簡介：目的本課題篩選獲得高沉默效率的酪氨酸磷酸酶SIGMAPROTEINTYROSINEPHOSPHATASESIGMA，PTPΣ特異性小干擾RNA（SMALLINTERFERENCERNA，SIRNA），應用第三代慢病毒載體系統(tǒng)將其導入原代培養(yǎng)大鼠大腦皮層神經(jīng)元及脊髓損傷局部，阻斷硫酸軟骨素蛋白多糖CHONDROITINSULFATEPROTEOGLYCANS，CSPGS受體PTPΣ的表達，消除CSPGS對軸突再生的抑制作用，觀察PTPΣ基因沉默對神經(jīng)元軸突再生及脊髓損傷后神經(jīng)功能的修復效果。方法1SIRNA在線設計工具SIRNAWIZARD設計5條針對PTPΣ基因編碼序列CODINGSEQUENCE，CDS的SIRNA，通過雙質(zhì)粒轉(zhuǎn)染增強型綠色熒光蛋白（ENHANCEDGREENFLUESCENTPROTEIN，EGFP）報告系統(tǒng)初步檢測其抑制效率。選取最高抑制效率SIRNA，構(gòu)建第三代慢病毒載體，并用其將高抑制活性SIRNA導入原代培養(yǎng)神經(jīng)元及脊髓損傷局部，QRTPCR及WESTERNBLOT技術(shù)檢測PTPΣ基因沉默的精確效率。2WISTAR大鼠大腦皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)，并將其接種于包被多聚賴氨酸POLYLLYSINE，PLL、CSPGS及層粘連蛋白（LAMININ，LN）的玻片，高抑制活性PTPΣ特異性SIRNA慢病毒載體感染神經(jīng)元，感染后4天免疫細胞化學染色標記神經(jīng)元軸突及CSPGS，并利用IMAGEPROPLUS60軟件測量神經(jīng)元軸突長度、數(shù)量及穿越CSPGS的百分比，探索PTPΣ沉默神經(jīng)元在CSPGS基質(zhì)上的再生及穿越能力。3體內(nèi)實驗采用10周齡雌性WISTAR大鼠，利用NYUIMPACTMODELⅡ打擊器制備脊髓胸10T10損傷模型。隨機分為四組對照組DMEM、PTPΣCONTROL組、PTPΣSCRAMBLEDPTPΣSCR組、PTPΣRNAI組，造模后立即行各組相應的局部注射。局部注射后1D、1W、2W、3W、4W、5W、6W行大鼠后肢功能行為學評分BBB評分，并于6W行大鼠腳印學分析，以觀察大鼠脊髓損傷后運動功能恢復。局部注射6W后行體感誘發(fā)電位SOMATOSENSYEVOKEDPOTENTIALS，SSEPS檢測，以評估脊髓損傷后感覺功能修復。局部注射后6W行冰凍切片免疫熒光組織化學檢測神經(jīng)絲蛋白NEUROFILAMENTPROTEIN200，NF200、突觸素SYNAPTOPHYSIN及膠質(zhì)原纖維酸性蛋白（GLIALFIBRILLARYACIDICPROTEIN，GFAP），以觀察脊髓損傷局部軸突再生、突觸形成及膠質(zhì)瘢痕形成情況。結(jié)果1PTPΣSIRNA慢病毒載體成功感染大鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞，并能有效沉默PTPΣ基因MRNAP＜0001及蛋白質(zhì)P＜0001的表達脊髓損傷局部注射PTPΣSIRNA慢病毒載體亦可以有效沉默PTPΣ基因MRNAP＜0001及蛋白質(zhì)P＜0001的表達。2在CSPGS基質(zhì)上，PTPΣRNAI組神經(jīng)元軸突再生長度明顯較長，且差異具有統(tǒng)計學意義P＜0001同時，PTPΣRNAI組神經(jīng)元軸突表現(xiàn)出更強的穿越CSPGS的能力，且差異具有統(tǒng)計學意義P＜0001。3脊髓損傷后6W行免疫組織化學染色。