新型Harpin泡騰片劑型的研制及其防治玉米細(xì)菌新病害的研究.pdf

1、Harpin是革蘭氏陰性植物病原細(xì)菌產(chǎn)生的具有非寄主?；约ぐl(fā)子功能的蛋白質(zhì)，其編碼基因?yàn)閔rp基因簇成員。Harpin類激發(fā)子具有相似的生化特征:富含甘氨酸(Gly)，不含半胱氨酸(Cys)，熱穩(wěn)定，對(duì)蛋白酶敏感。Harpin具有顯著的誘導(dǎo)植物抗蟲、抗病、抗旱扣促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育等多種生物學(xué)效應(yīng)。本研究旨在研制新型Harpin蛋白泡騰片劑型，檢測(cè)泡騰片劑型的穩(wěn)定性和生物學(xué)活性，以及研究該劑型防治玉米細(xì)菌新病害的防治效果，為Harpin蛋

2、白生物農(nóng)藥的應(yīng)用提供基礎(chǔ)。
　　在本實(shí)驗(yàn)中，用0.1mM的IPTG來誘導(dǎo)重組菌株BL21/pET30a(+)-hrf2表達(dá)Harpin蛋白，經(jīng)直接煮沸破碎法和超聲波破碎法兩種不同方法獲得Harpin粗蛋白溶液。對(duì)經(jīng)超聲波破碎法獲得的粗蛋白溶液進(jìn)行脫鹽提純處理，獲得純蛋白。將Harpin粗蛋白和純蛋白進(jìn)行超低溫冷凍干燥后，采用酸堿分開制粒壓片法制成粗蛋白泡騰片和純蛋白泡騰片。通過三個(gè)不同時(shí)期對(duì)純蛋白Harpin泡騰片和粗蛋白Harp

3、in泡騰片的蛋白濃度和蛋白活性的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，純蛋白Harpin泡騰片的效果遠(yuǎn)不如粗蛋白Harpin泡騰片，可能與Harpin純蛋白壓成泡騰片后吸濕嚴(yán)重，導(dǎo)致蛋白降解有關(guān)。故在后期的防治效果檢測(cè)中，我們只使用了Harpin粗蛋白泡騰片進(jìn)行了防治效果的檢測(cè)。
　　研究中發(fā)現(xiàn)，我們從河北四個(gè)地區(qū)（武邑、獻(xiàn)縣、阜城和永年）采集到的玉米病害植株中分離得到了3種主要細(xì)菌，根據(jù)16s rDNA的比對(duì)結(jié)果鑒定為Pantoeaananatis、Pan

4、toea dispersa和Pantoea agglomerans，而根據(jù)gyrB基因的比對(duì)結(jié)果鑒定為Pantoea ananatis和Pantoea dispersa，目前還未報(bào)道由Pantoea dispersa引起的玉米病害。根據(jù)科赫氏法則的驗(yàn)證步驟，證明了分離得到的Pantoea ananatis和Pantoeadispersa為河北玉米新病害的致病菌。且溫室實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Pantoea dispersa較Pantoeaananati