基于水凝膠光子晶體微球低背景化學(xué)發(fā)光技術(shù)在農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素檢測(cè)中的應(yīng)用研究.pdf

1、本文是基于水凝膠光子晶體微球和化學(xué)發(fā)光法建立的一套用于農(nóng)產(chǎn)品中真菌毒素的多重檢測(cè)方法。本文研究的主要內(nèi)容包括水凝膠微球的自組裝、水凝膠微球的表征、水凝膠微球表面的化學(xué)修飾、單重檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中伏馬毒素B1的條件優(yōu)化及其標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立和回收率的測(cè)定、多重檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中伏馬毒素B1、黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A的條件優(yōu)化及其標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立和回收率的測(cè)定、用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中真菌毒素的回收率。
　　用水凝膠液填充SiO2三維光子晶

2、體微球內(nèi)部空隙，使微球內(nèi)部成為實(shí)心即得到水凝膠光子晶體微球。再利用掃描電子顯微鏡、光纖光譜儀對(duì)水凝膠微球進(jìn)行表征。然后在水凝膠微球表面進(jìn)行化學(xué)修飾，增強(qiáng)其與生物分子的結(jié)合能力。
　　水凝膠光子晶體微球不僅具有表面積大的優(yōu)勢(shì)，還因其內(nèi)部是實(shí)心可以避免非特異性吸附，從而使得檢測(cè)的背景信號(hào)低，靈敏度更高，信號(hào)誤差更小。在伏馬毒素B1的單重檢測(cè)中優(yōu)化條件為:抗原包被緩沖液為pH=9.6的碳酸鹽緩沖液，抗原包被濃度為1000ng/mL，一抗

3、稀釋比率為1∶30000，HRP-IgG稀釋比率為1∶6000。用本法做線性回歸分析得線性范圍為0.0001-1ng/mL，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=-4037.89x+927.36，R2=0.997。之后對(duì)伏馬毒素B1單克隆抗體的特異性進(jìn)行了探究，結(jié)果顯示特異性強(qiáng)，與伏馬毒素B1類似物無(wú)明顯交叉反應(yīng)。將不同濃度的伏馬毒素B1添加到三種不同谷物中，分別測(cè)定其回收率，其回收率分別為:大米92.30±4.70％-107.59±8.07％、玉米78.91

4、±11.20％-99.70±0.42％、小麥78.60±0.71％-128.45±6.34％。
　　在多重檢測(cè)中，F(xiàn)B1、AFB1、OTA三種毒素的線性范圍為:0.001-10ng/mL、0.0001-1ng/mL和0.0001-1ng/mL。線性方程分別為:y=-2606.027x+3170.360(R2=0.995)、y=-2462.584x+1098.877(R2=0.996)、y=-2839.9661x+2163.278(

5、R2=0.997)。對(duì)大米、玉米和小麥三種農(nóng)產(chǎn)品中分別添加FB1、AFB1、OTA標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行回收率測(cè)定，各真菌毒素回收率分別為，在大米中:FB174.96±5.82％-87.89±8.34％、AFB186.54±7.42％-95.84±8.31％、OTA79.29±4.99％-101.03±7.26％;在玉米中:FB178.95±1.97％-101.41±9.23％、AFB187.27±5.11％-97.07±8.60％、OTA82.7

6、9±4.53％-95.92±8.83％;在小麥中:FB188.56±7.64％-104.87±5.77％、AFB186.53±5.35％-102.80±5.37％、OTA84.59±6.34％-92.84±5.79％。
　　本法與液質(zhì)聯(lián)用法對(duì)比可知，液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)得回收率與本法檢測(cè)結(jié)果基本一致，20份谷物樣品中毒素的檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性方程及相關(guān)性系數(shù)分別為:FB1y=1.105x+0.084(R2=0.945);AFB1y=1.127