NF200染色結(jié)果表明，PTPΣRNAI組脊髓損傷周圍軸突再生明顯增強，差異具有統(tǒng)計學意義P＜0001突觸素染色結(jié)果顯示，PTPΣRNAI組脊髓損傷周圍突觸形成明顯增強，差異具有統(tǒng)計學意義P＜0001而GFAP染色結(jié)果顯示，各組膠質(zhì)瘢痕形成并無統(tǒng)計學差異P＞005。4脊髓損傷后1D、1W各組間大鼠BBB評分差異無統(tǒng)計學意義P＞005，損傷后2W起各時間點評分PTPΣRNAI組均明顯優(yōu)于其他各組P＜0001脊髓損傷后6W腳印學分析顯示，PTPΣRNAI組大鼠在步長P＜0001、后肢旋轉(zhuǎn)角度P＜0001及后足間距離P＜0001均呈現(xiàn)有意義的改善6W體感誘發(fā)電位檢測顯示，PTPΣRNAI組體感誘發(fā)電位P1及N1波的潛伏期明顯縮短P＜0001，波幅明顯增大P＜0001。結(jié)論慢病毒介導的SIRNA能有效感染大鼠大腦皮層神經(jīng)元，并能沉默PTPΣ基因表達，有效減輕CSPGS的軸突抑制作用同時，局部注射PTPΣRNAI慢病毒載體可有效促進脊髓損傷后運動和感覺功能的恢復，免疫組織化學染色亦顯示增強的軸突再生及突觸形成，而不加重膠質(zhì)瘢痕的形成。課題為PTPΣRNAI修復脊髓損傷提供了理論基礎和實驗依據(jù)。

簡介：分類號R73362學校代碼學校代碼10392學科專業(yè)代碼學科專業(yè)代碼105019學號號2111003534福建醫(yī)科大學碩士研究生畢業(yè)論文慢病毒介導慢病毒介導MIL12轉(zhuǎn)染大鼠轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞抑制骨髓間充質(zhì)干細胞抑制鼠結(jié)腸癌鼠結(jié)腸癌CT26瘤體的生長瘤體的生長LENTIVIRUSMEDIATEDMIL12FUSIONGENETRANSFECTIONRATBMSCSINHIBITSCT26TUMGROWTHINRATS學位類型型學術(shù)型學術(shù)型醫(yī)學碩士醫(yī)學碩士所在學院院福總臨床醫(yī)學院?？偱R床醫(yī)學院研究生生何楊何楊學科、專科、專業(yè)業(yè)外科學普通普通外科導師師涂小煌涂小煌教授教授研究起止日期研究起止日期2013年02月至月至2013年12月答辯日期期2014年05月12日二○一○一四年五月福建醫(yī)科大學2011級碩士研究生畢業(yè)論文目錄中文摘要03英文摘要04縮略詞表05前言06第一部分慢病毒介導MIL12轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的培育中文摘要11材料與方法12結(jié)果20第二部分穩(wěn)轉(zhuǎn)株細胞移植鼠結(jié)腸癌細胞株CT26瘤體的生長中文摘要24材料與方法25結(jié)果28討論29全文結(jié)論33參考文獻34綜述結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的外科手術(shù)治療現(xiàn)狀38參考文獻43致謝46附錄碩士在讀期間完成和發(fā)表的文章47

簡介：中國醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學位論文是我本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C構(gòu)的學位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關(guān)責任。論文作者簽名幽日期竺蘭塑中國醫(yī)科大學研究生學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國醫(yī)科大學有關(guān)保護知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬中國醫(yī)科大學。