病灶內(nèi)骨髓瘤細胞提供實驗依據(jù)。方法體外培養(yǎng)小鼠骨髓瘤SP2／O細胞，設(shè)立3個階梯濃度藥物組和1個對照組，對照組不用鞣花酸干預(yù)，實驗組分別加入20，40和60PG／ML鞣花酸干預(yù)。1、用倒置顯微鏡觀察，不同濃度鞣花酸處理的實驗組和對照組骨髓瘤SP2／O細胞48H后的細胞形態(tài)學變化并拍照。2、用20，40和60“G／ML鞣花酸處理骨髓瘤SP2／O細胞48H后，采用HOECHST33258染色法染色，然后在倒置熒光顯微鏡下對比實驗組與對照組細胞的凋亡情況并拍照。3、通過細胞增殖實驗婀T法檢測以上濃度鞣花酸處理48H后的SP2／O細胞的細胞增殖情況及細胞活性。4、收集以上4組處理24H后的SP2／O細胞，用流式細胞儀檢測鞣花酸對骨髓瘤SP2／O細胞早期凋亡的影響。5、用流式細胞儀測定，以上濃度藥物處理48H后的SP2／O細胞各個細胞周期中的細胞比率。6、通過WESTERNBLOTTING技術(shù)檢測腫瘤增值與凋亡相關(guān)蛋白COX一2在不同濃度藥物處理后的SP2／O細胞中表達量的變化。結(jié)果1、不同濃度藥物處理48H后的

簡介：點擊查看更多骨髓內(nèi)皮祖細胞的生物學特性及其對神經(jīng)膠質(zhì)瘤的作用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：【研究背景】增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是臨床上常見的兩種病理性瘢痕，常引起局部不同程度的畸形和功能障礙。由于人們對增生性瘢痕和瘢痕疙瘩形成的原因、機理認識不足，雖然治療方案較多，臨床療效還不盡如人意。迄今還沒有一種藥物或技術(shù)能夠確保成功預(yù)防和治療增生性瘢痕和瘢痕疙瘩。姜黃素是從姜科姜黃屬多年生的草本植物姜黃中提取的天然色素，為姜黃的主要活性成分。研究提示姜黃素可能是一種抗纖維化制劑。但是，姜黃素對生物學特性異常的增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纖維細胞有無抑制作用，機理如何，能否用于治療增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，尚未見報道?！狙芯磕康摹?研究姜黃素濃度變化對體外培養(yǎng)的增生性瘢痕成纖維細胞增殖及膠原合成的影響，初步探討其治療增生性瘢痕的作用機制。2觀察在體外培養(yǎng)的瘢痕疙瘩成纖維細胞給予不同濃度的姜黃素處理后對細胞增殖及膠原合成的影響，初步分析其可能的作用機制。【研究內(nèi)容】1姜黃素對體外培養(yǎng)的增生性瘢痕成纖維細胞的生物學影響；2姜黃素對體外培養(yǎng)的瘢痕疙瘩成纖維細胞的生物學影響?！狙芯拷Y(jié)果】1姜黃素對體外培養(yǎng)的增生性瘢痕成纖維細胞的增殖有明顯的抑制作用，并能明顯誘導增生性瘢痕成纖維細胞凋亡；同時可以抑制凋亡抑制基因BCL2的表達；2姜黃素處理后可明顯抑制增生性瘢痕成纖維細胞Ⅰ、Ⅲ型前膠原MRNA的表達；3姜黃素可明顯抑制瘢痕疙瘩成纖維細胞的增殖，并有效抑制細胞膠原的合成；4姜黃素可明顯抑制瘢痕疙瘩成纖維細胞Ⅰ、Ⅲ型前膠原MRNA的表達，同時可以抑制結(jié)締組織生長因子的表達。【研究結(jié)論】1姜黃素具有體外抗增生性瘢痕的作用，并且具有促進細胞凋亡的作用，其誘導細胞凋亡的作用機制可能與抑制凋亡抑制基因BCL2有關(guān)；2姜黃素具有體外抗瘢痕疙瘩的作用其作用機制可能與姜黃素抑制結(jié)締組織生長因子在瘢痕疙瘩成纖維細胞的表達有關(guān)。