番茄潰瘍病菌LAMP檢測系統(tǒng)的建立及Z-L-22對該病害的防治效果.pdf

1、番茄潰瘍病(Bacterial canker of tomato)是番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)生產(chǎn)中最為嚴重的細菌病害之一，病原菌為密執(zhí)安棒狀桿菌密執(zhí)安亞種（Clavibactermichiganensis subsp.michiganensis，Cmm）。該病自從1910年首次在美國密執(zhí)安州的溫室番茄上發(fā)現(xiàn)以來，發(fā)生頻繁，現(xiàn)已廣泛分布于世界各番茄產(chǎn)區(qū)。近年來該病害在我國的發(fā)生呈上升趨勢。Cmm可

2、隨帶病種子、病苗、病殘體及土壤傳播，形成初侵染，國內(nèi)外尚無防治該病的有效方法。已報道的一些措施僅局限在一定程度上控制病害的發(fā)生和蔓延。因此建立靈敏可靠的檢測措施和開發(fā)有效的防治方法對于控制該病害的發(fā)生和發(fā)展有重要的意義。本研究建立了番茄潰瘍病菌基于ITS序列的LAMP快速檢測方法，并對番茄潰瘍病菌拮抗菌株西唐鏈霉菌Z-L-22對病害的防治效果進行了研究。
　　1、以SYBR GreenⅠ為指示劑，建立了番茄潰瘍病菌的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增

3、可視化快速檢測方法。根據(jù)番茄潰瘍病菌特異的核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列設(shè)計了4條引物進行LAMP擴增，通過對體系中各成分進行優(yōu)化，最終確定25μL反應(yīng)體系中模板200 ng，MgSO4的適宜濃度為3.0 mmol/L，Bst DNA聚合酶2U，dNTPs的適宜濃度為0.3mmol/L，外引物與內(nèi)引物之比為1∶3時擴增效果較好，在65℃最佳反應(yīng)時間為40 min。在優(yōu)化的體系條件下，獲得的反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)SYBR GreenⅠ染色后肉眼觀察檢測靈敏度可

4、達到50 cfu/mL，優(yōu)于瓊脂糖凝膠電泳檢測靈敏度(500 efu/mL)，且對番茄潰瘍病菌的檢測具有高度的特異性。結(jié)果表明，該方法快速、準確、靈敏、特異，具有良好的實用性。
　　2、以一株對番茄潰瘍病防治效果良好的西唐鏈霉菌菌株(Streptomyces setonii)Z-L-22為研究對象，開發(fā)出三種應(yīng)用劑型—發(fā)酵液、發(fā)酵固體和片劑，并在溫室和田間分別開展了對番茄潰瘍病的防治。溫室試驗結(jié)果表明，10×發(fā)酵液稀釋液、固體發(fā)酵