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學，且導師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學。學校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名指導教師簽名日期中文論著摘要輪狀病毒感染性腹瀉患兒血清中IL17及其它CD4T細胞相關(guān)細胞因子水平檢測刖罱輪狀病毒ROTAVIRUS，簡稱RV感染是波及全球的一種常見疾病，常發(fā)生在嬰幼兒，也可感染成人，主要引起輪狀病毒腸炎ROTAVIRUSENTERITIS，因發(fā)病高峰在秋季，故又名“秋季腹瀉“。在發(fā)展中國家，5歲以下住院的腹瀉患兒中有20％～50％是輪狀病毒腸炎患者，每年導致約60萬兒童死亡?？共《靖腥久庖咧饕且约毎庖邽橹?。初始CD4T細胞接受抗原刺激后，在不同的條件下可分化為不同的T細胞亞群，執(zhí)行不同的生物學功能。在TGFB和IL6的共同誘導下分化為THL7，分泌IL17和IL6，參與炎癥反應和介導自身免疫性疾病發(fā)生。在IL012和IFNY誘導下分化為THL細胞，分泌IFNY，促進感染致炎癥性應答；在IL4的誘導下分化為TH2細胞，分泌IL4和IL10，抑制炎癥性應答；TGFP存在條件下TREG活化，進一步分泌TGFP、IL17、IL6及IL10等效應因子參與抑制性免疫應答。本研究對感染早期輪狀病毒腹瀉患兒和正常對照兒童血清中的細胞因子IL17、IL6、刪小IL4和TGFP水平進行了檢測，以探討IL17及其它CD4T細胞相關(guān)細胞因子在兒童輪狀病毒感染性腹瀉疾病早期的變化及可能的免疫病理學意義。材料和方法標本取自2010年2月2010年7月期間沈陽市兒童醫(yī)院消化內(nèi)科住院患兒，其中實驗組56例樣本均為消化內(nèi)科腸道輪狀病毒感染性腹瀉疾病兒童，對照組30例為同期兒?？频恼ｓw檢兒童，收集兩組兒童的血清，采用ELISA試劑盒檢測血清中的細胞因子IL17、IL6、IFN7、IL4和TGFP的含量。利用SSPSL60軟件包進行數(shù)據(jù)處理，試驗數(shù)據(jù)以Z士S表示；二組數(shù)據(jù)比較用T檢驗，相關(guān)

簡介：目的探討急性高血容量性血液稀釋聯(lián)合控制性降壓對老年患者術(shù)后認知功能的影響。材料與方法選擇骨科擇期手術(shù)患者50例年齡60～75歲ASA分級Ⅰ～Ⅱ隨機分為血液稀釋聯(lián)合控制性降壓組A組和對照組B組每組25例。麻醉誘導后A組行血液稀釋聯(lián)合控制性降壓快速輸注6％羥乙基淀粉30～50MLMIN輸入總量EBVHOHFHFEBV為估計全身血容量以70MLKG估計HO為初始紅細胞壓積HF為預期達到的紅細胞壓積為30％同時性控制性降壓靜脈輸注硝普鈉起始速度為1ΜGKG1MIN1調(diào)節(jié)MAP于60～75MMHG之間B組不予血液稀釋聯(lián)合控制性降壓。分別于術(shù)前1天和術(shù)后3天對患者進行神經(jīng)功能評分MMSE于麻醉誘導前T0、手術(shù)結(jié)束T1、術(shù)后6～8HT23個時點采靜脈血1ML測量血清中S100P的蛋白含量評價術(shù)后認知功能的發(fā)生。實驗結(jié)果兩組患者一般資料比較無差異兩組患者術(shù)前1D、術(shù)后1D、術(shù)后3DMMSE評分比較無差異P＞005術(shù)前、術(shù)后、術(shù)后4～6小時血清S100Β蛋白含量無差異P＞005。結(jié)論急性高血容量血液稀釋聯(lián)合控制性降壓不增加老年患者術(shù)后認知功能障礙的發(fā)生。

