HPV感染與頭頸部鱗癌的相關性以及對腫瘤預后的影響.pdf

1、[背景]
　　 頭頸部腫瘤的發(fā)生和基因遺傳、吸煙、病毒感染等多種因素有關。人乳頭瘤病毒(HPV)高危型(16/18亞型)感染與頭頸部鱗狀細胞癌,尤其是口咽鱗狀細胞癌的發(fā)生密切相關。HPV誘發(fā)腫瘤產(chǎn)生的機制,已從分子層面得到逐步闡明。HPV相關的口咽鱗狀細胞癌,致癌機制不同于致癌物質(zhì)所致的鱗狀細胞癌,具有分化差但預后好的臨床特點,是一種特殊類型的腫瘤,在診斷和治療方面可能有別于HPV陰性的口咽鱗狀細胞癌。國內(nèi)雖已有少量HNSCC和

2、HPV感染相關的研究,但存在諸多局限性。例如,未能準確評價HPV感染的狀態(tài),未能同時對腫瘤組織中Ki-67蛋白、p53蛋白、p16蛋白的表達及它們之間的相關性進行探討,很少有研究對HPV感染和腫瘤預后之間的關系進行評價。
　　 [目的]
　　 (1)研究人頭頸部鱗狀細胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)組織中人乳頭狀瘤病毒(human papilloma viru

3、s,HPV)感染發(fā)生率。評價實時熒光定量PCR方法(Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR)與原位雜交方法(in situhybridization,ISH)在測定人頭頸部鱗狀細胞癌(head and neck squamous cellcarcinoma,HNSCC)組織中人乳頭狀瘤病毒(human papilloma virus,HPV)的差異。
　　 (2)探討HPV16

4、/18 DNA陽性與頭頸部鱗癌患者的臨床指標及Ki-67蛋白、p53蛋白表達、p16蛋白表達的相關性。
　　 (3)評價HPV16/18 DNA陽性、飲酒、吸煙、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ki-67蛋白、p53蛋白表達、p16蛋白表達、腫瘤分期等危險因素,對頭頸部鱗狀細胞癌患者預后的影響。
　　 [方法]
　　 (1)基礎研究:對78例HNSCC患者的術后石蠟包埋的腫瘤組織,采用熒光定量PCR方法,測定腫瘤組織中HPV16/1

5、8 DNA的含量；采用原位雜交的方法測定腫瘤組織中是否存在HPV16 DNA及HPV18 DNA。采用免疫組化的方法,測定這些患者腫瘤組織中Ki-67、p53、p16蛋白的表達。
　　 (2)臨床研究:收集患者的臨床資料,包括性別、年齡、臨床腫瘤分期、吸煙和飲酒史、治療措施(手術、放療和化療)和生存時間。
　　 (3)統(tǒng)計學方法:應用Kappa一致性檢驗的方法,評價兩種方法檢測HPV DNA之間的一致性。應用Spearm

6、an相關分析和x2分析的方法,評價HPV16/18 DNA陽性和腫瘤組織中Ki-67、p53、p16蛋白表達及與各項臨床指標的相關性。應用多因素COX回歸分析,評價HPV16/18DNA陽性、Ki-67蛋白、p53蛋白、p16蛋白、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、性別、年齡、吸煙和飲酒史等對生存時間的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 (1)HPV感染的發(fā)生率:78例頭頸部鱗癌患者,應用RT—PCR方法62.8％患者頭頸部鱗癌組織中

7、檢測到HPV16/18 DNA,應用原位雜交方法47.4％患者腫瘤組織中檢測到HPV16DNA。此外,用原位雜交的方法,有1.28％(1例)患者檢測到HPV18 DNA,該患者同時原位雜交方法檢測HVP16DNA陽性。用RT—PCR方法,唇、口腔、口咽、下咽的HPV16/18DNA陽性率分別為33.3％、66.67％、70％和57.14％,不同部位的HPV陽性率無顯著性差異(P均>0.05)；用原位雜交方法,唇、口腔、口咽、下咽的HPV

8、16 DNA陽性率分別為33.3％、43.8％、60.0％和57.1％,不同部位的HPV陽性率無顯著性差異(P均>0.05)?？傮w上,兩種方法在檢測HPV16/18DNA方面具有較高一致性(Kappa一致性檢驗,Kappa=0.595,P=0.000),但存在部位差異:在唇和下咽部位,兩種方法檢測結(jié)果的一致性較高(Kappa值均為1,P分別為0.067和0.000)。在口咽部位,兩種方法檢測結(jié)果的一致性較差(Kappa=0.348,P=

