冰片(+Borneol)對脊柱腫瘤術(shù)后病人切口疼痛的鎮(zhèn)痛作用及其分子生物學機制研究.pdf

1、近年來隨著生活環(huán)境的變化和醫(yī)療水平的提高，人們獲得更長生存期的同時腫瘤的發(fā)生概率也越來越高。在臨床上越來越容易遇到脊柱腫瘤和腫瘤脊柱轉(zhuǎn)移的病人。脊柱腫瘤的手術(shù)一般范圍較大，病人術(shù)后切口疼痛明顯，是困擾臨床的一個常見難題。術(shù)后切口疼痛會造成病人藥物上癮，止痛藥物濫用等諸多社會問題。因而是否能夠用更溫和的中醫(yī)藥方法治療術(shù)后切口的疼痛，替代現(xiàn)有的一些鎮(zhèn)痛治療方法有著重要的臨床意義。
　　瞬時受體電位通道（transient recept

2、or potential channels）是一組主要位于生物細胞膜上的離子通道，可被多種物理和化學刺激激活，參與多種生理和病理過程，其中許多通道與疼痛產(chǎn)生或抑制有關(guān)。TRPM8是近年發(fā)現(xiàn)的溫度感受相關(guān)離子通道，可以被低溫(＜25℃)激活，因此又被稱為“冷受體”。TRPM8為一同源四聚體，由四條相同的6次跨膜結(jié)構(gòu)組成(S1-S6)。S1-S4作為電壓感受器并且可以與某些化學物質(zhì)結(jié)合。S5-S6與之間的環(huán)，成為通道孔洞的一部分，允許多種陽

3、離子通過。溫度或者化學激活TRPM8可以調(diào)控疼痛感受，抑制痛覺過敏，但是其機制不清楚。
　　天然冰片是從樟科植物中獲得的近乎純粹單體的有機化合物結(jié)晶，其化學成分是右旋龍腦((+)-Borneol），屬于小分子萜類。天然冰片在臨床上的應用超過兩千年，傳統(tǒng)中醫(yī)實踐以及現(xiàn)代的臨床和生物醫(yī)學研究都表明冰片具有良好的鎮(zhèn)痛作用，但其在體內(nèi)作用的分子靶點從未被發(fā)現(xiàn)，分子細胞機制尚未被闡明。本實驗用多種實驗方法再次驗證了冰片的鎮(zhèn)痛作用。通過多種電

4、生理實驗和動物實驗進一步研究了其鎮(zhèn)痛機制。本課題首次從分子、細胞、組織和動物水平探討了冰片激活TRPM8通道的分子機制，系統(tǒng)研究冰片對不同類型疼痛的作用以及TRPM8及其下游受體通路在冰片鎮(zhèn)痛中的作用和機制。本課題的開展將為認識冰片鎮(zhèn)痛的分子細胞機制以及TRPM8對疼痛的調(diào)控作用提供科學依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　目的:研究傳統(tǒng)中藥冰片鎮(zhèn)痛作用的分子生物學機制
　　方法:通過臨床實驗和動物實驗證明冰片具有良好的鎮(zhèn)痛作用。利用膜片鉗

5、、鈣熒光成像等電生理實驗技術(shù)篩選冰片對一些疼痛相關(guān)離子通道是否有激活或抑制作用。體外培養(yǎng)DRG神經(jīng)元，利用鈣成像技術(shù)檢測冰片對部分DRG神經(jīng)元的作用，進而推測冰片作用的離子通道。通過基因突變的方法研究冰片作用相關(guān)位點。采用鞘內(nèi)注射的方式，利用一些重要疼痛相關(guān)下游受體特異性抑制劑，進一步探索冰片與下游疼痛機制的關(guān)系。
　　結(jié)果:本實驗通過臨床實驗和動物實驗的方法再次證明了冰片確實具有良好的鎮(zhèn)痛作用，且鎮(zhèn)痛作用強弱與其濃度大小相關(guān)。通

6、過活細胞鈣熒光成像實驗篩選了一些疼痛相關(guān)離子通道，發(fā)現(xiàn)冰片能夠特異性激活外源性表達在HEK293細胞上的TRPM8通道和內(nèi)源性表達在小鼠背根節(jié)(DRG)神經(jīng)元中的TRPM8通道;將人的TRPM8通道外源性表達在HEK293細胞中，運用膜片鉗技術(shù)發(fā)現(xiàn)TRPM8通道介導的電流也能夠被冰片激活。通過冰片和已知的TRPM8激動劑薄荷醇的比較發(fā)現(xiàn)，冰片的鎮(zhèn)痛作用和薄荷醇相近，但其導致冷過敏的副作用更小。通過鞘內(nèi)注射的方式發(fā)現(xiàn)，冰片的鎮(zhèn)痛作用可能與