分子生物學(xué)方法在鑒別魚糜制品原料魚種中的應(yīng)用.pdf

1、隨著我國水產(chǎn)加工業(yè)的發(fā)展，特別是魚糜制品產(chǎn)量的不斷增加，水產(chǎn)加工原料的品質(zhì)控制變得尤為重要。為了保護(hù)某些種群，確保食品生產(chǎn)嚴(yán)格遵照規(guī)范進(jìn)行，同時避免假冒現(xiàn)象，保護(hù)消費者權(quán)益，水產(chǎn)制品中魚種的鑒別已經(jīng)成為消費者和質(zhì)量檢測部門共同關(guān)注的熱點。 鑒于魚糜制品水產(chǎn)加工程度較高，經(jīng)各工序如高溫、切割、添加調(diào)料和色素等處理后，已很難通過形態(tài)、味覺等常規(guī)感官鑒定方法對其魚種進(jìn)行準(zhǔn)確的辨別，而對于食品中原料成分的鑒定，我國至今還缺乏相關(guān)的檢測標(biāo)

2、準(zhǔn)。因此，必須盡快摸索建立一條有效、實用的魚種鑒定技術(shù)。 本文探索了利，用分子生物學(xué)技術(shù)來檢測魚糜制品中原料魚種，通過PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))方法，對水產(chǎn)品mt-DNA中的16SrRNA基因片段進(jìn)行測序，對魚種進(jìn)行鑒別。本文先對新鮮的活魚通過上面的方法進(jìn)行了鑒定，通過比對，發(fā)現(xiàn)實驗所得序列與基因庫中的序列相吻合，說明該法用于魚種鑒別是可行的。然后以食品學(xué)院自制的白鰱魚丸及超市購買回來的含有兩種組分的鱈魚丸、章魚餅和國外蟹柳作為原

3、料，采用普通酚-氯仿抽提法進(jìn)行基因組DNA提取、選用16SrRNA基因作為目的基因，利用16Sar(L2510)CGCCTGTTTATCAAAAACAT和16Sbr(H3080)CCGGTCTGAACTCAGATCACGT兩條序列作為引物，對16S rRNA進(jìn)行：PCR擴(kuò)增、克隆、測序，從而獲得原料產(chǎn)品的16S rRNA基因部分片段序列，通過運用BLAST。軟件，將16S rRNA部分片段序列和Genbank中更多的序列進(jìn)行比較，找到相

4、似性最高的序列，根據(jù)同源性理論，做出魚種鑒定。 通過實驗，本文確立了魚糜制品基因組DNA的提取方法、優(yōu)化了PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系、PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件。對最終測序獲得的16S rRNA基因部分片段序列，運用clustwal w軟件進(jìn)行序列比對時發(fā)現(xiàn)：自制白鰱魚丸的16S rRNA基因部分片段序列與白鰱肌肉的保持一致。而對于超市買回的魚糜制品(含有豬肉和魚糜)，運用BLAST軟件，將獲得的序列與Genbank中的序列進(jìn)行同源性比較時，結(jié)