9、0.5)。
　　 (2)免疫組化:患者腫瘤組織Ki-67的表達水平在2％～70％之間,46.15％(36/78)的患者腫瘤組織表達p53蛋白,30.77％(24/78)患者腫瘤組織表達p16蛋白。
　　 (3)相關性分析:HPV16/18DNA陽性(RT—PCR與ISH兩種方法)與患者的性別、吸煙、飲酒、臨床分期、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無顯著性相關(P均>0.05),與病理學分級呈正相關(P分別為0.001和0.000),

10、即病理分化差的人群中,HPV16/18DNA陽性率更高。在口咽+下咽癌組患者中,HPV16/18DNA陽性與p53蛋白表達呈負相關(P分別為0.011和0.017),即HPV16/18DNA陽性組患者的腫瘤組織,p53蛋白表達減少。在G3低分化患者中,HPV16/18DNA陽性組患者腫瘤組織,p53蛋白表達減少(P分別為0.002和0.022)。HPV16/18DNA是否陽性與Ki-67表達無相關(P>0.05)。HPV16/18DNA

11、陽性組腫瘤組織的p16蛋白表達減少(P分別為0.026和0.023)。p16表達與p53表達呈正相關(P=0.044),與Ki67表達呈負相關(P=0.047)。
　　 (4)生存和多因素預后分析:78例患者中,6例患者術后即失訪,其余患者中位隨訪21.5個月,隨訪終點為患者死亡或至2010.9最后一次隨訪。
　　 ①根據(jù)RT—PCR測定方法,HPV16/18DNA陰性和陽性組患者的中位生存時間分別為25個月和44個月(

12、P=0.508)。
　　 ②根據(jù)原位雜交方法,HPV16 DNA陰性和陽性組患者的中位生存時間分別為28個月和30個月(P=0.631)。
　　 ③根據(jù)p16蛋白表達狀態(tài)對患者的生存時間進行分析,p16陰性組的中位生存時間30個月,陽性組尚未出現(xiàn)中位生存時間。
　　 ④根據(jù)患者腫瘤組織病理學級別,我們將患者分為高分化(G1)、中分化(G2)和低分化(G3)三組,分析HPV16/18感染狀態(tài)對生存的影響。在高分化(

13、G1)組患者中,HPV陰性和陽性組,均未得到中位生存時間；在中分化組(G2)患者中,HPV陰性和陽性患者的中位生存時間分別為18和27個月(P=0.129)；在低分化組(G3)患者中,HPV陰性和陽性患者的中位生存時間分別是15和44個月(P=0.098)。
　　 ⑤按腫瘤發(fā)生部位把患者分成唇+口腔組和口咽+下咽組。唇+口腔組的患者中,HPV16/18DNA陰性組及陽性組的中位生存時間分別為28和44個月(P=0.593)；口咽

14、+下咽組的患者中,HPV16/18DNA陰性組和陽性組的中位生存時間分別為25個月和28個月(P=0.696)。
　　 ⑥按腫瘤總分期把患者分為2組,早期組(0期+Ⅰ期+Ⅱ期)和晚期組(Ⅲ期+Ⅳ期):早期組患者中,HPV16/18DNA陰性組的中位生存時間為28個月,陽性組尚未得出中位生存時間(P=0.553)；晚期組患者中,HPV16/18DNA陰性組和陽性組的中位生存時間分別為18和30個月(P=0.770)。
　　

15、 ⑦按年齡不同,把患者分成<50歲組和≥50歲組。在<50歲組的患者中,HPV16/18DNA陰性組和陽性組的中位生存時間分別為25和35個月(P=0.601)；在≥50歲組的患者中,HPV16/18DNA陰性組和陽性組的中位生存時間分別為28和44個月(P=0.595)。
　　 ⑨多因素COX回歸分析顯示,影響患者預后的主要危險因素為Ki-67表達(RR2.341,P=0.012)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(RR1.049,P=0.007)

16、,而HPV16/18DNA是否陽性并不是影響患者預后的主要因素(RR1.012,P=0.547)。
　　 [結(jié)論]頭頸部鱗癌組織中HPV感染發(fā)生率RT—PCR方法檢測為62.8％,HPV16/18原位雜交方法檢測為47.4％,兩種方法檢測HPV感染的一致性很高?？谘拾〩PV陽性率最高。HPV感染相關的HNSCC與病理分化更差有關。p16表達和p53表達相關,和Ki-67蛋白表達呈負相關。單因素分析顯示HPV16/18DNA陽性患