簡介：點擊查看更多病毒氣溶膠研究模型的建立.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：學位論文腦轉(zhuǎn)移癌全腦放療相關(guān)認知功能損害腦轉(zhuǎn)移癌全腦放療相關(guān)認知功能損害COGNITIVEIMPAIRMENTASSOCIATEDWITHWHOLEBRAINRADIOTHERAPYFBRAINMETASTASES2014年3月分類號密級UDC編號指導教師姓名陳振東申請學位級別碩士專業(yè)名稱腫瘤學提交論文日期201403論文答辯日期201405學位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學答辯委員會主席評閱人

簡介：目的聚合酶鏈反應偶聯(lián)印跡雜交和酶聯(lián)放大技術(shù)PCRBHEL的建立并應用該技術(shù)檢測血液傳染性病毒。方法綜合聚合酶鏈反應的高敏感性及印跡雜交和酶聯(lián)免疫技術(shù)的高特異性建立起PCRBHEL技術(shù)，然后應用該技術(shù)對酶聯(lián)免疫吸附實驗ELISA檢測的174例血清標本其中129例抗HCV陽性，45例抗HCV陰性的HCVRNA進行檢測，并將該技術(shù)與逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應RTPCR及熒光定量聚合酶鏈反應FQPCRHCVRNA的檢測結(jié)果進行比較，以確定該技術(shù)在檢測血液傳染性病毒中的優(yōu)越性高特異性、高敏感性。結(jié)果129例抗HCV陽性標本經(jīng)PCRBHEL和RTPCR檢測HCVRNA的檢出率分別為7829％101129和6202％80129；45例抗HCV陰性標本經(jīng)PCRBHEL和RTPCR檢測HCVRNA的檢出率分別為667％345和222％145，兩種檢測方法的差異有統(tǒng)計學意義001＜P＜005，即PCRBHEL對HCVRNA的檢出率高于RTPCR。91例抗HCV陽性標本經(jīng)PCRBHEL和FQPCR檢測HCVRNA的檢出率分別為7582％6991和6264％5791；18例抗HCV陰性標本經(jīng)PCRBHEL和FQPCR均未檢出HCVRNA，兩種檢測方法的差異無統(tǒng)計學意義P＞005。結(jié)論PCRBHEL較RTPCR的靈敏度高，能夠有效地提高HCVRNA的檢出率，可推廣應用于其他血液傳染性病毒的檢測。

簡介：分類號R74941UDC616密級公玨編號10299S0813008江薛大擎碩士學位論文重復經(jīng)顱磁刺激治療對單相抑郁癥患者認知功能影響的對照研究COMPARATIVESTUDYFOREFFECTSOFREPETITIVETRANSCRANIAIMAGNETICSTIMULATIONRTMSONCOGNITIVEFUNCTIONINUNIPOLARDEPRESSION作者姓名張永珍指導教師孫劍教授申請學位碩士學科專業(yè)精神病與精神衛(wèi)生學論文答辯日期2011年6月3日學位授予單位江蘇大學學位授予日期答辯委員會主席嚴進評閱人獨創(chuàng)性聲明|嬲嬲必一一本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的內(nèi)容以外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名殲鄉(xiāng)B期參矽F，年占只弓EL

簡介：目錄中文摘要1英文摘要4符號說明7第一部分ADS、COGL2在血管源性輕度認知障礙篩查中的應用對比研究8前言8刖吾研究對象與方法10結(jié)果16討論23結(jié)論29參考文獻30第二部分經(jīng)ADS、COGL2篩查的VMCI患者1HMRS特點研究箭F’言”33日J百JJ研究對象與方法34結(jié)果36討論42結(jié)論44泰山醫(yī)學院碩士學位論文血管源性輕度認知障礙的AD8、COGL2篩查及1HMRS特點研究研究生孔艷專業(yè)神經(jīng)病學導師張金濤教授中文摘要研究目的1通過對認知正常者、血管性癡呆VASCULARDEMEMIA，VD和血管源性輕度認知障礙VASCULARMILDCOGNITIVEIMPAIRMENT，VMCI患者進行一系列神經(jīng)心理學量表測驗，探討AD8ALZHEIMERDISEASE8、COGL2COGNITIVEIMPAIRMENTASSESSMENTSCALE12在VMCI篩查中的應用價值。2通過對VMCI患者和認知正?；颊哌M行質(zhì)子磁共振波譜PROTONMAGNETICRESONANCESPECTROSCOPY，1HMRS檢查，探討經(jīng)AD8、COGL2篩查的VMCI患者‘HMRS特點。研究方法第一部分以2012年2月至2014年2月因腦血管病或腦血管病危險因素在中國人民解放軍第八十八醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科門診就診或住院的患者為研究對象。研究對象分為三組正常對照NORMALCONTROL，NC組、VD對照組和VMCI組。對所有研究對象進行ADS、COGL2等一系列神經(jīng)心理學量表的檢測，分析比較不同組問量表評分，研究量表的敏感度和特異度。第二部分對第一部分中年齡大于50歲的VMCI患者和NC組患者進行顱腦核磁共振MAGNETICRESONANCEIMAGINE，MRI平掃，剔除有大面積腦梗死、關(guān)鍵部位腦梗死如額葉、丘腦、海馬等以及彌漫性腦白質(zhì)病變者，對符合條件者進行1HMRS檢查，取雙側(cè)的額葉、顳葉、丘腦和海馬為感興趣區(qū)REGIONOFINTEREST，ROD，以N一乙酰天冬氨酸NACETYLASPARTATENAA、膽堿復合物CHOLINE，CHO、肌酸復合物CREATINE，CR為觀察指標，計算上述部位NAA／CR、CHO／CR值，分析兩組間及組內(nèi)左右兩側(cè)不同部位NAA／CR、CHO／CR值的變化，探討波譜早期檢測VMCI的價值。并1

簡介：該研究旨在建立一種檢測不同動物HEV抗體的ELISA方法調(diào)查不同動物對HEV的易感性探討HEV抗體對不同重組抗原的反應性主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下一、動物HEVF2基因的克隆和表達用逆轉(zhuǎn)錄巢式PCRRTPCR擴增HEV新西蘭豬病毒株NZSF2的部分基因片段并克隆到PGEX4T2載體上用雙酶切和測序的方法進行鑒定然后用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109IPTG誘導表達P166NZS親和層析純化表達產(chǎn)物并用PAGE電泳進行鑒定雙酶切鑒定和測序的結(jié)果說明目的基因正確連接到載體上電泳結(jié)果證實P166NZS成功表達而且所表達的重組蛋白純度高二、用多基因型的HEV重組蛋白建立雙抗原夾心法ELISADSELISA用P166MIX和HRP標記的P166MIX建立DSELISA用DSELISA檢測3只實驗感染HEV的靈長類動物系列血清結(jié)果顯示3只實驗動物感染HEV之前和感染后短時間內(nèi)HEV抗體陰性23月后陽轉(zhuǎn)說明新建立的DSELISA方法可以用于感染不同基因型HEV的不同動物血清HEV抗體的檢測三、與人類生活關(guān)系密切的7種動物血清HEV抗體和HEVRNA的檢測用血清學和PCR方法研究與人類生活關(guān)系密切的7種動物對HEV的易感性結(jié)果發(fā)現(xiàn)在豬、家犬和寵物狗血清標本中存在HEV抗體警犬、山羊、雞、鴨、鴿子和兔血清標本中未檢測到HEV抗體犬血清標本用RTNPCR未擴增出HEVRNA表明用多基因型HEV重組蛋白建立的雙抗原夾心法ELISA適用于多種動物血清標本HEV抗體的檢測豬和犬對HEV易感在HEV傳播中可能起重要作用四、人和動物血清抗HEV抗體血清學關(guān)系的研究將代表四種基因型的HEV重組蛋白分別包被酶標板對實驗感染HEV的靈長類動物血清以及部分HEV抗體陽性的人和動物血清標本進行檢測分析人和動物血清HEV抗體對不同HEV重組蛋白反應性的差異結(jié)果顯示用與所感染HEV病毒株相同基因型的重組蛋白檢測效果最好P166PAK對部分感染第Ⅳ基因型HEV病毒株的實驗動物血清缺乏反應性大部分病人和動物血清標本用P166NZS和P166CHI檢測效果較好部分標本對P166PAK和P166MEX反應性較差提示人和動物HEV抗原性存在交叉但與基因型有關(guān)人HEV第1基因型重組蛋白會對部分感染HEV第Ⅳ基因型病毒株的個體所產(chǎn)生的抗體缺乏反應性我們的研究結(jié)果表明用人和動物的多基因型和亞型的HEV重組蛋白建立的檢測HEV抗體的雙抗原夾心法ELISA適用于感染不同基因型HEV病毒株的不同動物血清HEV抗體的檢測豬和犬對HEV易感它們在HEV傳播過程中可能起了重要作用HEV抗體對不同基因型HEV重組蛋白的反應性有差別用與所感染的HEV病毒株屬于同一個基因型的重組蛋白作為檢測抗原最佳第Ⅰ基因型重組蛋白對部分第Ⅳ基因型HEV病毒株感染所產(chǎn)生的抗體缺乏反應性單用第Ⅰ基因型重組蛋白作為檢測抗原容易造成漏診多基因型HEV重組蛋白混合物是HEVELISA診斷檢測抗原的最佳候選

簡介：空心蓮子草ALTERNAATHERAPHILOXEROIDESMARTGRISEB為莧科AMARANTHACEAE蓮子草屬ALTERNANTHERA多年生宿根草本植物，具有清熱解毒、涼血利尿的功效。用于治療蕁麻疹、流行性感冒等病毒性疾患。在前人對空心蓮子草藥理作用和臨床療效的研究基礎上，本論文對空心蓮子草脂溶性成分抗病毒物質(zhì)基礎以及藥材質(zhì)量分析進行了相關(guān)研究。采用溶劑法和色譜法對該植物的有效部位進行了提取分離，從中分離到20個單體成分，鑒定了其中19個化合物，其中化合物11個化合物為首次從空心蓮子草和蓮子草屬植物中分離得到。以抗人流感病毒HIV和抗乙肝病毒HBV為篩選指標，對空心蓮子草提取部位進行了抗病毒活性篩選研究。溶劑法萃取的石油醚提取物對HIV和HBV均具有明顯作用；從石油醚部位分離得到的化合物中，化合物Ⅴ和Ⅵ混合物抗HBV效果明顯，化合物Ⅱ、ⅡⅢ、ⅩⅧ和ⅩⅨ有一定的活性作用。在空心蓮子草有效成分研究基礎上，對該藥用植物的性狀、鑒別、檢查、含量測定等進行了較系統(tǒng)研究，制定了較為明確的質(zhì)量標準，以其主要有效成分齊墩果酸為指標的薄層色譜鑒別方法具有較強的專屬性，所建立的含量測定方法具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、可靠性強的特點，從而為制定空心蓮子草藥材的質(zhì)量標準奠定了基礎。

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文攜帶鼠白介素12基因的可調(diào)控腺病毒治療胃癌的實驗研究姓名陳堅申請學位級別博士專業(yè)外科學（普外）指導教師方國恩薛緒潮20070401

簡介：點擊查看更多辛伐他汀干預小鼠急性病毒性心肌炎的實驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：中圖分類號BZ壘25UDC61O博士學位論文學校代碼Q533密級坌玨帕金森病認知功能障礙及遺傳易感性研究COGNITIVEIMPAIRMENTANDGENETICSUSCEPTIBILITYIN1一O’1‘1ARKINSON7SDLSEASE作者姓名學科專業(yè)研究方向?qū)W院系、所指導教師王雅琴神經(jīng)病學帕金森病湘雅醫(yī)院唐北沙教授論文答辯ET期塑竺蘭鄉(xiāng)答辯委員會主中南大學二O一四年五月◆本研究由以下基金聯(lián)合資助1國家重點基礎研究發(fā)展計劃“973計劃”NO2006CB500700，2011CB5100002國家“863’’高科技研究發(fā)展計劃項目NO2006AA02A4083重大研究計劃“情感與記憶的神經(jīng)環(huán)路基礎”NO912320004國家自然科學基金項目NO30770735，30971035，30900469◆本研究部分工作在中國醫(yī)學遺傳學國家重點實驗室完成II

簡介：A型流感病毒INFLUENZAVIRUSA屬于正粘病毒科，流感病毒屬基因組為單股負鏈RNA，含有大小不同的8個獨立的RNA片段，其中非結(jié)構(gòu)蛋白1NONSTRUCTURALPROTEIN1，NS1由第8條RNA編碼的，相對分子量約為26KDA，含有230237AA。NS1在病毒粒子內(nèi)不存在，僅存在于病毒感染的細胞中。在WSN感染早期，NS1主要聚集在感染細胞的核內(nèi)，但在晚期主要定位在細胞質(zhì)中。NS1主要有兩個結(jié)構(gòu)域，N末端的RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)RNABINDINGDOMAIN，RBD，主要與各類RNA結(jié)合C末端的效應結(jié)構(gòu)域EFFECTDOMAIN，參與同宿主細胞內(nèi)各種蛋白質(zhì)相互作用。NS1是一種多功能蛋白質(zhì)，通過與宿主蛋白的相互作用以實現(xiàn)病毒逃逸天然免疫功能，包括RIGⅠ、TRIM25、IKK、CPSF30、PABPⅡ、EIF4GI、PABPI和PKR等以及NS1同病毒復制中間體RNA結(jié)合，阻斷宿主模式識別受體PRR識別病原相關(guān)分子模式PAMP，通過與這些作用，NS1可以抑制宿主蛋白轉(zhuǎn)錄翻譯，調(diào)節(jié)細胞凋亡，以實現(xiàn)病毒的高效復制和感染。病毒與宿主免疫系統(tǒng)之間的相互作用的結(jié)果決定了病毒感染的進程。一方面，宿主細胞受到病毒的感染后會很快啟動一系列的抗病毒免疫反應，抑制病毒的復制和病毒蛋白的合成另一方面，病毒自身許多蛋白具有拮抗宿主細胞抗病毒免疫作用的功能，以利于病毒在宿主體內(nèi)的復制和再感染。流感蛋白編碼的NS1就具有拮抗宿主細胞抗病毒作用的功能，能與多種宿主因子發(fā)生相互作用，抵抗宿主的免疫防御作用。除對抗宿主免疫系統(tǒng)外，NS1蛋白還能促進病毒自身的復制和翻譯效率。NS1蛋白與VRNP復合物中NP蛋白的相互作用促進了病毒的復制NS1蛋白通過與宿主EIF4GI的相互作用募集了翻譯起始因子到病毒的MRNA上，有效提高了病毒蛋白的翻譯水平。本研究通過磷酸化質(zhì)譜實驗鑒定了WSN毒株NS1上的磷酸化位點，對這些位點進行各種點突變置換，以確定其功能。在十二質(zhì)粒系統(tǒng)BEN8質(zhì)粒（表達NS1蛋白）構(gòu)建各種點突變，然后進行病毒拯救，發(fā)現(xiàn)不同位點的點突變T80E和S83D所產(chǎn)生的病毒滴度和病毒生長曲線與WT相比存在一定差異。通過在PCMVMYC載體上構(gòu)建各種點突變體，證明了在真核細胞水平，這些位點的點突變均沒有改變NS1蛋白的細胞定位。REALTIMEPCR實驗顯示突變體T80E和S83D對于IFN的抑制作用較NS1WT有所減弱通過NS1蛋白與POLYU的結(jié)合實驗，發(fā)現(xiàn)突變體T80E的NS1蛋白與RNA的親和力存在差異。推測是由于T80E與RNA結(jié)合力的減弱導致宿主模式識別受體PRMP對病毒復制過程中產(chǎn)生的RNA結(jié)合增強，因此突變體T80E對IFN的抑制效果減弱。NS1蛋白的磷酸化修飾調(diào)控影響了流感病毒的復制效率，以及病毒與宿主的相互作用。通過對NS1蛋白磷酸化的研究，我們進一步了解了病毒與宿主蛋白的相互作用，以及其在NS1抑制天然免疫中發(fā)揮的功能。